复方牛膝口服液对卒中型自发性高血压大鼠的影响

作者简介：王丽君（1961—），女，广西陆川人，副研究员，从事中药药理研究。通讯作者：廖矛川，教授，从事中药新药研究，email:[e-mail]复方牛膝口服液对卒中型自发性高血压大鼠的影响王丽君1,2孙视越2朱焰2廖矛川1,2﹡（1中南民族大学，2上海市计划生育科学研究所）[摘要]目的：复方牛膝口服液对卒中型自发性高血压大鼠（SHRsp）的影响。方法：将SHRsp大鼠随机分为复方牛膝高、中、低剂量组，华佗再造丸组和病理组，每组10只，连续给药20天。观察复方牛膝口服液对SHRsp卒中后血压、神经状态变化、死亡率、脑系数及对海马区神经元的影响。结果：复方牛膝口服液可降低SHRsp大鼠血压，改善SHRsp脑卒中后的神经症状，延长卒中后存活时间，降低脑系数，降低脑卒中后大鼠死亡率，保护海马区神经元。结论：提示复方牛膝口服液对实验性SHRsp脑卒中有一定治疗作用。关键词：复方牛膝口服液；卒中型自发性高血压大鼠（SHRsp）；脑卒中TherapeuticEffectsofCompoundAchyranthesbidentataOralLiquor(CAB)inSHRspWanglijun1,2ShengZouyue2ZhuYan2LiaoMaochuan＊1，2(1.South-centralUniversityforNationalitiesWuhan430074,China;2.ShanghaiInsituteofPlannedParenthoodResearch,Shanghai200032,China)[Abstract]Objective:TostudythetherapeuticeffectsofCompoundAchyranthesbidentataOralLiquor(CAB)instroke-pronesponyaneouslyhypertensionrats(SHRsp).Methods:SixtySHRspwererandomlydividedintofivegroups:CAB1.0g/kg、2.0g/kg、4.0g/kg,HuatuoZaizaoWangroup(positivecontrolgroup)2.5g/kgandpathologicgroup(n=10).CABandHuatuoZaizaoWanwereusedthroughfilingstomacheverydayfor20days,pathologicgroupwasgivendistilledwater.TheeffectsofCABonbloodpressure,changesofnervestate,deathrate,brainindexandthepathologicchangesofhippocampalneuronofSHRspwereobserved.Results:CABcouldmarkedlydecreasebrainindex,deathrateofSHRspafterstroke.CABcouldimprovenervestateofSHRspafterstroke.AlsoCABcouldprolongsurvivaltimeandpreventpathologicchangeofhippocampalneuronofSHRspafterstroke.Conclusions:CABisadvantageousoftherapyingthestrokeinSHRsp..Keywords:CompoundAchyranthesbidentataOralLiquor;SHRsp;stroke.1．实验材料1.1动物1.1.1来源、种属、品纱：卒中型自发性高血压大鼠（SHRsp）大鼠，6周龄，雄性，由中国医学科学院阜外医院动物科提供，合格证号：医动字第01-1086号。1.1..2饲养条件：高血压大鼠专用饲料购自上海瑞金医院高血压研究所动物科，按纯系动物要求饲养，每笼5只，室温25±0.5℃，相对湿度50±10%，光照明暗各12小时。1.2受试物复方牛膝口服液(以下简称：复方牛膝)：由上海市计划生育科研所植物化学室提供，批号：20000515。1.3对照药物华佗再造丸：广州奇星药业有限公司，批号：99113851.4仪器RBP-l型大鼠尾压心率测定仪，中日友好医院临床医学研究所1.5试剂氯化钠：宜兴市第二化学试剂厂，批号：9210082.实验方法2.l实验方法将SHRsp和SD对照大鼠编号，称重，应用RBP-l型大鼠尾压心率测定仪测大鼠尾动脉基础收缩压，然后自由饮1%NaCl盐水，并于鼠料中加5%NaCl进行喂养。血压和体重每周各测1次。当大鼠达11周龄尾压超过30KPa、并按Bederson标准观察到有不同程度中风症状时[1,2]，将SHRsp大鼠随机分为复方牛膝高、中、低剂量组，华佗再造丸组和病理组，每组10只，以SD大鼠作为正常对照[3]，每天连续给药，观察各动物的神经症状和死亡情况，血压和体重每周各测1次。病理组和对照组分别给予等量自来水。2.2给药途径：灌胃2.3给药时间：各组动物持续给药20天2.4观察指标：（1）血压变化（2）脑卒中行为及神经症状（3）记录各组动物存活时间及死亡率（4）给药第21天猝死动物，（连同在此之前卒中死亡的动物），称重后取脑，计算脑系数（5）以20％福尔马林固定脑组织，石蜡包埋，HE染色，光镜下进行病理检查，观察大脑海马区神经元的病变情况3.