凝血试剂应用手册(2010-4)

Dade®Behring血栓/止血试剂使用说明1PT凝血酶原时间一、名称：PT凝血酶原时间。二、原理：在受检血浆中加入过量的因子III（人胎盘的浸出液）和Ca2+，使凝血酶原转变为凝血酶，后者使纤维蛋白原转变为纤维蛋白，血浆凝固所需要的时间即为PT。它是外源性凝血系统常用筛选试验之一。三、试剂：ThromborelS试剂，为人胎盘浸出液和Ca2+的混合试剂，试剂说明书中包含本试剂用在不同型号、不同方法学的仪器上的国际敏感度指数（ISI）。试剂溶解时分别按包装用10ML或4.0ML的蒸馏水复溶。四、仪器品牌：日本进口SYSMEX公司的CA550、CA1500、CA7000型全自动血凝仪。五、操作步骤：SYSMEX的CA系列血凝仪采用的是散射光比浊，百分比检测，监测样品凝集开始到凝集完全的散射光强度的变化，50%凝集时所对应的时间即为凝血酶原时间。1、将PT的试剂按照说明溶解好以后，放到确定的位置上。2、将样本离心准备好以后，放到样本架上，样本架放到自动进样器上。3、在屏幕上进入WORKLIST菜单，设好ID号，及要检测的项目，一切准备好便可按START开始。六、参考值：PT9-13秒七、临床意义：PT延长：先天性见于因子II、V、VII、X缺乏和无（或）低纤维蛋白原血症；获得性见于弥散性血管内凝血、原发性纤溶症、维生素K缺乏症、肝脏疾病；血循环中有抗凝物质，如肝素、FDP、以及抗因子II、V、VII、X的抗体存在等情况。PT缩短：见于因子V增多症、口服避孕药、高凝状态和血栓性疾病等。口服抗凝剂的监测：凝血酶原时间是监测口服抗凝剂的常用指标，中国人INR在1.5~2.5用药较为安全和有效。八、标本制备：9份静脉血加一份3.8g/dl(109mmol/L)枸橼酸钠抗凝，立即混匀，3000r/min×15min，血浆可在15-25℃保存4小时，在-20℃至少可以保存24小时。九、注意事项：试剂溶解后，可在15℃放置8小时，2-8℃可保存5天。复溶要充分，溶解后的试剂最好不要在低温冷冻保存。十、编写者：VASTEC公司血栓止血临床应有技术专员陈中超十一、参考文献：[1]SYSMEXCA-1500,SERVICEMANUAL[2]曾照芳，翟笺才，临床检验仪器学，北京：人民卫生出版社，2001[3]姚泰，生理学（第六版），北京：人民卫生出版社，2003[4]赵桂芝，临床检验学，成都：四川科学技术出版社，1997[5]陆永绥，李清华，张伟明，临床检验自动化仪器分析标准操作规程，浙江：浙江大学出版社，2006十二、科室主任：Dade®Behring血栓/止血试剂使用说明2APTT部分凝血活酶时间一、名称：APTT部分凝血活酶时间。二、原理：在37℃下，以鞣花酸为激活剂活化凝血因子XII和XI，以脑磷脂（部分凝血活酶）代替血小板提供凝血的催化表面，在Ca2+的参与下，观察贫血小板血浆凝固所需要的时间。APTT测定是内源性凝血系统较为敏感、简便和常用的筛选试验。三、试剂：Actin试剂（鞣花酸做为激活剂，磷脂为兔脑粉），及CaCl2试剂，试剂为液体不需复溶。2-8℃可保存到效期。四、仪器品牌：日本进口SYSMEX公司的CA550、CA1500、CA7000型全自动血凝仪。五、操作步骤：SYSMEX的CA血凝仪采用的是散射光比浊，百分比检测，监测样品凝集开始到凝集完全的散射光强度的变化，50%凝集时所对应的时间即为凝血酶原时间。a)将APTT的试剂和CaCl2放到确定的位置上。b)将样本离心准备好以后，放到样本架上，样本架放到自动进样器上。c)在屏幕上进入WORKLIST菜单，设好ID号，及要检测的项目，一切准备好便可按START开始。