最新《东北农业大学学报》写作模板0617

中文写作模板整篇文档正文5号宋体，一级标题4号宋体，1.5倍行距。XXXXXXX的研究王小虎1，李小三2*，宋玉3（1.东北农业大学农学院，哈尔滨150030；2.东北农业大学大学生命科学学院，哈尔滨150030；3.黑龙江八一大学园艺学院，黑龙江大庆161090）摘要：利用长期施用长残留除草剂咪唑乙烟酸的土壤，采用高压富集的方法，从两种培养液中共分离出3株细菌，根据菌株的形态特性和生理生化特征，对此3个菌株进行了初步鉴定：菌株X为丙酸杆菌属（Propionibacterium）；菌株Y为海球菌属（Marinococcus）；菌株Z为酸单胞杆菌属（Acidomonas）；菌株X、Y和Z的最适生长温度分别是30、30和35℃；菌株X和Z在中性偏酸的培养基中生长较好，菌株Y在偏碱培养基中生长较好；菌株X、Y、Z生长最适合的葡萄糖含量分别为0.5%、1%和0.1%；菌株Y生长最适咪唑乙烟酸的浓度是10mga.i.·L-1，菌株X和Z生长最适咪唑乙烟酸的浓度是20mga.i.·L-1。关键词：咪唑乙烟酸；降解菌；富集分离；鉴定；生长特性中图分类号：S767.5；X172文献标志码：ASeparationidentificationandgrowthcharactersofherbicideimazethapyrdegrading-bacteriaWANGXiaohu1，LIXiaosan2，SONGYu3（1.CollegeofAgriculture,NortheastAgriculturalUniversity,Harbin150010,China;收稿日期：基金项目：作者简介：姓名（出生年-），性别，职称，学历，研究方向为。E-mail:*通讯作者：姓名，职称，博士生导师，研究方向为。E-mail:2.CollegeofLifeSciences,NortheastAgriculturalUniversity,Harbin150030,China;3.CollegeofHorticulture,HeilongjiangBayiAgriculturalUniversity，DaoqinHeilongjiang161090,China)Abstract:Usingthehighpressureenrichmentmethod,threebacteriastrainsintwoculturemediawereseparatedfromsoil,whichcontainedtheherbicideimazethapyrandwerelongpollutedbythepesticide.Bybatchculturewithclomazoneasasolecarbon,strainXwasidentifiedasPropionibacterium,strainYwasidentifiedasMarinococcu,andstrainZwasidentifiedasAcidomonasaccordingtothemorphologicalandphysiologicalchar-acters.TheoptimaltemperatureforgrowthofX,YandZwere30,30,and35℃,respectively.ThegrowthofstrainXandZwasgoodinneutralandweakacidicculturemedia,butstrainYwasappropriatetogrowthunderalkalescence;theoptimalsugarcontentsforgrowthofX,YandZwere0.5%,1%and0.1%,respectively.TheoptimalinitialconcentrationforimazethapyrofYwas10mga.i.·L-1,andthatforXandZwas20mga.i.·L-1.Keywords:imazethapyr;degradingmicroorganisms;enrichmentseparation;identification;growthcharacters除草剂咪唑乙烟酸（Imazethapyr）是由美国氰胺公司（现归并为德国BASF公司）于80年代初开发研制的大豆田选择性苗前、苗后早期除草剂，主要防除稗草、反枝苋等一年生禾本科杂草和阔叶杂草。咪唑乙烟酸具有杀草谱广、选择性强、活性高等优点，它可以被植物的叶片和根系吸收，在木质部与韧皮部内传导，积累于分生组织[1-2]。其作用方式是抑制乙酰乳酸合成酶（AcetolactateSynthase，ALS），破坏蛋白质合成，使植物生长受抑制而死亡。而豆科植物吸收咪唑乙烟酸后，在体内很快被分解，因此是大豆田优良的除草剂[3-4]。其在黑龙江省应用尤其广泛，2005年总用量为3905t，应用面积达到5.25×104万hm2，占大豆田除草剂面积的70％，至今因品种竞争和残留限制问题其用量有所下降，但仍然是大豆田的主导品种[5-6]。残留在土壤中的低量咪唑乙烟酸残易对水稻、马铃薯、甜菜、油菜、番茄、甘蓝等敏感的后茬作物产生药害[7]，严重影响了黑龙江省种植业结构的调整和换茬轮作，已成为亟待解决的农业生产问题。咪唑乙烟酸在土壤中降解主要受微生物影响，目前，有关咪唑乙烟酸方面的降解微生物筛选及生物降解的研究还未见报道。本研究立足大豆田咪唑乙烟酸的使用情况，针对咪唑乙烟酸残留的问题，筛选出能够高效降解咪唑乙烟酸的微生物，对其进行鉴定、驯化和培养，并进一步研究其降解效果以及生物降解菌剂等，旨在解决咪唑乙烟酸的残留药害问题，力争延长这一大豆田优良除草剂品种的使用寿命，同时为该除草剂环境污染的治理开辟一条有效的途径，为农业的可持续发展提供有效的技术保障。1材料与方法1.1菌种1.1.1供试药剂95.7%咪唑乙烟酸原药，哈尔滨利民农化有限公司提供；5%普施特水剂，购自德国巴斯夫公司。