微生物复习题2

1卫生微生物检验1、卫生指示菌的定义、目的、类型定义：指示菌（指标菌）是指在常规卫生监测中，用以指示检品卫生状况及安全性的指示性微生物。目的：主要是以卫生指示菌在检品中存在与否以及数量的多少为依据，对照国家卫生标准，对检品的饮用、食用或使用的安全性做出评价。类型：有三类，一般卫生（菌落总数、霉菌和酵母菌数）指示菌、粪便污染（大肠杆菌和大肠菌群）指示菌和其他（如特定菌、某些致病菌或其他指示性微生物）指示菌。2、一般卫生状况指示菌的定义a菌落总数：菌落总数是指被检样品的单位重量（g）、容积（ml）、表面积(cm2)或体积(m3)内，所含有的能在某种培养基上经一定条件培养后生成的细菌菌落总数。b霉菌和酵母菌数：霉菌和酵母菌数是指检样经过处理，在一定条件下培养后，所得1g或1ml检样中所含的霉菌和酵母菌菌落数。3、一般卫生状况指示菌卫生学意义评价被检样品的一般卫生质量、污染程度以及安全性。4、一般卫生状况指示菌选择标准（1）易于检出。（2）方法简单。（3）有一定的代表性。5、粪便污染指示菌类别包括3种：大肠杆菌和（粪）大肠菌群；肠球菌；亚硫酸盐还原梭菌。6、大肠杆菌的定义大肠杆菌：以具有β-半乳糖苷酶和β-葡萄糖醛酸酶为特征，具有发酵乳糖产酸产气，分解色氨酸产生吲哚等生化特点。7、大肠菌群（总大肠菌群）的定义指一群能在35℃--37℃条件下24—48h内发酵乳糖产酸产气，需氧或兼性厌氧的G-无芽孢杆菌。8、大肠菌群包括4个属埃希氏菌属（大肠杆菌）、柠檬酸杆菌属（弗劳地枸橼酸杆菌）、克雷伯氏菌属（肺炎克雷伯氏菌）、肠杆菌属（阴沟肠杆菌和产气肠杆菌）。9、粪大肠菌群（耐热大肠菌群）的定义即能在44℃--45℃发酵乳糖的大肠菌群。10、为什么大肠杆菌作为粪便污染的指示菌意义最大大肠杆菌在人和动物粪便中大量存在，是理想的粪便污染的指示菌。粪大肠菌群其主要菌属与大肠菌群相同，但以埃希氏菌属为主，其余3属因不适合在此温度下生长而占很少数量。总大肠菌群所包含的菌种可以在人、畜粪便中检出，也可以在营养丰富的水体、土壤、腐败的植物等外环境中检出，即在没有粪便污染的的情况下，也有检出符合上述定义细菌的可能。11、肠球菌的意义肠球菌也是人及动物肠道的正常菌群，在自然界分布广泛，常存在于水、土壤、空气中，在人粪便中数量少于大肠杆菌，主要栖居于动物肠道内，常作为动物粪便污染的指示菌。主要代表菌为粪肠球菌。12、亚硫酸盐还原梭菌的意义代表种为产气荚膜梭菌，是人和动物特别是食草动物肠道内常住菌，数量少于大肠杆菌。特点是厌氧生长、能形成芽孢、能还原亚硫酸盐为硫化物。抵抗力强，在外环境中能存活较长时间，常作为陈旧性粪便污染的指标，可与大肠菌群互补监测。13、粪便污染指示菌选择标准a是人及温血动物肠道正常菌群的组成部分，而且在数量上占有优势；b在被人或动物粪便污染的样品中易检出，未被粪便污染的样品中无此种菌存在；c排出体外后，在外环境中存活时间与肠道致病菌大致相似或稍长；d如作为饮用水的指示菌，对氯的抵抗力应不低于肠道致病菌或略强，而且进入水中不会再繁殖；e检验方法简便，易于检出和计算。14、常用的六种致病菌的指标菌是什么金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌通称绿脓杆菌、沙门氏菌、志贺氏菌、链球菌和破伤风梭菌。15、菌落总数检验程序1）样品处理2）做成几个适当倍数的稀释液3）选择2-3个适当稀释度各取1mL分别加入灭菌培养皿内4）每个培养皿加入适量的营养琼脂，36±1℃培养48±2h5)菌落计数6)报告16、菌落总数计数方法做平板菌落计数时，可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。17、菌落总数结果报告菌落数在100以内时,按其实有数报告,大于100时,采用两位有效数字(4舍5入)报告,也可用指数来表示。