外界因素对酶活性的影响

外界因素对酶活性的影响一、实验目的1.了解外界因素对酶活性及酶促反应速度的影响。2.加深对酶特性的认识。二、实验原理酶的化学本质是蛋白质，它极易受外界条件的影响而改变它的构象及性质，因而也必然会影响到它的催化活性。酶对温度、pH、酶浓度及某些离子浓度等变化很敏感。(一)pH值对酶活性的影响酶的活性受环境pH的影响极为显著，通常各种酶只有在一定的pH范围内才能表现它的活，一种酶表现其最高活性时的pH值称为该酶的最适pH。高于或低于最适pH值时，酶的活性降低。酶的最适pH值受酶的纯度、底物的种类和浓度、缓冲液的种类和浓度以及环境温度等条件影响。(二)温度对酶活性的影响每种酶都有其最适温度，高于或低于此温度酶的活性都降低。一般而言，酶处于过高的温度环境中，会使酶活性永久地丧失；而处于极低温度的环境中只会使酶活性受到抑制，一旦温度适宜，酶又会全部或部分地恢复其活性。(三)酶浓度对酶促反应速度的影响在其它条件不变的情况下，若反应物浓度大大高于酶浓度时，则反应速度随酶浓度增加而增加，两者间成正比关系，即：V=k[E]但若反应底物浓度较低，而且酶的浓度足够高时，增加酶浓度，反应速度基本不变。(四)离子对酶活性的影响就唾液淀粉酶而言，低浓度Cl一可以增加酶活性，高浓度的Cl一或者低浓度的Cu2+则会抑制酶的活性，而低浓度的Na+、SO42-等对酶活性没有影响。不同的酶对不同的离子具有不同的效应。三、实验操作(一)pH对酶活性的影响1．缓冲溶液的配制取6只洁净的三角烧瓶，按表1编号和加试剂：表1.磷酸氢二钠一柠檬酸缓冲溶液的配制三角烧瓶编号123456pH值5.46.26.87.07.48.00.2mol／L磷酸氢二钠(m1)11.1513.2215.4516.4718.1719.450.1mol／L柠檬酸(m1)8.856.784.553.531.830.552.pH对酶活性的影响取6支洁净试管，分别编号后，按表2操作：表2pH对酶活性的影响管号123456pH值5.46.26.87.07.48.0缓冲液量(m1)333333含NaCl的0.5％淀粉(m1)222222稀释100倍唾液(m1)222222充分摇匀37℃保温，lmin后，用滴管从3#管中吸l滴反应液，放白瓷板用碘液检验(1滴)。以后每隔1min检验一次。当3#管反应液遇碘液呈淡黄色时，立即向6支管中加碘液碘液(滴)222222充分摇匀实验结果(二)温度对酶活性的影响取3支洁净试管，按表3操作：表3温度对酶活性的影响管号123pH6.8磷酸缓冲液(m1)222含NaCl的O.5％淀粉液(m1)222稀唾液1：50(m1)111立即处理温度0℃100℃37℃放置15min分别从l、2、3支试管中取出一滴在白瓷板上用碘液检验结果改变处理温度至37℃37℃37℃作用时间15min再分别从1、2、3管中取出一滴在白瓷板上用碘液检验结果(三)酶浓度对酶活性的影响1．取3支洁净试管，编号，按表4加入淀粉液，缓冲液，加毕后放人37℃恒温水浴中保温5min。表4酶浓度对酶活性的影响管号含NaCl的O．5％淀粉液pH6.8的缓冲液稀释唾液褪色时间105010013ml2ml1ml23ml2ml1ml33ml2ml1ml2．保温后，快速加不同浓度的稀释唾液，摇匀，立即放入37℃恒温水浴中。计时，并每隔1min从各管中取出1滴，用碘液检验，记录从加进酶液至碘液检验为橙黄色所需时间。(四)离子对酶活性的影响取3支洁净试管，编号后按表5操作：表5离子对酶活性的影响管号1231％NaCl(m1)10.1％CuSO4(m1)1蒸馏水(m1)1O．1％淀粉液(m1)333100倍稀释唾液(m1)11137℃恒温15min，然后冷却碘液(滴)222结果五、实验建议(1)因各人的唾液淀粉酶活性有所差异，若某一碘液检验结果为全部变为淡黄色，或无一变为淡黄色，则需增大或减少唾液稀释倍数，或者改变酶作用时间。(2)配制缓冲液时，吸量要准确。(3)检验离子对酶活性影响时，切勿吸错或污染了试剂。六实验报告及作业1．以反应速度为纵坐标，pH值、温度或酶浓度为横坐标，作出反应速度和pH，温度或酶浓度的关系图。2．唾液淀粉酶的最适pH和最适温度是多少？如何进一步确定？3.温度为0℃和100℃两支试管中反应液遇碘呈蓝色，其原因有何不同？若恢复最适温度，其结果为什么有差异？4.如何确定氯化钠中氯离子是激活剂，硫酸铜中铜离子是抑制剂？5.什么是酶的最适温度、最适pH，有何实践意义？温度、pH的改变对酶活性有何影响？6.为什么最适温度不是一个物理常数？最适pH是否为一个常数？7.进行酶的实验必须注意控制哪些条件？为什么？