结果3.1复方牛膝对SHRsp大鼠卒中后血压影响结果显示：SHRsp大鼠卒中时血压明显高于正常对照组。ig复方牛膝可降低卒中大鼠的血压（P＜0.05），结果见表3．1。表3.1复方牛膝对SHRsp卒中大鼠血压的影响（XSD）组别N剂量g/kg血压(mmHg)给药前给药后正常对照组病理组华佗再造丸组复方牛膝低剂量复方牛膝中剂量复方牛膝高剂量101010101010----2.51.02.04.0127.0±6.7237.5±9.6*211.5±9.4*225.0±12.7*213.9±10.2*233.5±14.9*130.5±11.9216.3±19.5172.7±15.1▲194.4±14.5▲183.9±11.4▲192.0±16.9▲*P＜0.05与正常对照组相比；▲P＜0.05与给药前相比3.2复方牛膝对SHRsp大鼠卒中后存活时间及平均寿命的影响结果显示：复方牛膝低剂量和中剂量均可显著提高脑卒中后大鼠的存活时间，延长动物平均寿命，降低动物卒中后的死亡（*P＜0.05）；复方牛膝高剂量组动物可幸存至实验结束，无死亡，见表3.2。表3.2复方牛膝对SHRsp大鼠卒中后存活时间的影响（至实验结束时）（XSD）组别N剂量g/kg死亡数死亡率(%)卒中后存活时间平均寿命（天）正常对照组病理组华佗再造丸组复方牛膝低剂量复方牛膝中剂量复方牛膝高剂量101010101010----2.51.02.04.00602100600*20*10*0*--2.6±0.5--7.5±0.5*7*--6348.5±9.963*60.5±5.3*62.7±0.9*63**P＜0.05与病理组相比3.3复方牛膝对SHRsp大鼠卒中后神经症状的影响高盐饲喂后各组动物的血压和体重随鼠龄而上升，10周龄后SHRsp组大鼠逐渐开始出现卒中症状，表现为：毛色干枯无光泽，形体消瘦，行动迟缓，精神萎靡，嗜睡，肢体蜷缩，鼻粘膜出血，尿失禁，抽搐、癫痫大发作，偏瘫或全瘫。ig复方牛膝后，SHRsp神经症状有不同程度好转，表现为抽搐、癫痫大发作、嗜睡、偏瘫、鼻粘膜出血、及尿失禁症状消退。按照Bederson的标准，高盐负荷及给药前后动物神经病行为分级结果见表3.3表3.3i.g.复方牛膝对高盐负荷后幸存SHRsp大鼠神经症状的影响组别（g/kg）剂量（g/kg）神经症状分级高盐负荷给药后（幸存大鼠）0IIIIIIIV0IIIIIIIV空白病理组华佗再造丸组复方牛膝低剂量复方牛膝中剂量复方牛膝高剂量----2.51.02.04.09000001000000000000564660746441000000007540043552010006000000附：Bederson神经分级标准[1]0：正常I：运动经度减少或轻度兴奋II：运动明显减少或激惹性亢进III：不能步行、忧郁性症状IV：不能站立、后肢麻痹、偏瘫、尿失禁等3.4复方牛膝对SHRsp大鼠脑系数的影响结果显示：与病理组相比，复方牛膝低、中、高剂量均可显著降低脑系数（*P＜0.05），见表3.4。表3.4复方牛膝对SHRsp大鼠脑系数的影响（XSD）×1000组别N剂量（g/kg）脑系数对照组病理组华佗再造丸组复方牛膝低剂量复方牛膝中剂量复方牛膝高剂量101010101010----2.51.02.04.04.57±0.209.39±0.38△7.58±0.37*8.34±0.49*8.27±0.33*8.06±0.63*△P＜0.05与正常对照组相比*P＜0.05与病理组相比3.5复方牛膝对SHRsp大鼠海马区神经元的影响光镜下可见，对照组SD大鼠脑组织正常，海马区神经细胞多层排列，神经细胞纤维走行清晰，核染色质分布均匀。病理组SHRsp大鼠脑组织内有不同程度的出血、小血管扩张及脑软化，神经细胞的纤维走行不清楚，甚至消失，神经元消失，复层排列消失，并伴有核固缩；复方牛膝低剂量组神经细胞损伤减轻：中剂量组神经细胞损伤明显好转；高剂量组神经纤维走行清晰，神经细胞呈多层排列，核染色质分布均匀，接近正常组织；说明复方牛膝对海马区神经元有保护作用。4.讨论SHRsp是目前国际公认的较理想的脑卒中动物模型，其脑部病理改变类似于人类，该模型80％以上动物死于脑卒中，高盐喂养更可加速高血压的发展[3]，卒中大鼠脑组织内有不同程度的出血、小血管扩张及脑软化，神经细胞的纤维走行不清楚，甚至消失，神经元复层排列消失，给予复方牛膝后，动物血压下降，卒中行为状态有明显好转，死亡率降低；病理切片显示复方牛膝中、高剂量组海马区神经元呈多层排列，核染色质分布均匀；已接近正常，说明复方牛膝可改善脑卒中症状，降低脑卒中死亡率，对海马区神经无有保护作用。5.结论复方牛膝可降低SHRsp大鼠血压，改善SHRsp大鼠脑卒中后的神经症状，延长卒中后存活时间，降低脑系数，降低脑卒中后大鼠死亡率，对海马区神经元有保护作用，提示复方牛膝对实验性SHRsp大鼠脑卒中有一定治疗作用。7.0参考文献[1]BedersonJB.ratmiddlecerebralarteryocclusion，evaluationofthemodelanddevelopmentofaneurolgicexamination(J).Stroke，1986,17:472.[2]张均田主编.现代药理实验方法(M).北京医科大学中国协和医科大学联合出版社,1998.[3]蒋玉凤，黄启福.清开灵注射液治疗SHRsp出血性中风病的研究(J).北京中医药大学学报，1997，20（2）：34.