六、参考值：APTT20-40秒七、临床意义：a)APTT延长：1、因子VIII、IX和XI血浆中水平减低，如血友病A、B及凝血因子XI缺乏症；因子VIII减少还见于部分血管性血友病患者；2、严重的凝血酶原、因子V、因子X和纤维蛋白原缺乏，如肝脏疾病、阻塞性黄疸、新生儿出血症、肠道灭菌综合症、吸收不良综合征、口服抗凝剂、应用肝素以及纤维蛋白原缺乏血症等；3、纤溶活性增强，如继发性、原发性纤溶亢进及循环血液中有纤维蛋白（原）降解产物（FDP）;4、血循环中有抗凝物质，如抗因子VIII或IX抗体，狼疮抗凝物质等。b)APTT缩短：1、高凝状态，如弥散性血管内凝血的高凝期、促凝物质进入血流以及凝血因子的活性增高等；2、血栓性疾病，如心肌梗死、不稳定性心绞痛、脑血管病变、糖尿病伴血管病变、肺梗死、深静脉血栓形成、妊娠高血压综合征和肾病综合征以及严重的灼伤等。八、标本制备：9份静脉血加一份3.8g/dl(109mmol/L)枸橼酸钠抗凝，立即混匀，3000r/min×15min，血浆可在15-25℃保存4小时，在-20℃至少可以保存24小时。九、注意事项：APTT试剂为液体试剂无需复溶，需要在2-8℃下保存，切勿冻存。十、编写者：VASTEC公司血栓止血临床应有技术专员陈中超十一、参考文献：[1]SYSMEXCA-1500,SERVICEMANUAL[2]曾照芳，翟笺才，临床检验仪器学，北京：人民卫生出版社，2001[3]姚泰，生理学（第六版），北京：人民卫生出版社，2003[4]陆永绥，李清华，张伟明，临床检验自动化仪器分析标准操作规程，浙江：浙江大学出版社，2006十二、科室主任：Dade®Behring血栓/止血试剂使用说明3FBG纤维蛋白原测定一、名称：FBG纤维蛋白测定。二、原理：采用Clauss凝固法原理，根据纤维蛋白原与凝血酶作用最终形成纤维蛋白的原理。以国际标准品为参比血浆制作标准曲线，用过量的凝血酶来测定血浆凝固时间，所得凝固时间与血浆中纤维蛋白原浓度呈负相关，从而得到纤维蛋白原的含量。三、试剂：Thrombin试剂（凝血酶冻干品），1ml的蒸馏水复溶。Owen’sBuffer缓冲液，注意试剂是否结晶会影响结果。四、仪器品牌：日本进口SYSMEX公司的CA550、CA1500、CA7000型全自动血凝仪。五、操作步骤：SYSMEX的CA系列血凝仪采用的是散色光比浊，百分比检测，监测样品凝集完全的散射光强度的变化，50%凝集时所对应的时间即为凝血酶时间。1.将FBG试剂按照说明溶解好以后，放到确定的位置上。2.将样本离心准备好后，放到样本架上，样本架放到自动进样器上。3.在屏幕上进入WORKLIST菜单，设好ID号，以及要检测的项目，一切准备好后可按START开始。六、参考值：FBG：2-4g/l七、临床意义：FBG含量增高：见于糖尿病及其酸中毒，动脉粥样硬化，急性传染病，急性肾炎尿毒症，骨髓瘤，休克，外科术后及轻，度肝炎等。FBG含量减低：见于DIC，原发性纤溶症，重症肝炎，肝硬化等。八、标本制备：9份静脉血加一份3.8g/dl(109mmol/L)枸橼酸钠抗凝，立即混匀，3000r/min×15min，血浆可在15-25℃保存4小时，在-20℃至少可以保存24小时。九、注意事项：试剂溶解后，可在15℃放置10小时，2-8℃可放7天。复溶要充分，复溶好的试剂可冷冻分装保存十、编写者：VASTEC公司血栓止血临床应有技术专员陈中超十一、参考文献：[1]SYSMEXCA-1500,SERVICEMANUAL[2]曾照芳，翟笺才，临床检验仪器学，北京：人民卫生出版社，2001[3]姚泰，生理学（第六版），北京：人民卫生出版社，2003[4]赵桂芝，临床检验学，成都：四川科学技术出版社，1997[5]陆永绥，李清华，张伟明，临床检验自动化仪器分析标准操作规程，浙江：浙江大学出版社，2006十二、科室主任：Dade®Behring血栓/止血试剂使用说明4TT凝血酶时间一、名称：TT凝血酶时间。二、原理：待测血浆加入标定的凝血酶溶液，纤维蛋白原转变为纤维蛋白，测定凝固所需的时间，即为待测血浆凝血酶时间。三、试剂：TestThrombin试剂（凝血酶冻干品。）。试剂溶解时用TT特有的缓冲液以5ml复溶。