多倍体的鉴定

五、多倍体的鉴定a)外部形态比较特点是直观、简便。可将整体、叶片、茎、果、花、种子等进行比较。如瓜类多倍体表现：发芽和生长缓慢；子叶及叶片肥厚、色深、茸毛粗糙而较长；叶片较宽、较厚或有皱褶；茎较粗壮、节间变短；花冠明显增大，花色较深；果实变短、变粗、果肉增厚、果脐增大（甜瓜）；种子增大，嘴部变宽，但种仁饱满。果树多倍体一般茎变短、叶变厚，叶形指数变小；颜色变深，表面皱缩粗糙、生长缓慢；花、果变大，可育性低。根据形态特征可作出初步判断。b)气孔鉴定多倍体的气孔较二倍体大，叶片单位面积上的气孔数量相对减少。这是一种较为可靠的鉴定方法。但是处理和对照必须在同一发育时期和同一外界条件下才可比较判断。c)花粉粒鉴定与二倍体相比，多倍体花粉粒体积大，生活力低。有些多倍体甚至完全不育，如三倍体。但不同的植株类型及多倍体的不同倍数，其不孕的程度存在差别。如双二倍体就被产生它的杂种二倍体结实率高。d)梢端组织发生层细胞鉴定用切片染色法比较组织发生层的三层细胞和细胞核的大小，多倍体的比二倍体的大。该方法的优点是可同时对组织发生层的三层细胞细胞进行鉴定，能说明变异体的结构特点。e)小孢子母细胞分裂的异常行为三倍体或同源四倍体，小孢子母细胞在减数分裂中都有异常行为。表现为染色体配对不正常，有单价体和多价体，有落后染色体；染色体分离不规则，数目不均等；有多极分裂和微核小孢子数目和大小不一致等。f)染色体记数（直接鉴定法）用植物的根尖细胞、茎尖细胞或花粉母细胞制片，在显微镜下直接观察染色体数目变化。g)分子水平鉴定流式细胞术(flowcytometry)就是采用流式细胞仪来测定单个细胞的DNA含量，再根据DNA含量比较来推断出细胞的倍性。荷兰球根花卉专家vanTuyl在1989年就开始用此方法对诱变的大量材料进行倍性鉴定了。此外，分子标记技术也已成功地应用到本领域的研究中。但多用于2戈配子后代中的2x配子来源及属性的分析。巴罗内(A.Barone，1996)用RFLP(re-strictionendonucleasefragmentlengthpolymorphism)按术分析茄子多倍体时就发现其属性及来源并不相同。最近人们认识到杂合性对于多倍体的成功有重要作用，因多倍体比相应的二倍体具有明显的杂合性，且有更多的杂合位点和互作效应，张有做等(1998)用RAPD(randomamplifiedpolymorphismDNA)技术分析不同倍性的桑树品种基因组DNA时认为多倍体的基因组DNA可能由于核苷酸碱基序列发生改变、形成杂交新位点或同源四倍体的等位基因发生了漂移，从而表现出基因组DNA的多态性。这些研究为在分子水平上鉴定多倍体提供了全新的思路。