大纲不要求的实验

实验6.1红细胞比容的测定[实验目的]学习和掌握测定红细胞比容的方法。[实验原理]将定量的抗凝血灌注于特制的毛细玻璃管中，定时、定速离心后,有形成分和血浆分离，上层呈淡黄色的液体是血浆，中间很薄一层为灰白色，即白细胞和血小板（或栓细胞），下层为暗红色的红细胞，彼此压紧而不改变细胞的正常形态。根据红细胞柱及全血高度，可计算出红细胞在全血中的容积比值，即为红细胞比容（压积）（图6.1-1）。[实验对象]动物种类不限[实验药品]草酸盐抗凝剂(0.8g草酸钾·H2O+1.2g草酸銨·H2O+甲醛1ml+蒸馏水至100ml)或10g·L-1肝素，橡皮泥或半融化状态石蜡，75%酒精。[仪器与器械]毛细玻璃管（内径1.8mm，长75mm）或温氏分血管,酒精灯，水平式高速毛细管离心机(或普通离心机)，天平，注射器，长针头，干棉球，刻度尺（精确到mm）。[实验方法与步骤]1.微量毛细管比容法（1）以抗凝剂湿润毛细管内壁后吹出，让壁内自然风干或于60℃～80℃干燥箱内干燥后待用。（2）取血：常规消毒，穿刺指（或尾）尖，让血自动流出，用棉球擦去第一滴血，待第二滴血流出后，将毛细管的一端水平接触血滴，利用虹吸现象使血液进入毛细管的2/3（约50mm）处。（3）离心：用酒精灯溶封或橡皮泥、石蜡封堵其未吸血端，然后封端向外放入专用的水平式毛细管离心机，以12000r·min-1的速度离心5min。届时用刻度尺分别量出红细胞柱和全血柱高度（单位mm）。计算其比值，即得出红细胞比容。2.温氏分血管比容法（1）取大试管和温氏分血管各一支，用抗凝剂处理后烘干备用。（2）取血：可采取静脉取血或心脏取血，将血液沿大试管壁缓慢放入管内，用涂有凡仕林的大拇指堵住试管口，缓慢颠倒试管2～3次，让血液与抗凝剂充分混匀，并不能使血细胞破碎，制成抗凝血。用带有长注针头的注射器，取抗凝血2ml将其插入分血管的底部，缓慢放入，边放边抽出注射针头，使血液精确到10cm刻度处。（3）离心：将分血管以3000r·min-1离心30min，取出分血管，读取红细胞柱的高度，再以同样的转速离心5min，再读取红细胞柱的高度，如果记录相同，该读数的1/10即为红细胞比容。[注意事项]1.选择抗凝剂必须考虑到不能使红细胞变形、溶解。草酸钾使红细胞皱缩，而草酸銨使红细胞膨胀，二者配合使用可互相缓解。鱼类多用肝素抗凝。2.血液与抗凝剂混合、注血时应避免动作剧烈引起红细胞破裂。3.用抗凝剂湿润的毛细玻璃管（或温氏分血管）内壁后要充分干燥。血液进入毛细管内的刻度读数要精确，血柱中不得有气泡。[实验结果]报告该实验动物的红细胞比容。并将全班的结果加以统计,用平均值±标准差表示[思考题]1.在那些情况下，红细胞的比容明显增加。2.测定红细胞比容时，一种常出现的误差来源是什么？误差倾向于增加还是减少？3.测定红细胞比容的实际意义是什么？实验6.9ABO血型鉴定和交叉配血实验[实验目的]观察红细胞凝集现象。学习ABO血型鉴定方法，掌握血型鉴定原理。[实验原理]ABO血型是根据红细胞表面存在的凝集原决定的。存在A凝集原的称为A血型，存在B凝集原的称为B血型。而血清中还存在凝集素。当A凝集原与抗A凝集素相遇或B凝集原与抗B凝集素相遇时，会发生红细胞凝集反应。一般A型标准血清中含有抗B凝集素，B型标准血清中含有抗A凝集素，因此可以用标准血清中的凝集素与被测者红细胞反应，以确定其血型。同种动物不同个体的红细胞凝集称为同族血细胞凝集作用。不同动物的血液互相混合有时也可产生红细胞凝集，称为异族血细胞凝集作用。对于动物的天然血型抗体了解不多，而且免疫效价也很低，所以同种动物第一次输血，一般不会引起严重后果。但第二次输血就必须进行交配试验，才能决定是否能相互输血。[实验对象]正常人。[实验药品]A型B型标准血清。[仪器器械]双凹玻片，采血针，竹签，75%酒精棉球，干棉球，玻璃蜡笔（记号笔），尖头滴管，显微镜。[实验方法与步骤]1.ABO血型的鉴定：（1）取双凹玻片一块，在两端分别标上A和B，中央标记受试者的号码。