产前地塞米松对孕鼠和早产胎鼠IGF-I的影响

作者简介：陈贵岭（1970-），女，山西医科大学第二医院副主任医师。主要研究方向：围生医学1产前地塞米松对孕鼠和早产胎鼠IGF-Ⅰ的影响陈贵岭1成要平2*(1山西医科大学第二医院医院妇产科030001；2*山西医科大学第一临床医学院妇产科030009，通讯作者)【摘要】目的：地塞米松在促进早产胎鼠肺脏成熟的同时对孕鼠和早产胎鼠IGF-I的影响。方法：18只孕鼠随机分为对照组（CT组），地塞米松单剂量组（SD-DEX），地塞米松多剂量（MD-DEX），在孕鼠怀孕14、15天给予不同剂量的地塞米松,在孕鼠怀孕16.5天行剖宫产终止妊娠，电镜下观察胎鼠肺脏成熟度，放射免疫法测定孕鼠血清、胎鼠羊水中IGF-I的含量，进行同组间的相关性分析；免疫组化法进行胎鼠肝脏和胎盘中IGF-I的表达，进行同组间胎鼠肝脏与胎盘中IGF-Ⅰ的相关性分析。结果：产前地塞米松应用在促进早产胎鼠肺脏成熟的同时可以导致孕鼠血清中IGF-Ⅰ含量明显下降，这与用药后孕鼠体重下降有相关性。孕鼠血清中IGF-I和胎鼠羊水中IGF-I没有相关性。结论：地塞米松在促进早产胎鼠肺成熟的同时影响了孕鼠血清和胎鼠羊水中IGF-Ⅰ含量，影响孕鼠体重变化和胎鼠的生长发育。关键词：地塞米松，生长和胚胎发育，胰岛素样生长因子－I，大鼠，早产EffectofdexamethasoneonpregnantandpretermbirthoffetalratwithIGF-ICHENGuiling1CHENGYaoPing2(1SecondClinicalMedicalcollege,ShanxiMedicalUniversity030001；2FristClinicalMedicalCollege,ShanxiMedicalUniversity,030009；*CorresPondingauthor,Tel:[phone]E-mail:[e-mail])[Abstract]ObjectiveToexploretheofdoseofdexamethasoneadministeredantenatallyonlungmorphogenesisofratembroyandcorrelationwithinsulin-likegrowthfactor-I(IGF-I)ofpregnantratandfetalamniotic.MethodsEighteenpregnantratswererandomlyassignedtothreegroupwith6ineach,control,singledosedetamethasone(SD-DEM),multilatedosedexamethasone(MD-DEM).Itinjecteddexamethasoneofdifferentdoseonthe14th,15th.Allfetusesweredeliveredbycesareandeliveryonthe16.5th.Thelungmatureandgrowthoffetalmicewerecomparedatmorphometric.TheIGF-Iofserumpregnantratandfetalamnioticweremeasuredbyradioimmunoassayandanalysisedthecorrelationbetweenthesamegroup.TheIGF-Ioffetalratliverandplacentalweremeasuredbyimmunohistochemistryandanalysisedthecorrelationbetweenthesamegroup.ResultsItisleadedtolowerofserumpregnantwithIGF-Ithatinjecteddexamethasonebeforecesarean,therewascorrelationbetweenweightofpregnantratandIGF-Iofserumpregnant.therewasnocorrelationbetweenIGF-IofserumpregnantandtheamnioticfluidIGF-Ioffetalrat.ConclusionsAntenataltreatmentwithdexamethasonemayimprovelunggrowthandinfluenceIGF-Iinserumofpregnantratsandamnioticfluidoffetalrat.ThegrowthoffetalratandweightofpregnantcouldbeinfluencedthroughaffectingIGF-I.KeywordsDexamethasone;Growthandembryonicdevelopment;Insulin-likegrowthfactor-I,Rats,Pretermbirth早产是导致围生期新生儿死亡的主要原因[1]。危及早产儿生命的急性病当属新生儿呼吸窘迫综合症（RDS）。1969年，Liggins发现产前皮质类固醇（ACT）有促胎羊肺成熟的作用[2]。30余年来，ACT在大量的动物实验及临床研究中应用，并证实ACT的最佳作用时间作者简介：陈贵岭（1970-），女，山西医科大学第二医院副主任医师。主要研究方向：围生医学2是分娩前7天至分娩前24小时[3]。对于用药后7天仍未分娩且有持续早产先兆的孕妇重复应用对母儿的潜在影响已引起广泛的重视，重复应用后对仔代肺脏成熟有益。重复用药后对胰岛素样生长因子-I（IGF-I）的影响目前未见报道。IGF-Ⅰ属胰岛素样生长因子系统家族中的一员，是一类能够刺激糖原、脂质、蛋白质合成及碳水化合物代谢，抑制脂肪降解，促进细胞增殖和分化的单肽。人类孕中期胎儿组织如肾脏、肺、肠、肝脏、肾上腺皮质、骨骼、心脏、平滑肌、造血组织和皮肤中均可检测出IGF-Ⅰ。本实验建立孕鼠早产模型，比较不同剂量的地塞米松在促进早产胎鼠肺脏成熟的同时对孕鼠血清和胎鼠羊水中IGF-I含量的影响。1、材料与方法1、1材料、主要实验仪器、试剂药物地塞米松磷酸钠注射液，免疫组织化学试剂IGF-Ⅰ（美国NeoMarkers公司生产），IGF-Ⅰ放免分析药盒（比利时Biocode-Hycel公司生产），SP超敏试剂盒，DAB显色试剂盒，Jem-100CX透射电镜，BI2000医学图像分析系统，FMJ-182型放免r计数器等。1、2早产孕鼠模型建立、用药与分组无交配史的成年Wister雌性大鼠18只，健康雄性大鼠3只，采用Stewart[4]动物模型。每日记录孕鼠体重，在雌鼠孕13天时，将其随机分为3组：对照组（CT组），地塞米松单剂量组（SD-DEX）,地塞米松多剂量组（MD-DEX组），每组孕鼠6只。CT组于孕鼠怀孕14天早9点给予生理盐水0.25ml颈部皮下注射，共一次；SD-DEX组于孕鼠怀孕第14天早9点颈部皮下肌注地塞米松0.1mg（0.25ml），共一次；MD-DEX组于孕鼠怀孕14天和15天早、晚9点颈部皮下肌注地塞米松0.1mg（0.25ml），共4次。在孕鼠怀孕16.5天行剖宫产术。1、3取材剖宫产从胎鼠羊膜腔抽取羊水1ml，放入-20。C冰箱保存。取出胎鼠，断脐清理呼吸道，评价胎鼠肺成熟程度。胎鼠肺脏成熟采用两种技术评价：一是呼吸效果的特征，二是根据肺脏组织结构的发育。记录胎鼠数，出生体重（BW）、胎盘重量（PW）。孕鼠自心腔取血5ml，离心后留取血清1ml，放入-20。C冰箱保存。胎鼠胎肺、胎肝、胎盘制成石蜡标本，每组随机选取一只胎鼠肺脏留取制成电镜标本。胎鼠肺脏进行HE染色，观察胎鼠肺脏发育情况。1、4胎鼠羊水和孕鼠血清中IGF-Ⅰ含量的测定采用包被试管放射免疫法。试剂盒组成包括：抗IGF-Ⅰ单抗包被管（100管），IGF-Ⅰ系列标准（6瓶冻干品），质控血清（2瓶冻干品）125Ⅰ-IGF-Ⅰ单抗，浓洗涤液（液体），样品稀释液。