丹参川芎嗪注射液对妊娠期高血压大鼠模型的疗效及胎盘细胞CyclinB1和p21蛋白的影响

丹参川芎嗪注射液对妊娠期高血压模型大鼠的疗效及胎盘细胞CyclinB1和p21蛋白的影响摘要：目的探讨丹参川芎嗪注射液对妊娠期高血压大鼠模型的效果以及对胎盘细胞中CyclinB1、p21蛋白表达量的影响。方法将孕鼠随机分为4组即：正常妊娠大鼠作空白对照、妊娠高血压大鼠作阴性对照、硫酸镁治疗组妊娠高血压大鼠作阳性对照、丹参川芎嗪注射液组为实验组，每组16只。妊娠14天时，尾静脉注射亚硝基左旋精氛酸甲酯建立妊娠期高血压模型。妊娠第14天开始给药，空白对照组及阴性对照组均给予与药物同剂量的生理盐水；阳性对照组及实验组给予硫酸镁及丹参川芎嗪注射液治疗，3天为一个给药疗程。通过大鼠套尾法测量血压，尾静脉取血法测定24h尿蛋白，并观察各组妊娠大鼠所新生鼠的身长、体重、死胎率、后肢畸形率和胎盘重量，并通过免疫蛋白印迹法测定各组大鼠胎盘细胞中CyclinB1、p21蛋白表达量。结果建立模型之后，孕鼠尿蛋白以及血压增加，新生鼠的身长、体重和胎盘重量均显著降低，死胎率以及畸形率显著增高；给药治疗后，阳性对照组以及实验组四组孕鼠胎盘组织细胞cyclinB1以及p21浓度，与空白对照组相比较，其他三组患者cyclinB1蛋白浓度均减小（P0.05），p21浓度显著增高（P0.05），阳性对照组与实验组相比较，差异无统计学意义（P0.05）。尿蛋白以及血压减低，新生鼠的身长、体重和胎盘重量均显著升高，差异具有统计学差异（P0.05），阳性对照组与实验组相比较死胎率以及畸形率具有统计学差异（P0.05）。结论川芎嗪注射液能够显著降低妊娠高血压孕鼠的死胎率以及畸形率，并且新生鼠状况也有所好转，并且能够激活cyclinB1以及下调p21浓度，这可能是川芎嗪注射液治疗效果的原因之一。关键词：丹参川芎嗪注射液；妊娠期高血压；CyclinB1蛋白；p21蛋白[中图分类号]TQ460.7�[文献标识码]AEffectofLigustrazineInjectiononHypertensioninPregnancySalviaandtheEfficacyofPlacentalCellsCyclinB1andp21ProteininRatModelsAbstract:ObjectiveToinvestigatetheeffectsofSalviaInjectionontheeffectofTMPratmodelofhypertensioninpregnancyandplacentalcellsCyclinB1,p21proteinexpression.MethodsFourgroupsofratsduringpregnancymodelmethodtoestablishthat:normalpregnantratsascontrol,pregnancy-inducedhypertensioninratsasanegativecontrol,pregnancy-inducedhypertensioninratstreatedmagnesiumsulfateasapositivecontrol,salvialigustrazineinjectionexperimentalgroupsn=12.Blankcontrolgroupandnegativecontrolgroupsweregiventhesamedoseofthedrugsaline;positivecontrolgroupandtheexperimentalgroupweregivenmagnesiumsulfateandsalvialigustrazineinjectiontherapy,threedaysadosingregimen.Setsbymeasuringbloodpressureinratstail,determination24hurineproteintailveinbloodlaw,andobservetheheightofpregnantratsineachgroupofnewbornrats,weight,stillbirthrate,limbdeformityrateandplacentalweight,andbyWesternblottingDeterminationofplacentalcellsinratsCyclinB1,p21proteinexpression.ResultsAfterthefruitmodeling,pregnantratsproteinuriaandincreasedbloodpressure,Neonatalheight,weightandplacentalweightweresignificantlyreduced,thestillbirthrateandmalformationratewassignificantlyhigher;Afterdrugtreatment,thepositivecontrolgroupandtheexperimentalgroup,fourgroupsofpregnantratsplacentacyclinB1tissuecellsandp21concentrationscomparedwiththecontrolgroup,theotherthreegroupsofpatientscyclinB1proteinconcentrationsweredecreased(P0.05),p21wassignificantlyincreased(P0.05),positivecontrolgroupandtheexperimentalgroupcomparedtothedifferencenostatisticallysignificant(P0.05).Reduceproteinuriaandbloodpressure,heightofnewbornrats,weightandplacentalweightweresignificantlyincreased,withstatisticallysignificantdifferences(P0.05),positivecontrolgroupandtheexperimentalgroupcomparedtotherateofstillbirthsanddeformitieswithsignificantdifference(P0.05).ConclusionTMPinjectioncansignificantlyreducepregnancy-inducedhypertensioninpregnantratsanddeformityratestillbirthrateandneonatalratssituationalsoimproved,andtheabilitytoactivatep21cyclinB1andlowerconcentrations,whichmaybeoneofthetherapeuticeffectofTMPinjectionreasons.[Keywords]SalviaTMPinjection;gestationalhypertension;CyclinB1protein;p21protein;treatment妊娠期高血压疾病是临床上极为常见的妊娠期疾病，包括：妊娠期高血压、原发高血压并妊娠、继发高血压合并妊娠、先兆子痫等[1]。该疾病常常合并产科出血、感染、抽搐，是目前造成孕产妇死亡的主要原因之一。临床研究表明，妊娠期高血压疾病的发生发展与胎盘组织细胞凋亡及凋亡调控蛋白表达失衡有一定的相关性，临床治疗该疾病目前以硫酸镁为主[2]。但是，硫酸镁治疗该疾病面临着毒性大的危险。因而，需要寻找代替硫酸镁的新型治疗妊娠期高血压疾病药物成为研究热点[3]。丹参川芎嗪注射液具有解痉、降压作用，对心肌梗塞、高血压等疾病效果良好[4]。本研究以妊娠期高血压大鼠为疾病模型，用丹参川芎嗪注射液治疗获得良好的效果，结果报道如下。1材料与方法1.1材料本研究清洁级雌性SD大鼠购自南京君科生物工程，合格证号：SCXK（鲁）2008-0020。大鼠体重在220g-260g之间，共80只，再购取雄性SD大鼠，重量在220g-260g之间，共80验期间大鼠饲养于动物房中，保持室温在18-28℃之间，环境清洁、光线适中、饮食正常。1.2研究方法1.2.1妊娠高血压疾病模型建立雌雄大鼠混养，第二天检查雌性大鼠阴道的精子，发现精子的大鼠计为妊娠大鼠，为妊娠第一天d1。将孕鼠按照随机数字表法均分为4组：空白对照组、阴性对照组、阳性对照组、实验组，每组含16只大鼠。将阴性对照组、阳性对照组、实验组孕鼠进行妊娠高血压模型建立：给予该三组大鼠于d14静脉注射一氧化氮和酶抑制剂（美国Sigma），给药剂量为7mg/(kg.d），连续4天。空白对照组大鼠：从d14开始，每天定时给予静脉注射生理盐水800uL/d，连续4天。1.2.2给药方法空白对照组：该组大鼠于d18开始，给予大鼠尾静脉注射生理盐水，0.8mL/d，连续3d。阴性对照组：该组大鼠于d18开始，给予大鼠尾静脉注射生理盐水，0.8mL/d，连续3d。阳性对照组：该组大鼠于d18开始，给予大鼠尾肌肉注射硫酸镁溶液，100mg/(kg.d），连续3d。实验组：该组大鼠于d18开始，给予大鼠尾静脉注射丹参川芎嗪注射液，10mg(kg.d），连续3d。1.3指标测定1.3.1孕鼠血压测量：应用HX-II小动物血压测量计（北京明心痛生物科技有限公司），然后通过Medlab生物信号采样分析系统（南京美易科技）通过套尾法测定大鼠尾部动脉收缩压。1.3.224h尿蛋白测定：从d14天开始收集各组孕鼠24h尿液，测定其体积，并且取其中1mL通过考马斯亮蓝测定尿蛋白浓度。1.3.3胎盘组织处理：于d21,天，将孕鼠采用10%的水合氯醛3mL/kg，对大鼠进行麻醉。将大鼠进行剖宫，测定胎鼠的身长、重量、死胎率、畸形胎率。并取胎盘组织适量，用PBS洗两遍之后，用眼科剪剪碎，采用研磨器研成匀浆，通过200目尼龙网过滤后，即得单细胞悬液。1.3.4CyclinB1以及p21蛋白的测定[5]：采用免疫蛋白印迹法（Westernblot）检测所获得胎盘细胞中CyclinB1以及p21蛋白的表达量，具体操作步骤根据免疫蛋白印迹法（Westernblot）操作法，即收集取胎盘组织中的细胞，加入细胞裂解液冰上裂解提取蛋白。取30ug定量样品，用SDS-PAGE电泳分离后将蛋白转移至PVDF膜上，然后用5%脱脂牛奶-TBST，室温摇床封闭2h，一抗在37℃孵育3h，二抗于37℃孵育1h，ECL发光剂刺激荧光，压片显影定影。用灰度扫描仪处理分析结果。1.4统计学方法采用SPSS18.0数据统计分析软件，对计数资料采用χ2分析，正态计量资料采用t检验，并且采用平均值±标准差（x±s）表示，P0.05具有统计学差异。2结果2.1各组孕鼠血压以及尿蛋白浓度测定给药前，空白对照、阳性对照、阴性对照、实验组孕鼠血压以及尿蛋白浓度结果无显著性差异（P0.05），差异无统计学意义，并且与未妊娠的大鼠差异无统计学意义（P0.05），表明在建立模型前各雌鼠未孕。在建立模型之后，阳性对照组、阴性对照组、实验组收缩压以及尿蛋白浓度均显著高于空白对照组，差异具有显著性差异（P0.05）。在给药治疗后阳性对照组、实验组患者收缩压及尿蛋白浓度显著高于阴性对照组，差异具有统计学意义（P0.05），阳性对照组及实验组无统计学差异（P0.05），具体结果见表1：表1：各组孕鼠血压以及尿蛋白浓度测定Tab.1Groupsofpregnantratsbloodpressureandurineproteinconcentrationdetermination分组例数血压(mmHg)尿蛋白浓度（mg/mL)建模前建模后-给药前给药后建模前建模后-给药前给药后空白对照组1610