（2）在A端和B端的凹面中分别滴上相应标准血清少许。（3）75%酒精棉球消毒无名指端，用采血针刺破指端，用消毒后的尖头滴管吸取少量血（也可用红细胞悬浮液，见下述），分别与A端和B端凹面中的标准血清混合，放置1～2min后，能肉眼观察有无凝血现象，肉眼不易分辨的用显微镜观察。（4）根据凝集现象的有无判断血型（图6.9-1）。2.交叉配血实验（1）分别对供血动物和受血动物消毒、静脉取血，制备成血清和红细胞悬浮液。红细胞悬浮液是将受检者的血液一滴，加入装有生理盐水约1ml的小试管中，即为2%的红细胞悬浮液。加盖备用。（2）取双凹玻片一块，在两端分别标上供血动物和受血动物的名称或代号，分别滴上它们的血清少许。（3）将供血者的红细胞悬浮液吸取少量，滴到受血者的血清中（称为主侧配血,图6.9-2）；将受血者的红细胞悬浮液吸取少量，滴入供血者的血清中（称为次侧配血），混合。放置10～30min后，肉眼观察有无凝集现象，肉眼不易分辨的用显微镜观察。如果两次交叉配血均无凝集反应，说明配血相合，能够输血。如果主侧发生凝集反应，说明配血不合，不论次侧配血如何都不能输血。如果仅次侧配血发生凝集反应，只有在紧急情况下才有可能考虑是否输血。[注意事项]1.指端、采血针和尖头滴管务必做好消毒准备。做到一人一针，不能混用。使用过的物品（包括竹签）均应放入污物桶，不得再到采血部位采血。2.精消毒部位自然风干后再采血，血液容易聚集成滴，便于取血。取血不宜过少，以免影响观察。3.采血后要迅速与标准血清混匀，以防血液凝固。4.在进行交叉配血实验时，一定要防止将主侧配血和次侧配血搞混了。[实验结果]报告你的血型。[思考题]1.ABO血型分类标准是什么？2.除了ABO血型外还有有什么血型系统？分类标准是什么？3.为什么在配血试验时，如果主侧发生凝集反应，不论次侧配血如何都不能输血？实验7.10心血管活动的神经体液调节※[实验目的]学习记录哺乳动物动脉血压的直接测定方法，并观察神经-体液因素对心血管活动的调节。[实验原理]在正常生理情况下，心血管活动受神经、体液和自身机制的调节。心脏受交感神经和副交感神经的支配。心交感神经兴奋时，使心率加快、心肌收缩力加强，心内兴奋传导加快，心输出量增加、动脉血压升高。心迷走神经兴奋时，使心率减慢、心房肌收缩力减弱、房室传导减慢，从而使心输出量减少、动脉血压下降。在神经调节中以颈动脉窦-主动脉弓的减压反射尤为重要，当动脉血压升高时,压力感受器发放冲动增加,通过中枢反射性引起心率减慢、心肌收缩力减弱、心输出量下降、血管舒张和外周阻力降低，使血压降低。反之，当动脉压下降时，压力感受器发放冲动减少，神经调节过程又使血压回升。支配血管的交感缩血管神经兴奋时，使血管收缩、外周阻力增加、动脉血压升高。家兔的压力感受器的传入神经在颈部从迷走神经分出,自成一支，称为减压神经，其传入冲动随血压变化而变化。心血管活动还受肾上腺素和去甲肾上腺素等体液因素的调节。它们对心血管的作用既有共性，又有特殊性。关键取决于心、血管壁上哪一种受体占优势。肾上腺素对α与β受体均有激活作用，去甲肾上腺素主要激活α受体而对β受体作用很小，因而使外周阻力增加，动脉血压升高，但对心脏的作用要比肾上腺素弱。[实验对象]家兔。[实验药品]生理盐水，20%氨基甲酸乙脂（或3%戊巴比妥钠），肝素（500U·ml-1），1:10000肾上腺素，1:10000去甲肾上腺素，1:10000乙酰胆碱。[仪器与器械]计算机生物信号采集处理系统（或二道生理记录仪、刺激器），兔手术台，手术器械一套，气管插管，动脉夹，动脉套管、血压换能器，保护电极，棉线，纱布，棉球、注射器（50、10、2ml），支架，双凹夹。[实验方法与步骤]1.实验准备：（1）麻醉和固定：家兔称重后，耳缘静脉缓慢注射20％氨基甲酸乙酯（5ml·kg-1）或3%戊巴比妥钠（1ml·kg-1）进行麻醉。当动物四肢松软，呼吸变深变慢，角膜反射迟钝时，表明动物已被麻醉，即可停止注射。