培养基的制备2

实验二、培养基的制备一、实验原理：•培养基是供微生物生长、繁殖和代谢的营养物质•适宜的pH值、一定的缓冲能力及合适的渗透压•半固体培养基：液体培养基中加入0.5-1%琼脂•固体培养基：液体培养基中加入1-2%琼脂•琼脂是从石花菜等海藻中提取的多糖，是应用最广泛的凝固剂，它在96-100℃融化，46℃以下凝固•培养基经灭菌后方可使用•根据培养基的用途：可分为选择培养基、增殖培养基、鉴别培养基等•选择培养基：在培养基中加入某种物质以杀死或抑制不需要的菌种生长的培养基，如结晶紫能抑制革兰氏阳性细菌的生长等•增殖培养基：在普通培养基中加入一些某种微生物特别喜欢的营养物质，以增加这种微生物的繁殖速度，逐渐淘汰其它微生物，这种培养基称为增殖培养基•鉴别培养基：在培养基中加入某种试剂或化学药品，使难以区分的微生物经培养后呈现出明显差别，因而有助开快速鉴别某种微生物。如常用的麦康凯培养基，它含有胆盐、乳糖和中性红。胆盐具有抑制肠道菌以外的细菌的作用（选择性），乳糖和中性红（指示剂）能帮助区别乳糖发酵肠道菌（如大肠杆菌）和不能发酵乳糖的肠道致病菌（如沙门氏菌和志贺氏菌）•固体培养基：分离、纯化、生物活性检测•半固体培养基：可作穿刺试验，观察细菌的运动及短期的保存菌种•液体培养基：确定细菌的生长曲线、保存菌种二、目的要求1、掌握基础培养基制备的原理和要求2、掌握一般培养基的制备过程及pH的测定三、培养基制作的注意事项•容器不含抑菌物•合适的pH值（7.2-7.6）•药匙不要混用，如需要反复使用时应擦拭后再使用•制好后需高压灭菌，如因特殊情况不能及时灭菌应放冰箱内暂存•不同培养基各有配制特点：如加入抗生素、血清等应注意温度不能太高•无菌检查：随机挑选制备好的培养基一两份置37℃恒温箱内24h四、培养基制备的一般过程•称取→溶解→调pH→定容至1000ml→过滤→分装→灭菌→菌检•称取：牛肉膏可以在烧杯上称量，随后放入热水中；蛋白胨极易吸潮，称量时要迅速•溶解：向烧杯中加入少许所需水量，隔以石棉网小心加热，用玻璃棒搅拌•调pH：待培养基冷至室温时检测其pH值基础培养基制备1、配方：牛肉膏5克蛋白胨10克NaCl5克磷酸氢二钾1克用蒸馏水定容到1000ml2、按量称取→溶解→调pH→过滤→分装10根试管→灭菌→菌检琼脂培养基的制备测好PH后，称量7.5g琼脂粉，用肉汤定容至500ml，加热，待琼脂完全溶解后分装10根试管作业1、培养基按用途及状态分成几类？各有什么用途？2、制作培养基时应注意哪几点？