反相色谱法测定尼泊金甲酯

实验报告实验课程：仪器分析学生姓名：崔清玥学号：41307209专业班级：化学（创新）1301实验名称：反相色谱法测定尼泊金甲酯一、实验目的1、了解反相色谱法测定试样中尼泊金甲酯的含量的实验原理和方法；2、了解高效液相色谱仪工作原理和使用方法；3、掌握外标法进行色谱定性分析的方法和原理。二、实验原理1、尼泊金甲酯的物理化学性质又称对羟基苯甲酸甲酯（结构式如右图），又叫尼泊金甲酯，白色结晶粉末或无色结晶，易溶于醇，醚和丙酮，极微溶于水，沸点270-280℃。主要用作有机合成、食品、化妆品、医药的杀菌防腐剂，也用作于饲料防腐剂。2、液相色谱工作原理在经典色谱分离方法上，色谱柱是以特殊的方法用小颗粒填充物填充而成。并给流动相施加高压，以提高色谱分离效果。3、外标法原理先测量一系列尼泊金甲酯标准溶液的色谱峰，得到峰面积。然后用峰面积对溶度作图，得一标准曲线。然后在相同实验条件下测定样品中尼泊金甲酯的峰面积，由标准曲线上找出该峰面积下所对应的溶度，从而算出试样中尼泊金甲酯的含量。三、仪器及药品高效液相色谱仪、色谱柱（长75mm，柱径4.6mm）、紫外检测器（254nm）、微量注射器（25µL）、移液枪；10mg/mL尼泊金甲酯标准溶液、流动相：甲醇：水=6：4混合试剂，流速为1mL/min、未知溶液、蒸馏水。四、实验过程1.以流动相为溶剂，配制0.02mg/mL、0.04mg/mL、0.06mg/mL、0.08mg/mL、0.10mg/mL的尼泊金甲酯标准溶液。2.设置好仪器的各参数，测定标准溶液（每次进样为20uL），得色谱峰并记录峰面积和出峰时间（死时间tR）。3.进20µL未知溶液，得色谱峰，记录峰面积和出峰时间（死时间tR）。重复测OHOO定三次。附：1.每组数据的查询处理查询数据——通道——更新——选中——右击处理——点击清除校正——结果——更新——选中数据——右击预览——打印——选择副本——确定2.每组进样前，改变项目名称和进样量为20µL。3.根据标准溶液色谱图1—5中峰面积，绘出峰面积对浓度的标准曲线。五、数据记录和处理实验数据记录如下表：1.根据标准溶液色谱图1—5中峰面积，绘出峰面积对浓度的标准曲线。数据试剂浓度(mg/mL)tR(min)峰面积(μV∙s)标准溶液10.023.06542426420.042.98374162230.063.027109086840.083.032152442050.103.0311897829标准曲线：A=1.865×107×c+168222.根据混合样的色谱图确定尼泊金甲酯的峰面积，然后在标准曲线上查出被测组分的浓度。A1=1014837，代入A=1.865×107×c+16822，得c1=0.054mg/mLA2=1074829，代入A=1.865×107×c+16822，得c2=0.057mg/mLA3=1008206，代入A=1.865×107×c+16822，得c3=0.053mg/mLc平均=0.055mg/mL，RSD=3.86％六、思考题1.外标法与内标法比较有什么优点？答：内标法是选择适当的物质作为内标物质，定量加入被测样品中，根据被测组分和内标物质的峰面积之比，乘以校正因子，对应内标物质加入量所进行含量测定的方法。外标法又称标准曲线法，是依照测量标准品所绘制的曲线来计量被测样品的含量的方法。外标法比内标法有以下优点：简单，适和大量样品分析。七、结果反思实验过程中进样是要快速；溶液的配制要精准；每次要润洗次数要足够多；为得到的数据线性关系更佳，可多测量几次。1．控制流速不得超过1ml/min。2．进样要充分洗涤。3．接触甲醇后要洗手洗脸。4．开机从左到右，关机从右向左。5．仪器若长时间不用，用注射器抽洗阀门（上下两个）中的溶液，以减少泵的磨损；数据试剂浓度(mg/mL)tR(min)峰面积(μV∙s)未知溶液1待测3.02510148372待测3.01110748293待测3.0131008206