将麻醉的家兔仰卧位固定于兔手术台上。图7.10-1兔左侧内脏大神经的解剖位置（2）分离颈部神经、血管和插气管插管颈部剪毛，沿颈部正中线切开皮肤5~7cm，用止血钳钝性分离皮下组织及浅层肌肉，暴露和分离气管；分离左、右两侧颈总动脉（左颈总动脉尽量分离长些，以做动脉插管用。当向头端追索到甲状软骨上缘，可见到左颈动脉分支为颈外和颈内动脉，在颈内动脉基部有一膨大处，为颈动脉窦。）；分离右侧的迷走神经、交感神经和减压神经。在分离的气管、颈总动脉及神经下方各穿一不同颜色的线备用(见3.7.4)。并在减压神经下放一钩状记录电极，实验过程中将电极悬空（但不要拉得过紧）。将神经周围的皮肤提起做一皮兜，在神经表面滴上38℃液体石蜡，以防止神经干燥，并起到绝缘效果。（3）进行气管插管（见3.7.4）（4）分离内脏大神经（此步也可放在刺激内脏大神经前进行）：将动物右侧卧位，在腰三角作一长4~5cm的斜行切口，逐层分离至腹膜处，从左侧腹后壁（或沿腹中线切开皮肤）找到左肾，并将左肾向下推压，在其右上方可见一浅黄色黄豆粒大小的肾上腺。沿肾上腺上方可见内脏大神经（图7.10-1），小心分离主干，在其下方穿一丝线，并安放好保护电极备用。（5）插动脉插管：做插管手术前经耳缘静脉注射肝素（500U·(kg体重)-1），在左侧颈总动脉插入动脉插管2．连接实验装置：（1）二道生理记录仪将血压换能器固定在支架上，并与二道生理记录仪的血压放大器输入端相连。调整记录仪，对血压放大器定标。校正选择调至13.3kPa（100mmHg）,灵敏度置于50，记录笔上移2cm。（2）计算机生物信号采集处理系统将动脉插管通过三通与血压换能器连接，血压换能器与计算机生物信号采集处理系统的压力通道连接；刺激电极与系统的刺激输出连接；减压神经的记录电极导线与系统的一个通道连结。启动计算机生物信号采集处理分析系统，按系统程序提示进行血压信号定标，调整放大增益。3.实验项目（1）记录正常情况下减压神经放电波形和动脉血压波形，观察二者变化关系注意观察减压神经的群集性放电与血压的波动是否同步?每一群集性放电持续时间?血压正常值是多少?同时辨认血压波的一级波和二级波，三级波(图7.10-2)：一级波（心搏波），由心室舒缩活动所引起的血压波动，心缩时上升，心舒时下降，其频率与心率一致。二级波（呼吸波），由呼吸运动所引起的血压波动，吸气时血压先下降，继而上升，呼气时血压先上升，继而下降，其频率与呼吸频率一致。三级波，不常出现，可能由心血管中枢的紧张性活动的周期变化所致。（2）夹闭颈总动脉用动脉夹夹闭右侧颈总动脉10～15s，观察血压与减压神经放电的变化。在出现一段明显变化后，突然放开动脉夹，血压又有何变化。（3）牵拉颈总动脉手持左侧颈总动脉上的远心端结扎线，向心脏方快速牵拉3s。观察血压与减压神经放电的变化。若持续牵拉，血压与减压神经放电会有何变化？（4）静脉注射乙酰胆碱待血压基本稳定后,由耳缘静脉注入1:10000乙酰胆碱0.2～0.3ml，观测血压与减压神经放电的变化。注意动脉血压降低到何种程度时，群集型放电才减少?或完全停止及其恢复过程(图7.10-3)。（5）静脉注射去甲肾上腺素待血压基本稳定后，由耳缘静脉注入1:10000去甲肾上腺素0.2～0.3ml，观测血压与减压神经放电的变化。注意何时冲动发放增多?何时分辨不出群集形式?直到血压继续增加而发放冲动的频率不再增加(图7.10-4)。（6）刺激迷走神经外周端待血压基本稳定后，结扎并剪断右侧迷走神经，电刺激迷走神经外周端，观察血压和心率的变化。待血压变化明显时停止刺激。（7）刺激内脏大神经待血压基本稳定后，用保护电极刺激内脏大神经，观察血压和心率的变化（注：刺激前需分离内脏大神经）。（8）刺激减压神经在血压基本恢复正常后，双重结扎减压神经，并在两结扎线中间剪断减压神经，分别用中等强度电流刺激减压神经的中枢端和外周端，并同时作标记。观察心率与血压变化，待血压出现较明