动物标本制作论文

动物标本制作论文姓名：王涛学号：P092114133学院:生命科学与工程学院专业：动物医学班级：2009级（2）班时间：2010年12月28日星期二动物标本制作的发展【摘要】目的应高度重视HBsAg弱阳性复检试管标本与复检血辫标本检测结果存在明显差异，正确判定最终血液检测结果，提高血液的质量和安全性。方法采用ELISA，当出现HBsAg检测呈弱阳性复检试管标本时，再从复检试管标本对应的血袋上剪取辫管血作为复检血辫标本，将复检试管标本和复检血辫标本两者进行平行双孔重复检测。结果发生复检试管标本与复检血辫标本检测结果往往不相吻合，既复检试管标本呈阳性而复检血辫标本呈阴性结果。结论为了提高血液质量，保证输血安全，根据最终检测结果判定血液质量是否合格，决不能仅取决于血袋复检血辫标本检测结果。而应综合各种因素来分析，避免检测结果最终判定错误造成阴差阳错，最大限度提高血液安全性。【关键词】献血者;EDTA-NA2抗凝剂;CPDA-1保存液;复检试管标本;复检血辫标本；解剖学心腔结构标本制作《献血法》实施以来，本站采集血液均来自无偿献血者，但在实际工作中仍可检测出输血相关传染病标志物如：HBsAg，Anti-HCV等。由于对献血者的血液检测标本缺乏严格统一的规定，复检试管标本留样五花八门，有使用EDTA-NA2抗凝血液标本的，也有使用枸橼酸盐抗凝血液标本的，也有使用肝素抗凝血液标本的，暂不讨论基质效应［1］是否对检测结果有影响。根据我站工作中经验，目前血液检验的安全模式是无论复检试管标本那种传染病标志物呈阳性或反应性，都应从复检试管标本对应的血袋母袋上再留取辫管血作为复检血辫标本，与复检试管标本进行平行双孔重复检测。以证实复检试管标本与复检血辫标本是一一对应，也就是留取的复检试管标本是与血袋母袋对应。复检试管标本与复检血辫标本进行平行双孔重复检测的目的，第一防止由于工作人员张冠李戴留错复检试管标本，发生复检试管标本是张三的而检测结果实际却是李四的情况，从而避免造成将合格血报废，却将阳性不合格血发往临床的非常严重后果。第二能排除由于加样或其他因素交叉污染引起的复检试管标本检测结果“假阳性”，避免宝贵血液资源浪费。但决不能完全依靠复检血辫标本结果作为检测最终结果来判定血液质量是否合格。因为这样是不科学的，是错误的，也是极危险的。现只探讨HBsAg弱阳性复检试管标本与复检血辫标本检测结果OD值的差异，因为HBsAg强阳性复检试管标本与复检血辫标本检测结果OD值均远远大于Cutoff值。排除非一一对应和交叉污染标本，检测结果不会出现一阳一阴的现象，不再讨论。而HBsAg弱阳性复检试管标本检测结果OD值在0.105～0.475之间，而复检血辫标本检测结果OD值往往小于Cutoff值，小于0.105，检测结果出现一阳一阴的现象，检测最终结果如何来判定显得尤其重要，因为它直接关系到血液质量和血液安全性。现共同探讨如下。1材料与方法1.1试剂自制3%EDTA-NA2（乙二酸四乙胺二钠）抗凝剂；CPDA-1保养液（血袋中含）。1.2检测标本采血完毕后从血袋采血针头放4.5～5.0ml血液于加入3%EDTA-NA2抗凝剂200ul的试管中，此标本是复检试管标本，复检试管标本HBsAg检测呈弱阳性，再剪血袋的中段热合辫管，将其中血液放入空试管中约2.5ml，此标本是复检血辫标本。1.3设备瑞士哈美顿公司MLATplus2全自动样本处理机和MLFAME酶免分析系统，微量加样器。1.4方法采用ELISA检测血浆中HBsAg，ELISA试剂由上海科华提供，批批检合格，在效期内使用，每批每板QC在控制范围。实验标本均为复检试管标本HBsAg检测呈弱阳性，然后与复检血辫标本进行平行双孔重复检测，排除有明显交叉污染和非一一对应标本。1.5统计学处理统计学方法采用t检验。2.结果见表1。统计结果采用t检验，t=7.97，P＜0.001，说明HBsAg弱阳性复检试管标本与复检血辫标本检测结果OD值存在显著差异，复检血辫标本与阴性标本OD值也存在显著差异。