18、大肠菌群检验程序1）样品稀释22）接种乳糖胆盐发酵管，36±1℃培养24±2h→不产气报告结果3）产气→分离伊红美篮琼脂平板→革兰氏染色阳性→报告4）革兰氏染色阴性→乳糖发酵管复发酵→不产气报告结果5）乳糖发酵管复发酵产气→报告结果19、大肠菌群结果报告根据证实为大肠菌群阳性管数，查MPN检索表，报告100mL（g）大肠菌群MPN值。20、沙门氏菌检验程序1）样品处理2）前增菌（鲜肉、鲜蛋、鲜乳或未加工食品可省略此步）3）直接增菌（接种MM和SC分别42℃和36±1℃培养）4）分离平板（分离于BS和DHL或HE、WS、SS）5）挑取可疑菌落接种TSI（三糖铁）6）生化鉴定（生化不符合时报告结果）7）血清学分型鉴定8）报告22、志贺氏菌检验程序1）增菌2）分离平板3）挑可疑菌落接种TSI4）生化鉴定5）血清学分型6）报告23、致泻大肠艾希氏菌检验程序1）增菌，取25g+225mL营养肉汤36±1℃培养6h后挑取1环接种肠道增菌肉汤内，42℃培养18h。2）分离于麦康凯平板3）挑取3-5个菌落接种TSI4）生化鉴定5）血清学试验6）报告24、副溶血性弧菌检验程序1）样品处理取25g+225mL3.5％灭菌盐水研磨2）增菌接种氯化钠结晶紫增菌液3）分离于氯化钠蔗糖平板和选择性平板4）挑可疑菌落接种3.5％三糖铁斜面5）涂片革兰氏染色+嗜盐性试验6）生化鉴定7）动物试验8）报告25、金黄色葡萄球菌检验程序1）样品处理25g+225mL灭菌生理盐水2）增菌接种7.5％氯化钠肉汤3）分离疑血平板或B-P平板4）涂片染色+血浆凝固酶试验5）报告26、霉菌和酵母计数检验程序1）样品处理2）做成几个适当倍数的稀释液3）选择3个适当稀释度各取1mL分别加入灭菌培养皿内4）每个培养皿加入适量的PDA琼脂，25-28℃培养5d5)菌落计数6)报告27、肉与肉制品主要污染微生物种类菌落总数、大肠菌群、沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌（2+3）28、生肉、禽类采样、送检和前处理方法1）生肉及脏器检样：如系屠宰场宰后的畜肉，可于开腔后，用无菌刀采取两腿内侧肌肉各150g（或劈半后采取两侧背最长肌各150g）；如系冷藏或售卖之生肉，可用无菌刀取腿肉或其他部位之肌肉250g。检样采取后，放入灭菌容器中，立即送检；如条件不许可时，最好不超过3h，送检样时应注意冷藏，不得加入任何防腐剂。检样送往检验室应立即检验或放置冰箱暂存。处理：先将检样进行表面消毒（沸水内烫3s-5s，或烧灼消毒），再用无菌剪子剪取检样深层肌肉25g，放入灭菌乳钵内用灭菌剪子剪碎后，加灭菌海砂或玻璃砂研磨，磨碎后加入灭菌水225mL，混匀，即为1：10稀释液。2）禽类（包括家禽和野禽）：鲜、冻家禽采取整只，放灭菌容器内。带毛野禽可放清洁容器内，立即送检。处理：先将检样进行表面消毒，用灭菌剪或刀去皮，剪取肌肉25g（一般可从胸部或腿部剪取），放入灭菌乳钵内用灭菌剪子剪碎后，加灭菌海砂或玻璃砂研磨，磨碎后加入灭菌水225mL，混匀，即为1：10稀释液。带毛野禽先去毛后，同家禽检样处理。3)各类熟肉制品（包括酱卤肉、肴肉、肉灌肠、熏烤肉、肉松、肉脯、肉干等）：一般采取250g。熟禽采取整只，均放灭菌容器内，立即送检。处理：直接切取或称取25g，放入灭菌乳钵内用灭菌剪子剪碎后，加灭菌海砂或玻璃砂研磨，磨碎后加入灭菌水225mL，混匀，即为1：10稀释液。4）如须检验肉禽及其制品受外界环境污染的程度或其是否带致病菌，可用棉试采样法采样。29、乳制品种类和污染微生物来源1）鲜乳，污染微生物有菌落总数、沙门氏菌、3志贺氏菌、金黄色葡萄球菌(1+3)2）乳制品，污染微生物有菌落总数、大肠菌群、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌(2+3)30、各类乳品采样原则和数量1）大型包装的鲜乳：用灭菌吸管取样250mL，放入灭菌容器中及时送检，若气温较高或路途较远的情况下应冷藏。2）定型包装的乳品：采取整件包装，采样量不小于250g。31、鲜乳、酸乳检样处理方法1）塑料或纸盒（袋）装，用75％酒精棉球消毒盒盖或袋口后开口取样。