二至丸处方提取物化学成分的研究

二至丸处方提取物化学成分的研究演讲：雷香制作：赵康、黄得栋资料：丁龙、陈美君二至丸（ErzhiPills）出自明·王三才的《医便》，由女贞子、墨旱莲两味药等量组成，是平补肝肾之阴的代表方剂，临床用于治疗肝肾阴虚所致的口苦咽干、头目眩晕、失眠多梦、腰膝酸软、下肢萎软等症状[1]目的：用化学方法鉴别二至丸中的有效成分（齐墩果酸（1）、熊果酸（2）、木犀草素（3）、芹菜素（4）、槲皮素（5）、特女贞苷（6）、蟛蜞菊内酯（7）、去甲蟛蜞菊内酯（8）、甘露醇（9）、女贞苷G13（10）和木犀榄苷二甲酯（oleosidedimethylester，11））化学式：熊果酸齐墩果酸木犀草素槲皮素芹菜素提取与分离：干燥的女贞子粗粉与墨旱莲小段各10kg95%乙醇加热回流提取2次，每次1.5h过滤药渣滤液减压回收醇提流浸膏7.0kg加热回流提取2次，每次1.5hh减压回收溶剂水提流浸膏17.7kg合并总液总液加水混悬均匀后，依次用石油醚、乙酸乙酯、水饱和正丁醇进行萃取总液乙酸乙酯硅胶柱色谱分离氯仿-甲醇（98︰2）梯度洗脱流份a经硅胶柱色谱反复洗脱齐墩果酸（1）熊果酸（2）蟛蜞菊内酯（7）流份a硅胶柱和SaphadexLH-20凝胶柱反复洗脱木犀草素（3）芹菜素（4）槲皮素（5）特女贞苷（6）总液水饱和正丁醇萃取硅胶柱色谱分离以氯仿-甲醇（70︰30）梯度洗脱流份b硅胶柱色谱反复洗脱，蟛蜞菊内酯（7）去甲蟛蜞菊内酯（8）甘露醇（9）合并流份a和流份b回收洗脱剂后，用D101大孔吸附树脂柱进行分离，依次用水和30%、60%、95%乙醇进行洗脱，分别收集洗脱液，其中60%乙醇洗脱液回收乙醇后，再反复经过硅胶柱色谱和ODS-A（甲醇-水）分离，得到女贞苷G13（10）和木犀榄苷二甲酯（oleosidedimethylester，11））化合物1：白色粉末，Liebermann-Burchard反应呈阳性，最后呈蓝色；TLC的Rf值、显色行为及HPLC的保留时间均与齐墩果酸对照品一致，且混合熔点不下降，故鉴定化合物1为齐墩果酸。化合物2：白色粉末，mp285～287℃，Liebermann-Burchard反应呈阳性，最后呈蓝色；TLC的Rf值、显色行为及HPLC的保留时间均与熊果酸对照品一致，且混合熔点不下降，故鉴定化合物2为熊果酸。化合物3：黄色粉末，盐酸-镁粉反应阳性，Molish反应呈阴性，说明化合物3为黄酮类化合物，TLC的Rf值、显色行为及HPLC的保留时间均与木犀草素对照品一致，混合熔点不下降，1H-NMR和13C-NMR数据与文献报道一致[2]，故鉴定化合物3为木犀草素。化学鉴定：化合物4：黄色粉末，盐酸-镁粉反应阳性，Molish反应呈阴性，说明化合物4为黄酮类化合物，TLC的Rf值、显色行为及HPLC的保留时间均与槲皮素对照品一致，混合熔点不下降，1H-NMR和13C-NMR数据与文献报道一致[3]，故鉴定化合物4为芹菜素。化合物5：黄色粉末，盐酸-镁粉反应阳性，Molish反应呈阴性，说明化合物5为黄酮类化合物，TLC的Rf值、显色行为及HPLC的保留时间均与槲皮素对照品一致，混合熔点不下降，1H-NMR和13C-NMR数据与文献报道一致[4]，故鉴定化合物5为槲皮素。参考文献[1]中国药典[S].一部.2010.[2]刘伟,白素平,梁会娟,等.小叶忍冬藤的化学成分研究[J].中草药,2010,41(7):1065-1068.[3]李教社,赵玉英,王邠,等.密蒙花黄酮类化合物的分离和结构鉴定[J].药学学报,1996,31(11):849-854.[4]金哲雄,曲中原.山茶叶化学成分研究(I)[J].中草药,2010,41(7):1068-1072.[5]石力夫,曹颖瑛,陈海生,等.中药女贞子中水溶性成分二种新裂环环烯醚萜甙的分离和鉴定[J].药学学报,1997,32(6):442-446.