大鼠原位肾脏移植模型

大鼠肾移植模型制作大鼠肾移植模型目前仍是肾移植实验研究中非常有价值和常用的动物模型。这一模型具有许多优点：显微外科技术的应用使建立稳定可靠的实验动物模型成为可能；大鼠繁殖快，成本较低；有大批基因型明确的纯系大鼠供选择如SD大鼠、Wistar大鼠等。这一术式的基本方法如下。一、手术器械显微外科手术器械包，手术显微镜1台，自制S拉钩（用橡皮筋一端带弯成S形大头针）4个，眼科剪1把，其它外科器械若干及纱布、棉球、棉片和橡皮条等。二、实验动物及麻醉根据实验目的选择同一品系或不同品系的大鼠，一般8～10周龄，体重150～250g，供鼠雌雄不限，受鼠最好为雄性大鼠，供受者体重相仿。腹腔注射0.3％戊巴比妥2ml/100g或氯胺酮10mg/100g体重或已醚吸入麻醉均可。三、供肾切取术腹部正中切口，切开皮肤、腹直肌和腹膜，充分暴露左肾，以湿纱布覆盖周围组织器官。1.供肾血管游离：使用棉签和无齿眼科镊钝性分离左肾动静脉及其分支，游离与其连接的腹主动脉和下腔静脉，结扎肾上腺动、静脉。在游离完毕的左肾动脉上方和右肾动脉下方的腹主动脉部和腹主动脉远端及左肾静脉上下方的下腔静脉各以1号细丝线围绕，勿结扎。2.左肾原位灌洗：以Lee氏夹阻断左肾动脉下方的腹主动脉血流，以血管钳夹闭腹主动脉和下腔静脉远端，在肾动脉以下的腹主动脉上切一小口插管，注入500u/ml肝素等渗盐水2ml使全身肝素化，然后相继结扎左肾动脉以上的腹主动脉和左肾静脉以下的下腔静脉，在左右肾静脉开口之间剪断下腔静脉，进行低温灌洗。用4℃等渗盐水10ml/min自腹主动脉插管处推注，灌洗5分钟，见左肾和附属血管完全苍白，停止灌注。3.输尿管、膀胱分离：以小弯蚊式钳轻轻提起膀胱底，钝性分离膀胱和输尿管，并逐渐延伸至左肾门，注意适当保留部分输尿管周结缔组织（其内有输尿管滋养血管），整块剪下左肾肾血管、灌洗段腹主动脉和下腔静脉、左输尿管及膀胱，立即置入4℃平衡盐溶液中保存。4.供肾处理：4℃平衡盐溶液冰浴中修剪供肾血管、输尿管和膀胱。把连接肾动脉的腹主动脉修剪成一3×2mm2的椭圆形动脉瓣，并将连接左输尿管的膀胱亦修剪成直径3mm的膀胱瓣。四、供肾原位移植术受者麻醉后，将肠管推向右侧，湿纱布保护内脏器官和周围组织，用自制拉钩牵引暴露左肾及其周围组织。1.受者血管游离：如前述钝性分离左肾动、静脉及其分支，并分离此处下腔静脉、腹主动脉和左输尿管肾门端，仔细除去左肾动脉根部腹主动脉血管外结缔组织，并结扎此处腹主动脉分支。用眼科剪锐性分离左肾，4号丝线结扎肾动、静脉远心端和左输尿管肾门部，将连有左肾动脉根部的腹主动脉完全分离，小心去除血管外结缔组织，并结扎此处分支血管。2.重建血管：将供肾置于腹部切口左侧缘，医用冰棉片覆盖供肾，术中若发现冰屑融化，需不断补充。在分离好的腹主动脉上下方各置一Lee氏夹，阻断腹主动脉血流，结扎并剪掉左肾动脉残端，在此处制备与供肾动脉瓣一致的纵行切口，肝素（25IU/ml）生理盐水冲洗管腔内残余血，用连续缝合法端－侧缝合腹主动脉瓣与受者腹主动脉纵行切口；肾静脉口径较大，可在显微镜下做供受者之间肾静脉端－端吻合。动静脉吻合完毕，同时松开远近端血管夹，开放血流，移植肾色泽逐渐红润，明亮，肾动脉搏动明显，肾静脉充盈，表示血运顺畅。如有漏血，以棉球轻压片刻，即可止血。血供好的供肾可见输尿管开口处尿液逐渐流出，输尿管营养血管供血良好。3.尿路重建：观察供肾血运良好后，即行输尿管膀胱瓣和受者膀胱吻合术。常规采用端－端吻合或端－端套管吻合及带膀胱瓣的端－侧吻合，现多采用后一术式。在受者膀胱顶部剪一直径2.5cm切口，调整好供肾输尿管位置，勿扭曲，以6-0无损伤缝线间断全层缝合，完成后再次检查供者输尿管是否扭曲。移植术毕，缝合腹壁切口。输尿管膀胱瓣与受者膀胱吻合示意图受者自体肾切除：多主张择期手术，术后3天即可切除自体右肾。其它肾血管重建方式：主要为袖套法，供者血管从袖套管穿出并外翻，受者血管套入袖套，两者结扎即可。这种方法强调不需显微外科器械。另外，供者肾静脉带下腔脉瓣（袖片），在肉眼下亦可直接吻合。大鼠肾移植模型是一难度较大的显微外科手术，一般需3－6个月的显微外科训练才能熟练掌握。术中应注意：按照血管外科技术要求精细分离供受者相关血管；供者肾的原位灌洗，尽可能减轻热缺血损伤；肾血管和输尿管吻合注意勿扭曲。五、手术常见并发症：1.麻醉意外：术中呼吸骤停多与麻醉不当有关。乙醚麻醉可控性较好，正确操作可获满意的麻醉效果，且实验动物术后苏醒较快。2.吻合口出血：最常见的术后并发症，与针距过大，边角处漏针，血管壁撕裂等技术因素有关。出血过多时需补针。3.血栓形成：多为静脉血栓，与血管内膜受损，血管外脂肪结缔组织残留，吻合口张力过大和血管扭曲有关。4.感染：因手术是在清洁而非无菌条件下进行，感染时有发生，可在腹腔内注射青霉素40万U预防感染。