国家自然科学基金申请标书(样本)

申请代码：受理部门：收件日期：受理编号：检查保护国家自然科学基金申请书资助类别：亚类说明：附注说明：项目名称：申请者：电话：依托单位：通讯地址：邮政编码：单位电话：电子邮件：申报日期：2006年3月17日国家自然科学基金委员会您现在不能检查保护文档或打印文档，请根据以下三个步骤操作：1)如果您是Word2000或以上版本用户，请把Word宏的安全性设为:中方法:Word菜单-工具-宏-安全性-安全级,设置为中(如果您是Word97用户，继续执行以下步骤)2)关闭本文档，重新打开本文档3)点击启用宏按钮，即可开始填写本文档或打印了国家自然科学基金申请书第2页版本1.000.000基本信息姓名宋有涛性别男出生年月1973年3月民族满族学位博士职称教授主要研究领域微生物分子生物学与生物化学电话[phone]电子邮件[e-mail]传真[phone]个人网页=1958工作单位辽宁大学/生命科学系申请者信息在研项目批准号名称辽宁大学代码11003601联系人潘平电子邮件[e-mail]依托单位信息电话[phone]网站地址合作单位信息[在此录入修改]项目名称利用基因重组酵母建立抗朊病毒药物筛选细胞模型的研究资助类别面上项目亚类说明青年科学基金项目附注说明申请代码C0104:生物化学和分子生物学C010107:病毒学基地类别预计研究年限2007年1月—2009年12月研究属性应用基础研究项目基本信息摘要(限400字)：构建一种简单、安全、高效的抗朊病毒药物筛选细胞模型是解决当前国际上流行的疯牛病、克雅氏病等朊病毒疾病防治的瓶颈与难点。本项目是基于目前酵母细胞可取代哺乳动物细胞进行抗朊病毒药物筛选的理论研究基础，针对野生型酵母细胞对药物敏感性低以及无法在活体细胞内实时定量检测药效的缺陷，利用酵母朊病毒与动物存在着严格种间屏障的优点，采用分子生物学基因重组技术改造酵母细胞，构建含有可用于实时定量追踪检测的荧光蛋白标记和高药物敏感性分子伴侣基因突变型的酵母细胞，并进一步利用独创的SDS-Agarose/WesternBlot技术作为分子水平的定量检测手段，建立一个具有国际水平、自主创新的药物筛选细胞模型，进行抗朊病毒药物筛选的研究。本研究可解决目前抗朊病毒药物筛选效率低及安全性差的关键技术问题，不仅能为今后的抗朊病毒药物筛选产业化研究提供关键参数，并且为解决我国重大传染病防治的可持续性研究提供相关科学依据。关键词(用分号分开，最多5个)朊病毒；酵母细胞；荧光蛋白；分子伴侣；抗朊病毒药物国家自然科学基金申请书第3页版本1.000.000项目组主要成员（注:项目组主要成员不包括项目申请者，国家杰出青年科学基金类项目不填写此栏。）编号姓名出生年月性别职称学位单位名称电话电子邮件项目分工每年工作时间（月）1徐威1963-7-11女副教授博士沈阳药科大学[e-mail]药物筛选及纯化策略42惠秀娟1961-9-27女副教授硕士辽宁大学[e-mail]重组基因载体的构建43张慧丽1970-10-27女讲师硕士辽宁大学[e-mail]药物筛选及检测44回晶1977-10-20女讲师硕士辽宁大学[e-mail]模型的生化指标检测45刘剑利1980-2-10男助教硕士辽宁大学[e-mail]药物成分纯化46李辉1981-1-15男助理实验师学士辽宁大学[e-mail]酵母的发酵培养技术57孙世林1982-2-25女硕士生学士辽宁大学[e-mail]模型的生化指标检测98游园园1983-3-21女硕士生学士辽宁大学[e-mail]酵母活细胞的荧光测定99赵葳葳1982-6-13女硕士生学士辽宁大学[e-mail]重组基因载体的构建9总人数高级中级初级博士后博士生硕士生10322003说明:高级、中级、初级、博士后、博士生、硕士生人员数由申请者负责填报（含申请者），总人数自动生成。