表1HBsAg弱阳性复检试管标本与复检血辫标本检测结果OD值3.讨论本站使用长春生复含CPDA-1保存液血袋，血袋辫管长度1000mm，除去针头剩余长度930mm，辫管内径3.2mm，采血完毕后，此辫管内存有不含任何抗凝剂的7.5ml未抗凝血，经反复实践实际容量与计算值相符，放出4.5～5.0ml于加入3%EDTA-NA2抗凝剂200ul试管中作为复检试管标本，那么辫管内仍残留2.5ml未抗凝血，然后用热合机均匀压头、中、尾三段辫管，近针头端称为头段长为300～330mm辫管将被剪下作为检测血型和保留标本，此段辫管内恰好含有2.5～2.7ml血液，此时辫管内原有不含任何抗凝剂的7.5ml未抗凝血全部挪作他用，剩余的中、尾两段辫管内存血液是由血袋CPDA-1保养液中枸橼酸盐抗凝的，分别作为复检血辫标本和临床配血试验标本，既复检试管标本是由EDTA-NA2抗凝，它的稀释倍数是0.20/4.70-5.20=0.043-0.039，均值为0.041倍。复检血辫标本是由血袋CPDA-1保养液中枸橼酸盐抗凝，本站严格执行采血量标准并使用摇摆称充分混匀采集血液，200ml采血袋和400ml采血袋所含保养液分别为28ml和56ml，复检血辫标本它的稀释倍数是28/228或56/456=0.123，复检血辫标本它的稀释倍是复检试管标本的0.123/0.041=3.0倍。同理，ELISA试验中，其他检测项目如Anti-HCV,Anti-HIV,Anti-TP复检血辫标本与复检试管标本也同样存在这样的关系。举例说明：Cutoff=0.105，某一HBsAg初试呈弱阳性复检试管标本OD值=0.196，判定结果为阳性。复检血辫标本OD值=0.068，同一块反应板其他阴性标本OD值=0.018，此时如按复检血辫标本OD值判断结果为阴性，如果将此作为最终结果判定这袋血合格，这是不科学的，也是非常危险的，是错误结果报告。在曲线范围内HBsAg含量与OD值呈直线相关［2］，因为复检血辫标本稀释倍数是复检试管标本的3.0倍，复检血辫标本的实际OD值应为0.066×3.0=0.198，正确的判断结果为阳性，此袋血为不合格，应报废。当然也可能存在基质效应影响，但不是影响本ELISA试验最主要因素，不予考虑。以上这个例子是我站检验科工作中的实例之一，提示，千万不要以为只要辫管血既复检血辫标本检测结果是阴性，就片面认为复检呈阳性是交叉污染造成的，而错误的将此袋血判定为合格。由于强阳性的复检试管标本与复检血辫标本其HBsAg浓度为高，OD值已不在线性范围，两种标本的检测结果OD值远远高于Cutoff值，均为阳性，正常情况不会出现结果判断错误。且经统计学检验，两种标本的检测结果OD值无明显差异。其他检测项目如：Anti-HCV,Anti-HIV,Anti-TP弱阳性复检试管标本与复检血辫标本检测结果OD值也同样存在显著差异，不再一一赘述。我国约一亿五千人患有乙肝或携带HBV，也有报道感染率是14.8%，总之我国是肝炎大国，且血液是HBV最有效的传播途径，具有传染性的一滴血千分之一的量就足以使易感人群感染HBV，虽然初复检或复检两次检测已很大程度提高了血液的安全性，但由于受窗口期，检测设备，检测试剂，以及检测人员水平素质等诸多因素影响仍有漏检现象发生。据日本报道ELISA检测HBsAg合格血液再经PCR核酸检测漏检率为千分之一，根据现状不容乐观，作为检验科的工作人员肩负着极为重要的职责，应树立高度的责任心，恪守职业道德，不断加强学习，提高检测技能，在工作中不断积累总结经验，透过现象看本质，具体问题具体分析，防微杜渐，避免将已经检测出阳性或反应性的标本，在复检再检时错判结果，严把质量关，保证输血安全。心腔结构是心血管系统的重要内容之一，通过观察心脏解剖标本，能真实地观察到心腔各结构的局部位置、关系和形态，正确理解心腔的血流方向，在教学、科研及临床应用等方面具有重要的意义。