2）玻璃瓶装酸奶疑无菌手续去掉瓶口的纸罩纸盖，瓶口经火焰消毒后开口取样。32、炼乳检样处理方法将瓶或罐先用温水洗净表面，再用点燃的酒精棉球消毒，然后用灭菌开罐器打开，以无菌手续取样。33、稀奶油、奶油检样处理方法用无菌手续打开包装，取适量检样置于灭菌锥形瓶中，在45℃水浴或温箱中加温溶解后，用无菌吸管取样。稀释液应在45℃水浴中保温，从融化到接种完毕不应超过30min。34、干酪检样处理方法先用灭菌刀去掉表面封蜡，用点燃的酒精棉球消毒表面，用无菌手续切取表面和深层检样检验。35、蛋与蛋制品主要污染病原菌菌落总数、大肠菌群、沙门氏菌、志贺氏菌。(2+2)36、鲜蛋、槽蛋、皮蛋采样方法用流水冲洗外壳，再用75%酒精棉涂擦消毒后放入灭菌袋内，加封作好标记后送检。37、巴氏消毒冰全蛋、冰蛋黄、冰蛋白采样方法先将铁听开处用75%酒精棉球消毒，然后将盖开启，用灭菌电钻由顶到底斜角钻入，徐徐钻取检样，然后抽出电钻，从中取出200g检样装入灭菌广口瓶中，标明后送检。38、全蛋粉采样方法将包装铁箱上开口处用75%酒精棉球消毒，然后将盖开启，用灭菌的金属制双层旋转式套管采样器斜角插入箱底，使套管旋转收取检样，再将采样器提出箱外，用灭菌小匙自上、中、下部收取检样，装入灭菌广口瓶中，每个检样重量不少于100g，标明后送检。39、鲜蛋、槽蛋、皮蛋检样处理方法用灭菌生理盐水浸湿的棉拭充分擦拭蛋壳，然后将棉拭直接放入培养基内增菌培养，也可将整只鲜蛋放入灭菌小烧杯或平皿中，按检样要求加入定量灭菌生理盐水或液体培养基，用灭菌棉拭将蛋壳表面充分擦洗后，以擦洗液作为检样检验。40、冰全蛋检样处理方法将装有冰蛋检样的瓶浸泡于流动冷水中，使检样融化后取出，放入带有玻璃珠的灭菌瓶中充分摇匀待检。41、全蛋粉检样处理方法将检样放入带有玻璃珠的灭菌瓶内，按比率加入灭菌生理盐水充分摇匀待检。42、鱼体主要污染菌种类43、鱼类检样的处理方法及检验项目采取检样的部位为背肌。先用流水将鱼体体表冲净，去鳞，再用75%酒精棉球擦净鱼背，待干后用灭菌刀在鱼背部沿脊椎切开5cm，再切开两端使两块背肌分别向两侧翻开，然后用无菌剪子剪取肉25g，放入灭菌乳钵内，用灭菌剪子剪碎，加灭菌海砂或玻璃砂研磨(有条件情况下可用均质器)，检样磨碎后加入225mL灭菌生理盐水，混匀成稀释液44、虾类检样的处理方法及检验项目采取检样的部位为腹节内的肌肉。将虾体在流水下冲净，摘去头胸节，用灭菌剪子剪除腹节与头胸节连接处的肌肉，然后挤出腹节内的肌肉，称取25g放入灭菌乳钵内研磨做成稀释。45、蟹类检样的处理方法及检验项目采取检样的部位为胸部肌肉。将蟹体在流水下冲净，剥去壳盖和腹脐，再去除鳃条，复置流水下冲净。用75%酒精棉球擦拭前后外壁，置灭菌搪瓷盘上待干。然后用灭菌剪子剪开成左右两片，再用双手将一片蟹体的胸部肌肉挤出(用手指从足根一端向剪开的一端挤压)，称取25g，置灭菌乳钵内研磨做成稀释。46、贝类检样的处理方法及检验项目采样部位为贝壳内容物。先用流水刷洗贝壳，刷净后放在铺有灭菌毛巾的清洁的搪瓷盘或工作台上，采样者将双手洗净并用75%酒精棉球涂擦消毒后，用灭菌小钝刀从贝壳的张口处隙缝中徐徐切入，撬开壳盖，再用灭菌镊子取出整个内容物，称取25g置灭菌乳钵内研磨做成稀释。47、酱油和酱类、食醋的前处理方法1）瓶装样品：用点燃的酒精棉球烧灼瓶口灭菌，用石碳酸纱布盖好，再用灭菌开瓶器启开后进行检验。袋装样品用75％酒精棉球消毒袋口后进行检验。2）酱类：用无菌手续称取25g，放入灭菌容器内，加入225mL蒸馏水，制成混悬液。3）酱油：吸取酱油25mL，加入灭菌225mL蒸馏水，制成混悬液。44）食醋：用20%～30%灭菌碳酸钠溶液调pH到中性。48、冷食菜、豆制品采样原则采样时应注意样品代表性，采取接触盛器边缘、底部及上面不同部位样品，放于灭菌容器内立即送检或于冰箱暂存，定型包装样品随机采取49、冷食菜、豆制品前处理方法以无菌操作称取25g+225灭菌蒸馏水，用均质器打碎1min制成混悬液。定型包装样品，先用用75％酒精棉球消毒袋口，用灭菌剪刀剪开后以无菌操作称取2