国家自然科学基金申请书第4页版本1.000.000经费申请表（金额单位：万元）科目申请经费备注（计算依据与说明）一.研究经费23.80001.科研业务费11.3000（1）测试/计算/分析费5.7000激光共聚焦显微镜分析，DNA测序（2）能源/动力费1.2000培养和测试过程中的能源动力消耗（3）会议费/差旅费1.5000国内实验室合作交流，参加2-3次国内外学术会议（4）出版物/文献/信息传播费2.9000在国内外刊物上发表8-9篇论文以及资料费等（5）其它0.00002.实验材料费11.0000（1）原材料/试剂/药品购置费11.0000普通常规生化试剂，分子生物学药品，酶和试剂盒（2）其它3.仪器设备费1.5000（1）购置1.2000增购大型水平电泳装置及蛋白质转印装置各一台（2）试制0.3000制备人性化微生物接种装置一套4.实验室改装费0.00005.协作费0.0000二.国际合作与交流费2.50001.项目组成员出国合作交流1.5000前往美国国家卫生研究院（NIH）MasisonDC实验室合作交流2.境外专家来华合作交流1.0000邀请爱尔兰国立大学生物系JonesG博士来华合作交流三.劳务费1.2500研究生人员及其它工作人员的劳务补贴四.管理费1.4500按相关规定5%计算合计29.0000国家其他计划资助经费其他经费资助（含部门匹配）与本项目相关的其他经费来源其他经费来源合计0.0000国家自然科学基金申请书第5页版本1.000.000查看报告正文撰写提纲报告正文（一）立项依据与研究内容1.项目的立项依据1.1.研究意义和社会应用前景朊病毒（prion，又称为朊蛋白）是一类能在动物和人中引起可传染性脑病（包括疯牛病、羊搔痒症、库鲁病、克雅氏病等）的病原体[1,2]。它们是一类高度保守的糖蛋白（大约250个氨基酸，分子量在27～30kDa），其广泛存在于哺乳动物中，是通过人或动物单拷贝染色体基因的单一外显子编码，并通过C末端糖基磷酸酰肌醇锚定在细胞膜上的富含胆固醇、鞘脂和糖脂的去污剂抗性微区，从而使朊病毒可以从一个细胞移位到另一个细胞，在细胞间形成传播[3]。朊病毒不含有核酸成分，对热、酸碱、紫外线、离子辐射、乙醇、超声波等均能使普通病毒或细菌灭活的理化因子具有很强的抗性，因此具有极强的传染性[4,5,6]。朊病毒的高度传染性和致死性对整个社会造成了极大的危害。例如疯牛病，20世纪80年代中期至90年代中期是其暴发流行期，截至2004年，仅英国已经确诊的病牛就有177962头，涉及35181个农场，共屠宰和焚烧病牛1100多万头，经济损失达数百亿英镑[7]。二十多年来，疯牛病就已扩散到了欧洲、美洲和亚洲的31个国家，受到疯牛病牵连的国家有一百多个，造成了巨大的经济损失和社会恐慌。另一类由朊病毒引起的常见的人类早老性痴呆症，即克雅氏病，也呈全球性分布状态，感染朊病毒后其潜伏期可从15个月长达至30年以上，患者在出现临床症状后一般在一两年内死亡，剖检所见病灶组织与疯牛病类似[8,9]。虽然动物朊病毒存在种属屏障，但其限制并不严格，将疯牛病病牛脑组织匀浆接种给绒猴或猿等灵长类动物，可使之发生神经症状，大脑病变呈海绵状[10]。近年来克雅氏病在欧洲发病率比过去几十年增长了10倍以上，这种增长目前被高度怀疑为是由接触或食用朊病毒感染的牛内脏所引起的（由疯牛病所引起的克雅氏病在医学上被称为新型克雅氏病）[10,11]。另据科学推测，疯牛病的发源国英国已约有50万人潜在感染新型克雅氏病，这些人可能都处于长短不同的潜伏期中，如果处理不当，到2020年以后新型克雅氏病将成为比艾滋病还要可怕的世界性的特殊传染病[12]。