大学生科技创新.

猪pIL-2重组乳酸菌对小白鼠小肠结构的影响的研究动物科技学院负责人：刘仲藜答辩：王琳雅2一、基本情况姓名性别年级项目分工项目负责人情况刘仲藜男2011级负责项目的全项工作参与人员情况王琳雅女2012级制作组织切片覃嘉兴女2012级制作组织切片赵金男2012级灌胃试验小鼠整理试验结果平迪女2013级数据统计分析1.小组成员3二、项目实施的目的、意义随着国家规模化养殖技术的推广以及饲养环境恶化程度的加剧,禽流感、猪流感等各种传染类疾病对养殖业甚至人类的危害越来越严重,防治难度越来越大,传统防治方法己凸显其不足。对新型免疫治疗剂、免疫增强剂以及基因工程疫苗的需求尤为迫切。本试验目的在于将pIL-2重组乳酸菌接种至小鼠胃内,评价pIL-2重组乳酸菌对小鼠胃肠黏膜纤毛的改善效果,为进一步揭示猪pIL-2重组乳酸菌对机体的免疫增强作用作为理论参考，对制备新型微生态制剂防治动物重大疫病以及降低抗生素残留促进动物性食品安全具有重要意义。4三、项目研究内容和拟解决的关键问题1.项目主要研究内容1.1研究猪pIL-2重组乳酸菌对小鼠小肠结构的影响。1.2小鼠肠道组织切片的制作。2.拟解决的关键问题2.1摸索小鼠肠道组织切片制作条件与方法。2.2探索重组乳酸菌对宿主肠道结构的影响。5四、项目研究与实施的基础条件1.试验材料与技术支持试验所需的试验小鼠，均由吉林农业科技学院实验动物繁育中心提供，保证了试验结果的可靠性，降低了试验误差。接种所用的pIL-2重组乳酸菌是我院老师自主培养的，降低了购买试剂的成本。本试验从小鼠灌胃到小肠组织结构切片，最后到小肠组织结构镜检，均有辅导老师指导，为我们提供了技术支持。62.实验室基本条件支撑申请人所在的学校是省级教学、科研一体化农业院校，所在的动物医学专业是吉林省特色专业，拥有省级重点实验室1个，院级重点实验室1个，动物临床实践中心1个。实验室配备了包埋机、切片机、展片仪、显微镜、烤箱、恒温培养箱、离心机、生物安全柜等先进精密的仪器设备。目前实验室已经完全具备从事于该项研究的实验室环境和设施。这一系列健全的设施与优良的环境将为进行本项研究提供最佳条件。四、项目研究与实施的基础条件7五、项目实施方案1.试验材料1.1试验动物：清洁级小鼠（由吉林农业科技学院实验动物繁育中心提供）1.2试验试剂：猪pIL-2重组乳酸菌、乳酸菌、PBS、二甲苯、乙醇、伊红染色液、苏木精染色液、盐酸、石蜡、MRS培养基。1.3试验器械：包埋机、切片机、展片仪、显微镜、烤箱、恒温培养箱、离心机、生物安全柜。82.2试验分组及方法接种方法试验方法试验组A6灌胃猪pIL-2重组乳酸菌1×109cfu/ml对照组B6灌胃乳酸菌1×109cfu/ml空白对照组C6灌胃PBS试验内容试验分组五、项目实施方案2试验方法2.1实验前准备选择25只（试验小鼠18只，备用小鼠7只）20克左右的雌性健康小白鼠分组备用。2.3接种计划每天同一时间灌胃，连续灌胃一周。92.4制作小肠组织切片取材固定水洗脱水浸蜡透明包埋切片染色组织切片五、项目实施方案102.4.1取材和固定将A、B、C三组所有小鼠用颈椎脱臼法致死，尽快剖检取出小鼠十二指肠，切成适当大小用10%的福尔马林溶液固定24h，取出，修整组织块使其大小为0.5×0.5cm。五、项目实施方案112.4.2水洗与脱水洗去组织块表面的固定液。一般用流水（自来水）冲洗12到24h右。若不方便用流水冲洗，也可用较大容器盛装水浸洗，每隔一段时间换水一次，但要延长整个浸洗时间。冲洗后要进行脱水，常用的脱水剂为酒精。将组织块依次浸润在浓度为50%、70%、90%、95%、100%的乙醇溶液。五、项目实施方案122.4.3透明与浸蜡组织经过透明作用以后，放入溶化的石蜡中浸渗，使石蜡浸入组织块中，冷却后，才能进行切片。五、项目实施方案132.4.4包埋将已浸渗好的组织包埋于浸渗剂中。本试验采用石蜡包埋法进行包埋。五、项目实施方案142.4.5切片切片多使用轮转式切片机，用展片仪展开组织蜡片，用毛笔将切片捞起后，在空气中略微干燥后即可烤片。五、项目实施方案152.4.6染色经HE染色后，细胞核被苏木精染成紫蓝色，多数细胞质及非细胞成分被伊红染成粉红色。五、项目实施方案163.结果分析将A、B组小鼠小肠结构与健康小鼠作比较，分析不同组小鼠肠道组织结构变化。五、项目实施方案17五、项目实施方案4.总体安排及进度2014年5月—6月2014年6月—7月2014年7月—2015年2月2015年2月—4月2015年5月—6月查阅相关文献准备试验材料试验阶段。给小鼠接种猪pIL-2重组乳酸菌和普通乳酸菌，制作组织切片。试验数据统计分析。撰写研究报告、发表学术论。18六、学校可以提供的条件1.学校拥有本项目所需的实验仪器和实验环境1.1学校为本项目顺利进行提供包埋机、切片机、展片仪、显微镜、烤箱、恒温培养箱、离心机、生物安全柜等实验仪器。1.2学院以自主成功培养出猪pIL-2重组乳酸菌。1.3学校为本项目提供所需要的实验室，病理实验室、微生物实验室、中心实验室。2.学校为团队提供专业的指导教师学校为了能够让我们的科技创新项目做到更加完善，为每组创新团队指派指导教师一名，指导创新项目顺利进行。19七、预期成果研究报告（√）发表论文（√）说明1.撰写项目研究报告1份；2.撰写项目技术报告1份；3.发表学术论文1-2篇；4.培养具有创新精神的大学生5名。