对于脂血对生化检测结果的影响大家都略知一二

对于脂血对生化检测结果的影响大家都略知一二，但很少有很系统的资料，在今年的《齐鲁检验医学杂志》上的找到了一篇，并将其整理出来，以便大家交流学习。脂血造成干扰的评估脂血、溶血和黄疸都会对一些以光学为基础的实验室检验产生干扰，但脂血的干扰与溶血（血红蛋白）和黄疸（胆红素）的干扰在根本上有所不同。脂血中，乳糜微粒和极低密度脂蛋白（VLDL）是悬浮着的颗粒，它们的散射光，产生类似于牛奶中见到的云雾和混浊。此时如采用以光传导作为部分检测方法的检验，脂血就可能会造成干扰。通过在样本中加入血红蛋白或胆红素，我们可以评价上述经验方法对黄疸和溶血干扰的敏感性，但脂血的评价却要复杂的多，因为我们目前还难以作到：获得相应的脂类标准参考物，通过添加，制备不同程度的脂血样本。Gkick等报道将一种人工合成的静脉使用乳剂“lntralipib”加入血清中可模似脂血样本，但在本期《临床化学》(ClinicalChem—istr2004；50：2197-2201)中,Bronhorst等指出，添加“ntraLipib”的样本不能真实地模似脂血样本，因为在使用免疫浊度法检测血浆铜蓝蛋白、前清蛋白和铁传递蛋白时，天然的脂血样本会造成检测结果假性偏低，但是加入“lntralipib”的模似脂血样本却不会这样。怎么会产生这种差异以及如何评判在光学法检验中这种差异存在的可能性？首先，让我们来回顾一下与此类检验相关的有关仪器的光散射特征以及天然脂血样本与添加“lntralipib”的模似脂血样本之间在物理化学性质上的区别。当电磁辐射以光的形式与某物质（如脂质微粒）相互作用时，粒子会产生一个偶极矩。偶极矩的大小与电场强度和粒子的极化率成正比。粒子本身不会反射光，光反射的产生是由于溶质（即粒子）和溶剂折射率的不同。极化率与折射率有关，脂质微粒的折射率大多在1.3左右。分光光度法，通过比尔定律A=εbc(ε是摩尔吸光率，b是吸收池的厚度，c是溶液浓度)，将吸光度（A）和浓度联系起来；而吸光度又等于透射强负log(l。/l),l。是入射光强度，l是光穿过吸收池后被检测器检测到的光强度。从吸收池中央进行透视，对着光源方向的角度是0度，对着检测器的角度是180度。在分光光度法中，我们假设检测器测得的光强度减弱是由于样本吸收了部分光能的缘故。光散射存在时，光会向各个方向发散，其散射强度随着角度θ而变化（θ是观测线与X轴之间的夹角），其相对强度可表示为1+cos2(θ).我们可以通过l。/l推算出光透过吸收池后被减少的量，l是散射光强度。通过与吸收光谱的对比，浊度可以被定以为ln(l。/l).只有在光散射强度处在相对较低的状态时，浊度才能与粒子浓度间保持线性关系并通过分光光度检测仪进行分析测定。一旦光散射强度增大就会干扰分光光度法检测。通过分析摸似的“分析物—溶剂”产品，比如分光光度中胆红素的多重干扰，我们确信光散射干扰光电散射强度和比浊分析。基于日常观察，我们知道影响光散射强度的因素有：悬浮在溶液中的粒子数目、粒子大小、折射率（取决于粒子浓度）以及光波波长。相对而言，波长的影响要小一些。考虑到散射角度以及散射粒子与观测间存在距离，我们瑞利比（RayleighRatio,Rθ）来代表光散射的相对比例，它与l。/l直接相关。光散射的强度与粒子分子量（M），粒子浓度（c）折射率（n）、折射增量以及波长的负四幂成正比：RθKn2,其中K是常数。如果我们改变溶中粒子的物理化学性质，比如加入某种试剂它能增加或者减少粒子在溶剂中的溶解度（例如表面活性剂对油脂粒子的影响），那么折射率（n）和折射量就会发生改变。这种变化可以解释为什么在一些而不是全部免疫浊度检测法中存在油脂粒子的干扰，对比，Bomborst等在本期《临床化学》中已作了报道。。