乙肝五项的影响因素与技术分析

河南科技大学高等教育自学考试毕业论文题目ELISA方法检测乙肝五项的结果影响因素分析地市学校商丘市高等医学专科学校专业医学检验准考证号140113101163考生姓名申蒙蒙指导教师二〇一四年九月八日目录摘要...........................................................................................................................-1-1前言..............................................................................................................................-2-1.1乙肝表面抗原（HBsAg）.......................................................................................................-2-1.2乙肝表面抗体（HBsAb）......................................................................................................-2-1.3乙肝Ｅ抗原（HBeAg）..........................................................................................................-3-1.4乙肝E抗体（HBeAb）..........................................................................................................-3-1.5乙肝核心抗体（HbcAb）.......................................................................................................-3-2影响因素........................................................................................................................-4-2.1样本采集与处理的影响................................................................................................-4-2.2试剂的影响....................................................................................................................-5-3操作技术的影响.........................................................................................................-6-4检测结果研读的影响...................................................................................................-7-5HooK效应影响..............................................................................................................-7-6干扰物质的影响.................................................................................................-7-7药物的影响............................................................................................................-8-8临床意义...................................................................................................................-8-结论.........................................................................................................................-10-参考文献...................................................................................................................-11-致谢.........................................................................................................................-12-河南科技大学本科毕业论文设计11-1-摘要摘要目的探讨ELISA法检测乙肝两对半常见影响因素和临床意义。了解这些因素会造成的结果，及其处理方法，减少差错事故发生，保证实验结果的准确性。