迄今为止，虽然在中国尚未出现较大范围朊病毒引发的疾病的报道，但是随着在各个领域中的国际交流与合作的与日俱增，中国存在着极大的感染外来朊病毒的潜在威胁。届时一旦感染，必将极度冲荡中国的社会稳定和经济发展。例如2003年非典病毒的流行与蔓延在中国造成了巨大的损失，2005年至今禽流感病毒又在中国的许多地区发生，对国民的安全和中国经济的发展造成了巨大威胁。朊病毒与上述两类病毒的相似之处在于都是起源于动物（特别是人类食用的动物），这些病毒首先在动物物种内传播，在人类对动物生长自然环境进行了长期累积的非合理性改造后，进而通过基因突变等方式打破种间屏障，形成能够感染人体的变种病毒，最终对人类的生命健康造成巨大的威胁。因此，不仅要在科学的基础上制定合理的法规和制度隔离朊病毒的传染源以及控制其传播途径，更需要我们通过寻求经济、简单、安全、高效的抗朊病毒药物筛选模型进一步建立具有国际水平的国有自主知识产权的高通量的抗朊病毒药物筛选平台，从而尽快研发出预防和治疗朊病毒引发疾病的药物，这将具有重大的科学意义和实用价值。项目主持人这次申请的利用基因重组技术建立细胞水平高灵敏度抗朊病毒药物筛选模型的研究项目是一项国际前沿的生命科学领域的研究，它对于在此方向上与国际最前端科学研究同步起到至关重要的作用，其成果在国际上的专利申报将会填补国内研究在这一领域的空白，提高我国在朊病毒研究领域的国际地位。这种利用基因重组技术建国家自然科学基金申请书第6页版本1.000.000立的高灵敏度抗朊病毒药物筛选细胞模型的建立，将直接铺平在细胞水平抗朊病毒药物筛选平台的产业化之路。本研究成果将会提供一个强大的工具，在更大的范围内，用更经济简单的方法寻找和设计出药效强、毒副作用小，特别是在中药领域的用于预防和治疗朊病毒的有效药物。目前临床统计结果暗示着某些中药中的芳香性生物碱成分可能具有抗朊病毒的效果，但是因为没有分子机理和细胞学上的论证，所以很难在国际市场上实现商业化。因此这个建立在我国的抗朊病毒药物筛选模型的研发会极大促进中药产业的发展，并届时将中药进一步推向世界市场，提高中药在国际上的知名度，同时带来巨大的经济效益。另外在国内通过利用本研究成果可以开发出效果明确、成本低廉的以中草药成分为主体的保健性食品和饲料，在早期切断人-人、人-动物以及动物-动物间的传播途径，从而在预防的角度上消除朊病毒对于人类的生命健康和社会经济的发展造成巨大的威胁。因此，这项研究的最终结果对于消除人们对于朊病毒所带来的潜在的恐惧将具有极大的现实效果，从而保障我国人民的健康生活，保证我国经济的健康发展，这也是我们这项研究所创造的另一方面的社会效益。1.2.国内外研究概况和发展趋势有关朊病毒的研究已经于1976年（美国国家卫生研究院的GajdusekC.博士）和1997年（美国加州大学的PrusinerS.博士）两次获得诺贝尔生理学和医学奖[13,14]。然而，朊病毒的分子致病机制至今还没有彻底澄清，现有的有关其遗传和传染的模型也存在着许多分歧，因此1997年诺贝尔奖委员会授予PrusinerS.博士诺贝尔奖时预测在朊病毒研究领域中，必将诞生一批新的诺贝尔奖得主[12]。目前，关于朊病毒的分子致病机理和治疗药物筛选、开发的研究是国际上生物学、医学领域研究的前沿和热点。特别是在美国和欧洲，各级政府和财团投入大量的人力及物力进行这些方面的基础研究和产业化研发。在有关药物治疗的研究领域通过建立一系列的抗朊病毒药物筛选模型，迄今为止美国NIH的CaugheyB.实验室、法国的DormontD.实验室和意大利的ForloniG.实验室已经发现一些化学药物（如盐酸四环素、强力霉素等）在延长朊病毒感染潜伏期和延迟朊