免疫测定室内质控血清的应用

免疫测定室内质控血清的应用张瑞卫生部临床检验中心免疫测定用室内质控血清的调整随着临床实验室检验水平的不断提高和检测试剂质量的不断改进，原有的室内质控物已经不能满足室内质控工作的需要，因此部中心对免疫测定用室内质控血清的含量进行了调整，同时改进了包装。针对的检测项目•HBsAg•抗HCV•抗HIV•梅毒螺旋体抗体提供不同含量的质控物是为了实验室根据不同试剂的检测值选择合适的质控物，使质控物的检测值（S/CO值）在1.5～4之间。HBsAg质控血清定值的调整HBsAg定值单位改变：2004年，WHO研制了第二代HBsAg标准物质，并将定值单位从ng/ml改为IU/ml。现1IU/ml≈0.5ng/ml定值（调整前）定值（调整后）调整原因0.2IU/ml用于一些灵敏度较高的试剂0.5IU/ml0.5ng/ml1IU/ml1ng/ml2IU/ml2ng/ml4IU/ml5ng/ml浓度较高≥1万ng/ml“钩状效应”HBsAg室内质控品的选用定值适用试剂0.2IU/mlMurex，生物梅里埃试剂0.5IU/mlOrtho，Bio-Rad试剂，雅培i2000和Axsym检测系统和配套试剂1IU/ml国产试剂盒（万泰、新创、科华……），血站和医院用2IU/ml国产试剂盒（万泰、新创、科华……），医院用4IU/ml国产试剂盒（万泰、新创、科华……），医院用抗HCV质控血清定值的调整及选用定值（调整前）定值（调整后）适用试剂1NCU/ml国产试剂盒（万泰、新创、科华、丽珠……）和DiaSorin的试剂1NCU/ml2NCU/mlMurex、Ortho等试剂2NCU/ml4NCU/ml雅培i2000和Axsym检测系统和配套试剂现1NCU/ml≈0.5NCU/ml抗HIV质控血清定值的调整及选用定值（调整前）定值（调整后）适用试剂1NCU/ml国产试剂盒（万泰、新创、科华、丽珠……）1NCU/ml2NCU/mlBio-Rad等试剂2NCU/ml4NCU/ml进口试剂及配套仪器4NCU/ml8NCU/ml进口试剂及配套仪器现1NCU/ml≈0.5NCU/ml1NCU/ml的确定：参考国际单位定值方法，采用5种或以上试剂盒，结果63％的试剂盒（按泊松分布计算）检测结果为阳性的值为1NCU/ml。梅毒螺旋体抗体定值的调整及选用定值（调整前）定值（调整后）适用试剂1NCU/ml（特异）国产试剂盒2NCU/ml（特异）国产试剂盒2NCU/ml（特异）4NCU/ml（特异）进口试剂及/或配套仪器2NCU/ml（非特异）2NCU/ml（非特异）RPR、TRUST现1NCU/ml≈0.25NCU/ml注意事项•室内质控物仅用于相应项目的室内质量控制，不能用于阴阳性结果的判断。•定值质控物不适合评价试剂盒整体性能是否合格,但可用于试剂的批内、批间变异和测定下限的评价质检。如果需要对试剂进行比较评价和全面质检请选用相应项目的临床考核血清盘。临床考核血清盘项目规格支数/套HBsAg0.5ml/支40抗HCV0.25ml/支40梅毒螺旋体抗体0.5ml/支40HBsAg血清盘灵敏度特异性HBsAg变异的检测能力：如G145R等Hook效应导致的假阴性样本编号含量(IU/ml)A（S/CO)B（S/CO)C（S/CO)D（S/CO)E（S/CO)16~80.20.40.49.57.328~101.00.70.49.814.910﹥200000040.837.636.227.124.116约160000040.043.941.047.135.08阴性20.91.50.40.70.719阴性9.47.719.20.40.427阴性16.60.30.80.50.6360.5-1.01.61.62.97.38.5370.5-1.01.11.33.03.86.838约0.20.60.81.82.43.9390.2-0.50.20.60.91.13.0HBsAg血清盘抗HCV血清盘不同试剂厂家的ELISA试剂盒所用包被抗原的差异：目前抗HCV检测ELISA试剂盒均采用HCV的基因工程或合成多肽抗原（核心区、NS3、NS4和NS5等）包被固相，以间接法进行测定，上述HCV抗原的组合、来源及用量等方面的差异而造成检测结果不一致。抗HCVELISA出现假阳性的主要原因有：1.类风湿因子（RF）的干扰2.高免疫球蛋白血症3.标本中超氧化物歧化酶（SOD）的干扰4.用于固相包被的HCV基因工程抗原不纯抗HCV血清盘样本编号ABCDEFGRIBANS4NS3CNS5281.221.870.650.780.770.670.3–+±+337.8311.96.324.286.24.760.62±++––340.920.680.610.841.140.650.3++–±356.414.111.862.992.812.040.34–++–381.62.061.860.681.682.051.38±+±±152.420.820.550.650.50.50.5––––检测方法1.检测非特异性抗体----使用类脂质抗原的血清学试验：RPR、TRUST2.检测特异性抗体----使用密螺旋体抗原的血清学试验：FTA-ABS、TPHA、TPPA、ELISA、WB梅毒螺旋体抗体血清盘梅毒螺旋体抗体血清盘TP14TP17TP45TP47EUIgMEUIgGA(OD值)BC(OD值)D(OD值)RPR胶体金1++++++0.090.7363.19927.353.7763.604+++++4+++++++++++++++++++0.3350.964.04127.612.1692.006+++++7+++++++++++++++++++0.2561.120.65431.241.2150.978+++++23+++++/-+++++++++/-+++++0.2251.133.94830.241.8971.367++++33+++++0.1600.0821.3290.900.0270.662+–Hook效应原倍1：101：201：401：801：16013.3572.9462.0991.4280.9360.49042.2772.2561.9701.6151.0600.60371.7033.0662.9383.0233.1252.289232.3603.0892.8842.9752.2581.481梅毒螺旋体抗体血清盘1、4、7、23号血清稀释结果显示存在hook效应。IgM抗体漏检梅毒螺旋体抗体血清盘TP14TP17TP45TP47EUIgMEUIgGA(OD值)BC(OD值)D(OD值)RPR胶体金1++++++0.090.7363.19927.353.7763.604+++++4+++++++++++++++++++0.3350.964.04127.612.1692.006+++++7+++++++++++++++++++0.2561.120.65431.241.2150.978+++++23+++++/-+++++++++/-+++++0.2251.133.94830.241.8971.367++++33+++++0.1600.0821.3290.900.0270.662+–使用方法质控血清都经过灭活处理，但仍应按照有潜在生物传染性样本对待。HBsAg，抗HCV，抗HIV，梅毒螺旋体抗体的质控血清加样时按待测病人原始样本对待，依照试剂盒说明书进行操作。实验室收到血清后应将血清保存在–18℃以下，保质期为1年。使用时将血清在室温复融，应注意待血清完全融化后平衡至室温并充分混匀。复融后的血清如果当日未使用完且无污染，可保存在2–8℃，限1周内用完，避免反复冻融和重新分装质控血清样本。谢谢！