大豆和枸杞蛋白PAGE问题及其分析

本科毕业论文题目大豆和枸杞蛋白PAGE问题及其分析学院专业毕业届别姓名指导教师职称二〇一五年五月-1-目录摘要.......................................................................................................................................-2-关键词...................................................................................................................................-2-前言.......................................................................................................................................-2-1材料与方法.....................................................................................................................-3-1.1材料..............................................................................................................................-3-1.1.1药品...........................................................................................................................-3-1.1.2仪器...........................................................................................................................-4-1.2方法..............................................................................................................................-4-1.2.1豆粉和枸杞匀浆的制备...........................................................................................-4-1.2.2大豆和枸杞蛋白质的提取.......................................................................................-4-1.2.3聚丙烯酰胺凝胶电泳...............................................................................................-4-1.2.3.1分离胶和浓缩胶的配制........................................................................................-4-1.2.3.2样品处理................................................................................................................-5-1.2.3.3电泳........................................................................................................................-5-1.2.3.4染色与脱色............................................................................................................-5-2结果与分析.....................................................................................................................-5-2.1封胶..............................................................................................................................-5-2.2制胶..............................................................................................................................-6-2.3样品提取......................................................................................................................-7-2.4电极缓冲液与样品缓冲液..........................................................................................-8-2.5电泳..............................................................................................................................-9-2.6染色与脱色................................................................................................................-10-2.7结果观察....................................................................................................................-11-3结论与讨论...................................................................................................................-11-参考文献.............................................................................................................................-11-致谢............................................................................................................错误!未定义书签。-2-大豆和枸杞蛋白PAGE问题及其分析摘要：采用碱溶酸沉法和(NH4)2SO4沉淀法分别提取大豆蛋白和枸杞蛋白，用SDS-PAGE电泳技术对大豆蛋白、枸杞蛋白以及标准蛋白规范化的实验，总结实验封胶、制胶、样品提取、电泳、染色脱色等步骤中常见问题并作出详细分析。结果表明：实验过程中最主要的问题是电泳重复性差，此为还有封胶时出现漏胶、电泳时出现拖尾、染色时出现染色深浅不一等现象。通过分析选择最适合的实验方法在实验中省时省材达到电泳试验的最终目的。关键词：SDS-PAGE；蛋白质；问题；分析ProblemsandanalysisofPAGEforsoybeanandLyciumbarbarumproteinAbstract:Byalkali-solutionandacid-isolationand(NH4)2SO4precipitationextractionofsoybeanproteinandLyciumbarbarumprotein,respectively,bySDS-pageproteinelectrophoresisofsoybean,wolfberry,andstandardizedtestofstandardproteins,summarizingexperimentssealant,adhesive,sampleextractionstepssuchasbleaching,electrophoresis,stainingandmakeadetailedanalysisofcommonproblemsin.Resultsshowedthatelectrophoresisisthemainproblemintheexperimentalprocessreproducibilityispoor,andtherewasaleakageofadhesiveandsealantgelelectrophoresisoccurredwhentherewasadyedtwo-tonetail,dyeingandsoon.Analysistoselectthemostsuitableexperimentalmethodintheexperimentoftimeandmaterialstoachievetheultimatepurposeofelectrophoresistests.Keywords:SDS-PAGE；Protein；Problem；Analysis前言自Raymond等[1]于1959年10月在科学杂志上介绍丙烯酰胺能在缓冲溶液中聚合反应，形成稳定、透明、有弹性的凝胶后，Raymond用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)成功分离出血清和血红素。随后Chang等[2]成功分离链孢霉菌的可溶性蛋白质，该技术在蛋白电泳中得到广泛应用。在样品介质和聚丙烯稀酰胺中加入了离子去污剂和强还原剂后，发现蛋白质亚基的电泳迁移率主要取决于亚基的分子量的大小，从而电荷因素可以被忽略[3,4]，这使PAGE技术得到进一步发展。Laemmli[5]对PAEG的改进更使SDS-PAGE成为在生命科学研究领域分析蛋白特性和纯度的一种基础性技术。从此电泳技术也成为“生物化学”与“分子生物学”课程中的基础实验[6]。电泳是指带电颗粒在电场的作用下发生迁移的过程，它们在某个特定的pH值下携带电荷，在电场的作用下，带电分子会向着与其所带电荷极性相反的方向移动[7]。电泳-3-技术就是在电场的作用下，由分子带电性质、大小、形状等性质的差异，使带电分子产生不同的迁移速度，从而对样品进行分离、鉴定的技术。电泳过程必须在支持介质中进行，而凝胶作为支持介质的引入大大促进了电泳技术的发展，使电泳技术成为分析蛋白质、核酸等生物大分子的重要手段之一。30多年来，聚丙烯酰胺凝胶电泳仍是生物化学和分子生物学中对蛋白质、多肽、核酸等生物大分子使用最普遍、分辨率最高的分析鉴定技术。在甘肃农业大学生命科学学院的《基础生物化