微生态制剂--禽温康对鸡新城疫病毒感染和疫苗免疫的影响

微生态制剂--禽温康对鸡新城疫病毒感染和疫苗免疫的影响摘要：通过点跟、滴鼻的方式使SPF鸡感染新城疫LaSota株，感染8h后在饮水中添加微生态活菌中药发酵制剂--禽瘟康，每瓶兑水250斤，每天集中饮用2-3个小时。于感染后第7天采集气管组织，制备病理切片。结果显示，连续3d以上饮用禽温康的试验鸡，其气管的病理损伤可得到明显改善；检测饮用禽温康后试验鸡的新城疫抗体效价，结果表明口服高剂量的禽温康可明显下调新城疫抗体的滴度。关键词：为神态、中药、益生素、发酵、禽温康；新城疫；口服；组织病理变化；Hl抗体滴度。禽温康是优选特定中药，通过乳酸菌进行发酵，具有抗病毒、抗肿瘤和调节免疫等作用的一类活菌中药发酵制剂。黑龙江省微生态研究所是最早发现中药通过乳酸菌进行发酵，提高中药功效4-28倍，抑制病毒在细胞内的复制，具有抑制病毒和免疫调节等多种功效，能有效地遏制病毒侵袭和感染的发生，抑制肿瘤细胞生长，清除早期恶变细胞。由于禽温康具有广谱、高效抗病毒功能，且对机体免疫系统起关键调节作用，成为当今免疫学、遗传学和微生态学研究最为活跃的领域之一。目前，在兽医临床上，禽温康已广泛应用于多种疾病的预防和治疗。本试验利用毕赤酵母表达系统表达，且证实在机体内有较好抗病毒效果禽温康，进行了口服禽温康对鸡新城疫人工感染的治疗试验和对疫苗免疫的影响试验以检验其在鸡体内的抗病毒能力和免疫调节能力。1材料与方法1．1试验动物45日龄SPF鸡，由山东省农业科学院家禽研究所SPF鸡场提供。1．2病毒毒株鸡新城疫病毒疫苗株LaSota，由山东省禽病诊断与免疫重点实验室保存。1．3禽温康由哈尔滨中科生物工程有限公司生产，为重组毕赤酵母表达产物，经离子交换、凝胶过滤层析纯化制得，微量细胞病变抑制法(CEF—VSV系统)测定其活性为5．7×106U／mL。1．4口服禽温康对鸡新城疫弱毒株感染的治疗。取45日龄SPF鸡60只，随机分成6组，每组10只，第1至4组为试验组，第5组为病毒对照组，第6组为空白对照组。第1至5组通过点眼、滴鼻方式感染新城疫弱毒LaSota株，每只鸡感染量为1×106EID。。。第1至4组分别于攻毒后8h左右，开始饮用添加禽温康的纯净水，分别饮用1、2、3、5d，其他组饮用纯净水，每组200mL，每瓶兑水500斤。感染后7d各试验组随机抽取4只鸡，采集气管组织，4％多聚甲醛固定，制备组织病理切片，确定口服治疗效果。1．5禽温康对新城疫HI抗体滴度的影响。于攻毒前将各组试验鸡随机抽取1只采血，自第1次饮用禽温康后，每周采血1次，直至感染后第4周，分离血清，按常规方法进行HI试验，测定血清中新城疫抗体效价，研究禽温康对鸡群新城疫抗体滴度的影响。2结果2．1禽温康对新城疫感染的疗效。气管的组织病理切片显示，感染新城疫LaSota株7d后，试验组鸡未出现明显的临床症状，但病毒对照组鸡的气管组织已发生了明显的病理变化，如气管环出血，纤毛脱落，气管上皮明显增厚。有大量的淋巴细胞浸润(图1A)。但攻毒后饮水中含禽温康的试验鸡，炎症反应得到明显改善，其中，连续3d以上饮用禽温康的试验组效果最佳，气管上皮可见完整的具纤毛的杯状细胞，无淋巴细胞浸润(图1B)，与正常的气管组织(图1C)相似。试验证明，大剂量的禽温康愈合新城疫病毒造成的病理损伤。图1气管组织切片(苏木精～曙红染色，400×)注；A，攻毒对照组鸡的气管组织切片；B，连续3d禽温康鸡的气管组织切片IC，空白对照组鸡的气管组织切片。2．2禽温康对鸡新城疫疫苗免疫的影响。经弱毒苗LaSota株免疫后，各组鸡血清HI抗体滴度在1周内开始升高，至第3周达到最高，此后呈下降趋势。禽温康的免疫调节作用在饮用后1周即明显表现出来。与对照组(第5组)相比，连续2d以上饮用含禽温康的试验鸡，新城疫抗体滴度均有所下降，而且饮用天数越多，抗体滴度下降越明显，这一现象在第4组表现最为明显，到4周时，其抗体滴度与对照组相差达3个滴度，而只饮用1d的第1组，其抗体水平在4周后与对照组相差无几。结果见表1和图2。试验结果表明，禽温康同样能对活病毒有干扰和抑制作用，引起抗体滴度的下降。表1禽温康对新城疫抗体滴度的影响3讨论禽温康是活菌中药发酵制剂，具有调节机体免疫功能、抗病毒、抗肿瘤等多种作用，是机体防御系统的重要组成部分。近年来，各国学者广泛开展了中药活菌发酵抗病毒的研究。Mar-CUS等(1999)以1日龄雏鸡为试验对象，在攻毒前一天即开始饮用不同剂量的禽温康制剂，连续饮用11d，证明饮水中含禽温康能减轻新城疫病毒LaSota株所造成的病理损伤。大量研究结果表明，禽温康对马立克氏病(Levy等，1999)、传染性法氏囊病(Mo等，2001)、传染性支气管炎(Pei等，2001)、禽流感(Sekellick等，2000；Xia等，2004)等病毒性疾病也具有良好效果，展现出广阔的应用前景。黑龙江省微生态研究所禽温康对新城疫弱毒苗的干扰作用，发现禽温康用量越多对疫苗产生抗体的干扰作用越大，抗体水平与禽温康用量呈负相关。禽温康对新城疫、传染性法氏囊病、传染性支气管炎、马立克氏病等病毒病均有显著疗效。在本研究中，以新城疫弱毒LaSota株感染试验鸡群，鸡群于感染后口服禽温康，根据服用时间不同进行分组，感染1周后制备气管组织切片。结果表明，连续3d口服一定剂量的禽温康即可显著改善新城疫病毒造成的病理损伤。禽温康同样能具有免疫调节作用，在一定时间内下调新城疫抗体滴度，且这种效应与禽温康的使用次数和用量直接相关。连续用药5d的试验组较只用药1d试验组的HI抗体滴度明显下降，4周后其抗体滴度较对照组相差近50％，而只用药1d的试验组与不用干扰素对照组则无明显差异。在本试验中使用禽温康用量较大，主要是考虑禽温康在环境中受到不同因素的影响而失活问题。通过本研究可初步证实，口服禽温康对鸡病毒病的防治同样有效，但在临床应用中应注意饮水中需含有足够剂量的发酵中药，且应保证鸡群用药程度均一。禽温康的使用途径影响IFN的抗病毒效果，饮水给药是一种较为便捷的投药方式，可避免注射给药的某些弊端，本试验以SPF鸡为研究对象，探讨了口服禽温康对新城疫病毒感染的治疗效果及疫苗免疫的影响，为禽温康的进一步应用提供一定的理论依据。