光波波长和粒子分子量对于解释上面提到的有关Bornhorst等观察到的“lntralipib”摸似血脂样本间的差异是非常重要的。瑞利散射（Rayleighscattering）使用于直径小于入射光波的粒子。光散射强度与入射光的γ-4有关，因此溶液中粒子散射紫光（400nm）的强度是散射红光（700nm）强度的9倍。分子量是第三大变量，它与密度和粒子半径的立方之积有关。因子随着粒子大小的增加，它们散射光的能力也大大增加。一旦粒子直径达到与入射光的波长接近时，就会导致瑞利散射发生形状改变。变形意味着在接近入射光直角的方向强度减弱，而沿着纵轴的方向强度增大。当粒子（指球状体）直径超过波长的四分之于。即对400nm波长的可见来说，粒子直径大于100nm时，这种变形就会变得异常明显。而且随着粒子直径与光波波长的可见来说，粒子直径大与100nm时，这种变形就会变得异常明显。而且随着粒子直径与光波波长的接近，米氏（Mic）散射将成为主导，瑞利散射退居其次。在米氏（Mic）散射中，随着粒子直径与光波波长的靠近，由于角度依赖性色散（彩虹效应）作用，后散射超过了前散射。各种类型的混合物所呈现的都是白光而不是有色光，这是因为大小不同的粒子以各种不同的方向对光进行散射。脂血的异质性给摸似样品的制备带来了困难。VLDL和乳糜微粒均能有效地散射光而引起浑浊。极低密度脂蛋白（VLDL）的大小存在三种类型：小分子型（27-35nm），中分子型（35-60nm），大分子型（60-200nm）。只有中分子和大分子型在光散射中起重要作用。血浆样品通常只含有少量的大分子VLDL，但在胰岛素耐受和糖尿病患者中，VLDL粒子数增加并导致脂血。乳糜微粒包含有大小范围从70到100nm的粒子群，不同个体间在大小分布和数量上差异很大。由于CLDL和乳糜微粒在大小和甘油三酯浓度与脂血指数之间无明显相关性（测定660和70nm波长处吸收度差异，推算光散射强度）。由于CLDL和乳糜微粒直径范围广泛（50へ1000nm），分子大小变化带来的影响使得分析更加复杂化，最终导致了从瑞利散射向复杂的米氏（Mic）散射的转变。因此，使用单一类型样本所得到的评估结果是不充分的，应当制备宽分子范围的脂血样本。“IntraLipib”不同于极低密度脂蛋白（VLDL）和甘油三酯。它是一种无菌的、非热源性脂肪乳注射液，是由大豆油（200毫升/升）、鸡蛋卵磷脂（12毫升/生）、甘油（22毫升/生）以及水共同组成的平衡体系。其粒子大小范围200nmへ60nm，平均为345nm；不但完全处在大分子VLDL粒子范围之外，也完全处在较低和较高的乳糜微粒分子范围之外，此外，它的折射率接近1.47，也不同于人体内循环脂蛋白。因此，脂血干扰的评估比较特殊，不能象黄疸和溶血那样，通过获得一个简单的化合物（如胆红素或血红蛋白）来模仿体内干扰物的生物化学特征。脂血难以避免。导致脂血的常见原因有糖尿病、乙醇的使用、慢性肾衰、甲状腺机能减退、胰腺炎、多发性骨髓瘤、原发性胆汁性肝硬化、系统性红斑狼疮、全静脉营养输注液以及某些药物，例如蛋白酯抑制剂（用于HIV感染）、刺激素和类胆固醇等。因此，对脂血干扰的评估应当涉及到所有的方法。Bornhorst等研究指出，在使用添加“IntraLipib”（或其它合成乳剂）的摸似脂血样本进行干扰实验时，对研究结果的解释应该谨慎态度。这种样本不可能等同于天然的脂血样本。通常有三种类型的差异可能会发生：天然样本发生干扰而“IntraLipib”不发生干扰；“IntraLipib”样本发生干扰而天然样本不发生干扰；两种类型的样本都存在干扰，但干扰的方位（正或负）和角度有所不同。对脂血干扰作出准确性评估对于临床检验结果的报告是非常重要的。在这类研究中，我们提倡使用包含VLDL和乳糜微粒全部分子大小范围的天然脂血样本。