操作严格按照实际和说明进行。1、5免疫组化染色胎鼠肺脏、肝脏和胎盘中IGF-Ⅰ的表达采用免疫组织化学的方法。染色判断标准：作者简介：陈贵岭（1970-），女，山西医科大学第二医院副主任医师。主要研究方向：围生医学3在无非特异性染色的情况下，IGF-Ⅰ以细胞核核膜和细胞浆出现棕黄色颗粒视为阳性细胞。每张经IGF-Ⅰ免疫组化的标本，在OlympusCX31型倒置光学显微镜下随机选取3个图像框，以每张切片染色的背景作对照，采用MIAS-2000图像分析仪计算及自动测量阳性细胞核核膜和细胞浆的平均光密度值。取3个图像框的平均值代表该标本的染色强度，根据染色强度间接判定胎盘、胎肝中IGF-Ⅰ的表达水平。4、统计学处理采用SPSS11.5软件进行统计分析。正态分布计量资料采用均数±标准差（X±S）表示，多组计量资料经对数转换、方差齐性检验后，进行单因素方差分析并采用LSD法进行两两比较；方差不齐的数据进行非参数检验和两两比较。以P＜0.05为有统计学意义。2、实验结果2、1物理学统计结果应用地塞米松后对胎鼠的肺脏成熟均有促进作用。HE病理切片下可见肺泡扩张完全，支气管发育良好。电镜下观察用药组肺泡腔完全扩张，细胞器发育良好，线粒体、高尔基体清晰可见，肺泡Ⅱ型细胞发育良好，可见正在释放表面活性物质的板层小体。见照片1-6照片1、CT组胎鼠肺脏HE染色(*40)照片2、SD-DEX组胎鼠肺脏HE染色（*40）照片3、MD-DEX组胎鼠肺脏HE染色（*40）照片4：CT组胎鼠肺脏超微结构，照片5：SD-DEX组胎鼠肺脏超微结构，照片6：MD-DEX组胎鼠肺脏超微结构未扩张的肺泡腔，发育不良的板层Ⅱ型细胞内的板层小体和髓样物（*10000）发育良好的板层小体，Ⅱ型细胞表面小体（*8000）绒毛（*10000）2、2放射免疫法测孕鼠血清、胎鼠羊水中IGF-Ⅰ含量孕鼠血清IGF-Ⅰ含量在三个实验组中进行方差分析，F值0.642，P0.05,提示各组数据间无统计学意义。与CT组比较，SD-DEX组，MD-DEX组孕鼠血清中IGF-Ⅰ含量明显低于CT组，差异有统计学意义，P均0.01。胎鼠羊水中IGF-Ⅰ含量在三个实验组中进行方差分析，F值5.145，P＜0.05，提示各组数据间有统计学意义。与CT组比较，MD-DEX组胎鼠羊水中IGF-Ⅰ含量与CT组无统计学意义，P0.05。SD-DEX组胎鼠羊水中IGF-Ⅰ含量明显低于CT组，差异有统计学意义，P0.01。孕鼠血清中IGF-Ⅰ的含量明显高于胎鼠羊水中IGF-Ⅰ的含量，进行不同剂量糖皮质激素组间孕鼠血清与胎鼠羊水IGF-Ⅰ两均数作者简介：陈贵岭（1970-），女，山西医科大学第二医院副主任医师。主要研究方向：围生医学4的比较，两组数据间有统计学意义，P均﹤0.05，分别进行孕鼠血清中IGF-Ⅰ含量与胎鼠羊水中IGF-Ⅰ含量的相关性分析，CT组（r=0.365，p=0.476）,SD-DEX组(r=0.624,p=0.186)，MD-DEX组(r=0.463,P=0.355),P均0.05。孕鼠血清中IGF-Ⅰ含量（81.7927±39.6814）ng/mL远高于胎鼠羊水中IGF-Ⅰ含量（10.3759±3.7049）ng/mL，两者之间没有相关性。见表1。表1三组孕鼠血清和胎鼠羊水中IGF-Ⅰ含量的比较（X±S，ng/mL）组别例数孕鼠血清胎鼠羊水血清与羊水IGF-Ⅰ含量的t检验t值P值CT690.0533±22.904411.6400±3.8559-8.2690.000SD-DEX696.0783±30.2260＊12.1933±4.1334-6.7350.001MD-DEX673.5600±48.7158＊＊6.5250±1.4885＊＊-5.6760.002注：与CT组比较，＊＊P＜0.01，＊P＜0.05。2、3免疫组织化学法测胎鼠肝脏、胎盘中IGF-Ⅰ表达IGF-Ⅰ免疫组化法染色阳性