四、仪器品牌：日本进口SYSMEX公司的CA550、CA1500、CA7000型全自动血凝仪。五、操作步骤：SYSMEX的CA系列血凝仪采用的是散色光比浊，百分比检测，监测样品凝集完全的散射光强度的变化，30%凝集时所对应的时间即为凝血酶时间。1.将TT试剂按照说明溶解好以后，放到确定的位置上。2.将样本离心准备好后，放到样本架上，样本架放到自动进样器上。3.在屏幕上进入WORKLIST菜单，设好ID号，以及要检测的项目，一切准备好后可按START开始。六、参考值：TT14-21秒七、临床意义：TT延长：见于肝素增多或类肝素物质存在，SLE，肝病，肾病，低（无）纤维蛋白原血症，异常纤维蛋白原血症，FDP增多等疾病。八、标本制备：9份静脉血加一份3.8g/dl(109mmol/L)枸橼酸钠抗凝，立即混匀，3000r/min×15min，血浆可在15-25℃保存4小时，在-20℃至少可以保存24小时。九、注意事项：试剂溶解后，可在15℃放置10小时，2-8℃可放7天。复溶要充分，复溶好的试剂可冷冻分装保存。十、编写者：VASTEC公司血栓止血临床应有技术专员陈中超十一、参考文献：[1]SYSMEXCA-1500,SERVICEMANUAL[2]曾照芳，翟笺才，临床检验仪器学，北京：人民卫生出版社，2001[3]姚泰，生理学（第六版），北京：人民卫生出版社，2003[4]赵桂芝，临床检验学，成都：四川科学技术出版社，1997[5]陆永绥，李清华，张伟明，临床检验自动化仪器分析标准操作规程，浙江：浙江大学出版社，2006十二、科室主任：Dade®Behring血栓/止血试剂使用说明5抗凝血酶III检测（ATIII）一、名称：抗凝血酶III测定。二、原理：ATIII是血液凝固的一种主要抑制剂，其功能分析依赖于血浆中有肝素存在的情况下降低凝血酶活性的能力。样本中的ATIII在肝素的存在下与未激活的凝血酶形成凝血酶抗凝血酶复合物。剩余的凝血酶与试剂中的底物结合，在405nm波长下检测吸光度的变化。以国际标准品为参比血浆作浓度与吸光度的曲线。所测样本的吸光度将会根据曲线得到样本的浓度。三、试剂：ThrombinReagent6X15ml（凝血酶试剂用15ml的缓冲液复溶）SubstrateReagent6X3ml（底物用3ml的去离子水复溶）ufferSolution1X100ml（缓冲液液体用于复溶凝血酶试剂）四、仪器品牌：日本进口SYSMEX公司的CA550、CA1500、CA7000型全自动血凝仪。五、操作步骤：SYSMEX的CA系列血凝仪采用的是发色底物法来检测ATIII。1.将ATIII试剂盒中所有试剂按照说明溶解好以后，放到确定的位置上。4.将样本离心准备好后，放到样本架上，样本架放到自动进样器上。5.在屏幕上进入WORKLIST菜单，设好ID号，以及要检测的项目，一切准备好后可按START开始。六、参考值：ATIII75—125%七、临床意义：定量测定血浆中抗凝血酶Ⅲ（ATIII）的活性，能用于诊断ATIII合成减少或消耗增加性疾病，和监测替代治疗效果。ATIII缺乏主要见于肝脏疾病、弥散性血管内凝血、败血症、肺栓塞、肾病综合症、中风及深静脉血栓等。八、标本制备：9份静脉血加一份3.8g/dl(109mmol/L)枸橼酸钠抗凝，立即混匀，3000r/min×15min，在60分钟以内分离血浆，分离血浆时用塑料吸头、且用塑料试管储存血浆。分析血浆标本在2小时内完成；另外，冰冻保存，融化使用等。九、注意事项：凝血酶试剂溶解后，使用时在15℃--25℃-孵育30分钟。凝血酶试剂复溶后在原始瓶中可冰冻5次，底物可冰冻10次。缓冲液2-8℃可保存6个月。2-8℃凝血酶稳定4周。底物稳定6周。-20℃凝血酶可稳定3个月，底物6个月。十、编写者：VASTEC公司血栓止血临床应有技术专员陈中超十一、参考文献：1.[1]SYSMEXCA-1500,SERVICEMANUAL2.[2]曾照芳，翟笺才，临床检验仪器学，北京：人民卫生