仔猪黄痢大肠杆菌的分离鉴定

1仔猪黄痢大肠杆菌的分离鉴定仔猪黄痢病是出生仔猪常发的急性、致死性肠道传染病，多在仔猪出生后几天内发病，发病率高、死亡率高。临床症状主要以腹泻、排黄色稀粪、急性死亡为主要特征，剖检有肠炎和败血症变化，是危害哺乳仔猪的重要传染病之一，严重影响仔猪的生长发育，对养猪业危害极大。2015年3月，北京顺义某猪场突发仔猪腹泻，排黄白色或黄色水样稀便，根据流行病学、临床症状和病理剖检，并结合细菌病原分离、生化鉴定，致病性试验，药敏试验，确诊为仔猪黄痢大肠杆菌病。对分离的菌株进行了药敏试验，筛选出了3种敏感药物，根据诊断及药敏试验结果采取了相应的控制措施，效果显著经治疗，病情得到了有效控制。现报告如下。1发病情况北京顺义某猪场于2015年3月，5日龄仔猪突然发病，仔猪腹泻不止，患猪粪便呈黄白色或黄色水样，仔猪迅速消瘦、全身衰弱，很快死亡。2临诊症状患猪腹泻黄色水样、顺肛门流下。精神沉郁，停止吃乳，脱水，迅速消瘦。3病理变化心包增厚，心包膜外面覆盖纤维素性渗出物，心外膜小点出血。肝表面覆盖一层灰黄色纤维素膜，肝肿大呈土黄色，表面有细小的灰白色坏死点。脾肿大出血。十二指肠出血。4实验室诊断4.1细菌分离培养将采集的2份肝脏组织分别接种马丁琼脂培养基和麦康凯琼脂培养基，37℃培养18～24h，观察菌落形态。挑取可疑菌落涂片、革兰氏染色、镜检、纯培养。4.2生化试验参照BioMerieuxVITEK32全自动细菌鉴定及药敏仪鉴定操作说明进行。取纯化的单菌落接于0.45%NaCL基物安培管，用比浊仪制备混浊度相当于1个麦氏单位的菌悬液，接种于VITEK革兰氏阴性菌鉴定卡（GNI+），放入读数器中鉴定读取结果。4.3致病性试验将上述生化试验鉴定为大肠杆菌阳性的菌株，分别取纯化的单菌落接种普通营养肉汤，37℃培养24h，将每个菌株的营养肉汤培养物分别经腹腔接种小白鼠2各2只，每只注射0.2mL，同时用无菌肉汤以同样途径接种2只小白鼠作为对照，观察、记录试验结果。对死亡小白鼠剖检，并从肝、脾取样接种于麦康凯琼脂培养基，37℃培养18～24h，观察结果。挑取单个菌落用革兰氏染色法染色、镜检。4.4药敏试验采用纸片法进行。15种抗菌药物纸片:氟苯尼考、庆大霉素、氟哌酸、氧氟沙星、恩诺沙星、强力霉素、卡那霉素、阿莫西林、四环素、链霉素、环丙沙星、林可霉素、新霉素、金霉素、红霉素。5结果5.1细菌分离培养2份样品经培养后生长良好，马丁琼脂培养基上可见灰白色、圆形、光滑、湿润的菌落，在麦康凯琼脂培养基上形成红色、圆形隆起、光滑湿润、边缘整齐的小菌落，革兰氏染色为阴性小杆菌。符合大肠杆菌的培养及形态特征。5.2生化试验将从病料中分离纯化的菌落经BioMerieuxVITEK32全自动细菌鉴定仪鉴定得到极好鉴定结果，36株菌株均能发酵葡萄糖、麦芽糖、阿拉伯糖、乳糖、木糖、鼠李糖、甘露醇、山梨醇，产酸产气；不发酵棉子糖、肌醇、侧金盏花醇；多数不能发酵蔗糖，少数发酵产酸；鸟氨酸脱羧酶、氧化酶均为阴性；甲基红试验阳性，V.P.试验阴性。符合大肠杆菌的生化特性。5.3致病性试验将生化试验鉴定为大肠杆菌阳性的2株菌株的营养肉汤培养物分别经腹腔接种小白鼠各2只，24h内全部发病死亡，对照组均健活。对死亡小白鼠剖检，并从肝、脾取样接种于麦康凯琼脂培养基，37℃培养18～24h，结果在麦康凯琼脂培养基上形成红色、圆形隆起、光滑湿润、边缘整齐的小菌落。挑取单个菌落用革兰氏染色法染色、镜检，可见革兰氏阴性小杆菌。结果表明，分离纯化的2株大肠杆菌均为致病性大肠杆菌。5.4药敏试验经鉴定，15种抗生素中氟苯尼考和新霉素高度敏感，庆大霉素中度敏感，其余12种均耐药。6小结与讨论6.1根据菌株形态染色镜检观察、培养特性、生化特性等结果，可以确定所分离的菌株为大肠杆菌。6.2从药敏试验结果来看，从此猪群分离的大肠杆菌的耐药性很强，15种抗生3素中只有2种高度敏感，这可能与临床中不合理使用抗生素有关。此猪场采用氟苯尼考、新霉素高敏药物治疗，同时采用合理的相应综合防治措施，效果显著，病情得到了有效控制。6.3目前，猪大肠杆菌病仍然是我国规模化猪场的重要多发病，随着集约化养猪业的发展，由致病性大肠杆菌引起的仔猪腹泻是目前最严重的仔猪传染病之一，也是引起仔猪死亡的重要原因，其造成的经济损失日益严重。近年来，在我国，由致病性大肠杆菌引起的仔猪黄白痢有明显上升趋势，终年发生，仔猪死亡率增高，成活率降低，断奶窝重降低，如果仔猪黄白痢与其他猪病混合感染，其死亡率更高。发病猪场经过敏感药物治疗后，虽然能够一定程度上降低仔猪的死亡率，但耐过猪大多生长发育迟缓、饲料报酬率降低。因此，采取有效的措施预防和控制仔猪腹泻，提高仔猪成活率己成为目前养猪业生产的一项重要任务。6.4仔猪大肠杆菌病的发生受多种因素的影响，大肠杆菌的病原学特性、饲养管理、营养状况及环境因素对本病的发生都有着重要影响。因此，防治本病除了有针对性地免疫接种、使用敏感药物外，还应该搞好饲养管理及环境卫生，保证优质饲料和全价营养，使仔猪有充足的营养，舒适的生活环境，尽可能减少应激，提高仔猪的抵抗力。同时，注意制定科学合理的针对整个养殖场的消毒程序,坚持执行行之有效的疫病综合防治技术措施。