传统标本在显示心腔结构时，多采用心腔开窗法［1］，即在心腔表面，行不同大小的“ㄩ”形或“▽”形切口，形成活瓣，打开活瓣或直接将活瓣切除即可观察心腔内部结构。此法直接简单，但心腔结构暴露不充分，尤其是主动脉口和肺动脉口结构不能充分显示，且标本外形不整齐，常影响心脏整体观察。针对以上不足，作者对心腔解剖标本的制作进行了改进，并指示出心腔内的血流方向，收到了良好的效果。1．选材与取材选用经防腐固定过的成人尸体一具，按常规打开胸腔，分别切断主动脉弓的分支、降主动脉和上、下腔静脉，在靠近肺门处切断左、右肺动脉和肺静脉，取下心脏，去除心包，修剪出入心脏的大血管，使标本外形结构整洁，表面标志清晰，为确定心脏方位和操作作好准备。2．制作方法2.1切开右心房和右心室自上腔静脉根部，沿右心耳周缘向前右后方向作弧形切口，切至下腔静脉根部附近。将右心房切片向后上方翻开，即可观察右心房内部结构。此切法能充分显示腔静脉窦和固有心房的形态特点，清楚地看到梳状肌、上、下腔静脉口、冠状窦口、右房室口、房间隔和卵圆窝。在右心室前壁距前室间沟右侧1㎝处，与前室间沟平行作“丿”形切口，上端切至肺动脉口下方时，用剪刀剪开肺动脉干前壁，暴露肺动脉口，显示肺动脉瓣；下端切至心尖切迹附近时弧形向右适当延伸，以扩大视野。应注意切口不可离前室间沟太近，否则将破坏其深面的隔缘肉柱。沿切口翻开右心室前壁，即能充分显示流入道和流出道的形态特点，清晰辨认三尖瓣复合体、隔缘肉柱、肺动脉口及肺动脉瓣。此切口呈“丿”形，翻开切瓣时心腔暴露完全，不用时，切口紧闭，标本外形饱满。2.2切开左心房和左心室在左心房后壁，左右肺静脉之间先作垂直切口，下端切至冠状窦上方，以不破坏冠状窦为宜；上端切至上肺静脉平面后，以最短距离切至左心耳上缘，继而沿左心耳上缘剪开，以扩大观察视野。沿切口向左翻开即可完全显露左心房腔，可清晰看到左、右肺静脉口和左房室口。在前室间沟左侧1cm处，作一条与前室间沟平行的弧形切口，上端自主动脉根部切开，向下直至心尖左侧，再向左适当作水平延伸。用手沿切线分开左心室前壁，即可充分暴露左心室腔，显示流入道和流出道方向、二尖瓣复合体；在主动脉根部，剪开主动脉壁，显示主动脉瓣和左冠状动脉口。若向上适当延长切口，可进一步显示右冠状动脉口［1］。2.3标示心腔血流方向标本剖切完成后，移除腔内血块，冲洗腔内和表面污垢；修整切缘，保持标本外形真实美观。将蓝色扎丝（塑料袋扎口用材料，宽5mm，厚0.5mm，具有良好的可塑性）剪成2cm长的箭头7个，分别在上、下腔静脉口、冠状窦口、右房室口、右心室流入道、流出道和肺动脉口处，按血流方向用“502”粘合剂固定于心壁，示静脉血在右半心内的流动方向。将红色扎丝剪成2cm长的箭头8个，分别在上、下肺静脉口、左房室口、左心室流入道、流出道和主动脉口处，按血流方向用“502”粘合剂固定于心壁，示动脉血在左半心内的流动方向［23］。3．制作体会取材断离大血管时，应尽可能长的保留血管，尤其是上、下腔静脉和左、右肺静脉对支撑心房、建立心脏表面标志、确立心脏方位，具有重要的作用。剖切时，要设计合理，定位准确，切口平整。避免损伤腔内结构而失去观察意义。观察时可用3根探针分别穿过上下腔静脉口、左右肺上静脉口和左右肺下静脉口，通过腔静脉的探针为垂直位，通过肺静脉的探针为水平位，以此来确定心脏的解剖位置。此标本制作法运用线形切口，破坏性小，外形完整，形态正常，且心腔暴露充分，能全面显示心腔结构及血流方向，便于心脏的整体观察，对解剖学教学、科研和临床应用具有重要意义。【参考文献】1安万新，康炜.输血检验学.大连：辽宁出版社，2002，55.2张克强，杨振华.临床酶学标准化的新途径.中华检验杂志，1999,1：32-33.3蔡雪彦，吕端元，欧伟.示教心脏标本改良剖切法［J］.解剖学杂志，2006，29（2）：262-264.4.张蓓，赵琛，杨成杰，等.心脏血液流通标本的制作方法［J］.解剖学杂志，2002，25（3）：334.5.高叶梅，彭湃，黄大元.心