1.1.2供试土壤采自东北农业大学香坊农场长期施用过长残效除草剂咪唑乙烟酸的土壤。1.1.3供试培养基牛肉膏蛋白胨琼脂培养基：用于细菌培养，主要成分有牛肉膏3g、蛋白胨5g、琼脂18g、蒸馏水1000mL，pH7.0～7.2；富集培养液：用于微生物筛选，主要成分有牛肉膏3g、蛋白胨5g、NaCl5g、K2HPO45g、蒸馏水1000mL，pH7.0～7.2；平板计数琼脂培养基：用于细菌计数，主要成分为蛋白胨5g、酵母膏2.5g、葡萄糖10g、琼脂13g、蒸馏水1000mL，pH6.9～7.1。1.2方法1.2.1咪唑乙烟酸降解细菌的富集分离在250mL的三角瓶中，加入100mL富集培养基（含咪唑乙烟酸浓度为100mga.i.·L-1），将采集的土样10g接入到培养液中，设置3次重复，置于30℃，转速为150r·min-1的摇床上振荡培养，7d后按10％的接种量取培养液将其移入含咪唑乙烟酸浓度为200mga.i.·L-1新鲜培养基中，继续培养7d；以后每隔1周均从上次的培养液中取出10mL加入到100mL新鲜培养基中，咪唑乙烟酸的浓度每次增加100mga.i.·L-1，直至增加到600mga.i.·L-1，共富集培养6次；然后转入到基础盐培养基中进行筛选，共进行3次，培养基中咪唑乙烟酸的浓度分别为800、1000和1200mga.i.·L-1。然后取样，在牛肉膏蛋白胨培养基上按细菌菌落形态、颜色进行单个菌落分离，挑出单细菌菌株分别进行纯化培养并保存。最后选择在含咪唑乙烟酸的牛肉膏蛋白胨培养基平板中可以大量生长的菌株作为目标菌株进行研究。1.2.2降解细菌的鉴定1.2.2.1形态鉴定将各株细菌进行简单染色、革兰氏染色、荚膜染色、芽孢染色和鞭毛染色，在显微镜下进行镜检，作形态观察和描述。1.2.2.2生理生化鉴定通过接触酶、葡萄糖氧化发酵、甲基红、淀粉水解、硝酸盐还原、乙醇氧化、明胶液化、反硝化、柠檬酸盐等来进行鉴定试验，鉴定至属[8-10]。1.2.3降解细菌生长特性的研究通过在不同异草酮初始浓度、不同温度、不同pH及不同外加碳源量的条件下，对这3种降解菌进行生长量的研究，以确定降解菌的最适生长条件。以波长为650nm处的OD值表示菌体生长量。2结果与分析2.1降解咪唑乙烟酸细菌的富集分离与鉴定2.1.1咪唑乙烟酸降解菌的分离按照上述富集筛选降解菌株方法，经过40d的富集培养液培养，并转入基础盐培养基继续筛选培养20d，取最后筛选培养液，经10倍稀释法，将10-4、10-5、10-6的培养液稀释液分别转至牛肉膏蛋白胨培养基平板上划线培养，待出现单个菌落后，按照菌落的形状、直径、颜色、透明度、边缘、粘度不同，发现有5株不同的细菌菌株生长，挑取菌株，编号记为X、Y、Z、W、M，继续在牛肉膏蛋白胨含药培养基平板上培养上述5株细菌，发现菌株X、Y、Z在含药培养基可以大量生长，因此决定对这3株细菌进行研究。2.1.2降解细菌的形态特征将所筛选到3株细菌接种到培养皿中，置于30℃恒温培养箱中培养24h后，观察细菌形状、大小、运动性和菌落特征，结果如表1所。表1降解细菌的形态特性和菌落特性Table1Formandlawncharactersofdegradingbacteria项目Item菌株StrainsXYZ形状Shape杆状球状杆状长或直径(µm)Diameter3.03803.24083.0021宽(µm)Width1.0943无1.2443运动性Motility运动运动不运动菌落特征Charactersofbacteriacolony表面光滑，边缘光滑，隆起生长，不透明，在培养基上呈红色。表面光滑，边缘有褶皱，隆起生长，不透明，在培养基上呈乳黄色。表面光滑，边缘有褶皱，隆起生长，透明，在培养基上呈白色。2.1.3降解细菌生理生化特征按照试验方法进行部分细菌生理生化试验，包括芽孢染色、革兰氏染色、需氧性测定、最适NaCl浓度试验、接触酶试验、淀粉水解试验、甲基红试验（MR）、乙酰甲基醇试验（VP）、明胶液化试验、柠檬酸盐利用试验、油脂水解试验、葡萄糖分解代谢形式等试验，测定结果见表2。部分细菌生理生化试验照片见图1～4。图２～４略表2降解细菌的部分生理生化特性Table2Physiologicalandbiochemicalcharactersofdegradingbacteria试验Test菌株StrainsXYZ革兰氏染色Gramstain+--芽孢Sporestain(Fig.1)无无无需氧性Charactersofneedingoxygen+++接触酶Contactenzyme+-+淀粉水解Starchhydrolysis(Fig.2)+-+甲基红（MR）Methylred++-乙酰甲基醇（VP）Acetylmethylcarbinol(Fig.3)+--明胶液化Liquefyglutin+-+柠檬酸盐利用Useofcitrate+++葡萄糖分解代谢形式Modalityofdecomposingandmetabolizingofglucose发酵氧化氧化荧光色素Fluorochrome-+-硝酸盐还原Nitratereductase+++反硝化Denitrification(Fig.4)+++乙醇氧化Alcoholoxidation-+-注：“+”表示生化反应（或革兰氏染色）为阳性；“-”表示生化反应（或革兰氏染色）为阴性。Note:“+”meanspositivebiochemicalreaction(orgramstain);“-”meansnegativebiochemicalreaction(orgramstain).XYZ图1菌株X、Y和Z的芽胞染色Fig.1SporestainofX,YandZbacteria图２菌株X、Y和Z的淀粉水解试验根据降解细菌培养特征及生理生化特征的测定结果，对3株降解细菌进行初步鉴定，结果为：X为丙酸杆菌属（Propionibacterium）；Y菌为海球菌属（Marino