方法回顾分析ELISA法检测乙肝两对半的检验步骤，严格按照试剂盒说明书检测，总结乙肝两对半检测的影响因素,并对临床意义进行探讨。结果乙肝检测时，标本处理不合格、试剂影响因素、操作技术失误、检验人员的业务水平、检验过程中的标准操作规程、检验结果的研读等是ELISA法检测乙肝乙肝两对半的影响因素,两对半各项指标对临床诊治乙肝具有指导意义。结论乙肝两对半是乙肝临床治疗依据的重要指标,ELISA法是检测乙肝的灵敏方法,严格按照操作步骤,排除各种影响因素的干扰，加强质量控制,乙肝酶法检测时要排除各种影响因素的干扰，尽量杜绝出现假阳性、假阴性结果，确保检测结果的准确性。ELISA试验以灵敏度较高，特异性较好的特点在临床广泛应用。但操作中的每个环节对试验的检测结果影响较大，如不按常规操作，有时会出现假阳性和假阴性的情况。我们根据多年在检验室的工作经验，总结以下可能会影响乙肝五项ELISA检测结果的因素。[关键词]：乙肝检测；ELISA法；标本；操作；影响因素河南科技大学本科毕业论文设计-2-前言乙型病毒性肝炎（下称乙肝）是由乙型肝炎病毒（HBV）引起的一种世界性传染性疾病，严重危害人们的身体健康。这些肝炎的共同点是可测出HBV的血清学标志，这些标志包括HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb，也就是俗称的乙肝两对半，乙肝的预防、诊断与疗效等方面很大程度都依赖乙肝两对半的检测[1]。酶联免疫吸附试验（ELISA）检测乙肝免疫学标志物的主要方法，具有简便、灵敏、特异性高等优点，成为基层医院对乙肝诊断分型疗效观察的主要手段。但ELISA测定中影响因素较多，有时可见到一些假阳性或假阴性。因此，排除各种影响因素的干扰，有利于提高检测结果的准确性。1.1乙肝表面抗原（HBsAg）HbsAg由226个氨基酸组成，由S基因编码，有多种亚型。因最早在澳大利亚发现又称“澳抗”。HbsAg是HBV感染后第一个出现的血清学标志物，HbsAg（+）表明体内有乙肝感染，但并不反映乙肝病毒有无复制、复制程度、传染性强弱。也有HbsAg（-）的HBV感染，是由于乙肝病毒的S基因突变或变异[1]，导致HbsAg氨基酸序列发生改变，而使现行的ELISA试剂不能检出，要通过HBV-DNA定量进行确认还有一种情况是虽有乙肝感染，但可能处于窗口期，导致HbsAg不能检出，要通过流行病学调查或进行HBV-DNA定量等进一步检查才能明确诊断。1.2乙肝表面抗体（HBsAb）HBsAb是乙肝病毒的中和抗体，意味着人体对乙肝病毒产生了抵抗力。乙肝感染者出现HBsAb是乙肝痊愈的一个指标，表明病毒已基本清除。接种疫苗和感染乙肝病毒后依靠自身免疫力清除河南科技大学本科毕业论文设计-3-乙肝病毒的人也会产生此抗体。临床也会见到HBsAg、HBsAb双阳性的标本，可能是由于不同亚型的乙肝病毒感染。此外也有学者证明乙型肝炎病人HBsAb出现后，血清内仍有DNA复制，随着时间的推移HBV-DNA的检出率逐渐下降[2-3]。一般认为抗体的P/N值（样本血清吸光度值与阴性对照吸光度之比）达到10以上时，说明体内已有免疫力可以预防HBV的感染如P/N值在10以下，虽然也是抗-HBs阳性，但其保护力减弱甚至不能预防HBV感染，此时有必要加强注射乙型肝炎疫苗，使抗-HBs滴度迅速提高，起到保护作用。1.3乙肝Ｅ抗原（HBeAg）HbeAg与Dane颗粒在血清中平行出现，与DNA聚合酶在血循环中消长动态也基本一致，使体内HBV复制及血清具有传染性的指标HbeAg持续存在时间一般不超过十周，否则提示感染转为慢性化。HbeAg阴转表明病毒复制水平降低，病变趋于静止。但临床上也会遇到HBsAg(+)、HbeAg（-）、HBcAb(+)而HBV-DNA阳性的病例，因此HBeAg转阴并不意味着病毒的复制停止或减弱，有学者认为此现象有可能为血清转换期或HBV-DNApre-C区发生突变有关，动态观察后仍没有改变，则可能为前C区突变。1.4乙肝E抗体（HBeAb）HbeAb常出现于HbeAg转阴后。e抗原阴性、e抗体阳性，表明乙肝相对好转，说明病毒复制趋于减少，预示患者的传染性已显著或相对降低，病毒复制趋于减少。持续e抗体阳性，说明乙肝传染性较弱，但并非完全没有传染性。有文献报道，虽然HbeAg（+）阴转为HbeAb（+）但仍有部分患者HBV-DNA阳性。此现象有可能与HBV-DNA前C区发生突变有关，出现“免疫逃逸”或不同亚型的HBV重叠感染。1.5乙肝核心抗体（HbcAb）HBcAb常紧继HBsAg、HBeAg之后再血清中检出，HbcAb主要分为两类，一类是HBcIgM另一类是HbcIgG。早期以IgM为主，HBcIgM在肝炎急性期呈高滴度，是判河南科技大学本科毕业论文设计-4-断急性乙肝感染的重要指标，随着急性乙肝的恢复，抗HBcIgM滴度降低乃至消失，如持续高滴度，常表明有慢性化倾向。在慢性活动性乙肝患者中，抗HBcIgM检出率及滴度亦较高，说明HBV复制活跃，是传染性强的指标之一；急性感染恢复期及慢性子持续性感染以HbcAb-IgG为主。临床上常见单项HbcAb阳性，可见于（1）既往感染；（2）低水平携带；（3）核心窗口期血清中HbsAg、HbeAg消失，而HBsAb还未出现；（4）被动获得，如经输血和胎盘获得。因此要通过流行病学调查、其他辅助检查或临床试验等方法才能得出准确的临床诊断。2影响因素ELISA法广泛用于乙肝两对半检测。但ELISA测定中影响因素较多，有时可见到一些假阳性或假阴性，医院检验科就ELISA测定乙肝两对半的影响因素及对策做如下讨论：2.1样本采集与处理的影响标本的影响标本应避免溶血,红细胞破裂可释放过氧化物酶活性物质干扰与显色剂发生显色反应。血块完全收缩使标本中的非特异性活性物质部分或全部失活,若在血液还未开始凝固时强行离心分离血清,ELISA测定过程中可形成肉眼可见的纤维蛋白块,易造成假阳性结果。2.1.1标本严溶血及混有红细胞的血清易沉