上册总结篇

蛋白质核酸DNAtRNAmRNArRNA组成单位L-α-AA单核苷酸一级结构特点氨基酸序列核苷酸序列维持力肽键3',5'-磷酸二酯键二级结构特点局部肽段中相邻氨基酸的空间关系双螺旋三叶草?/维持力氢键碱基堆积力///三级结构特点整个多肽链的三维构象超螺旋倒L//维持力次级键////四级结构特点能稳定结合的两条或两条以上多肽链（亚基）的空间关系染色体//核糖体维持力次级键///蛋白质核酸DNAtRNAmRNArRNA变性与复性原因空间结构被破坏/现象活性丧失，黏度增加增色效应，黏度下降颜色反应呈色总结二苯胺苔黑酚酸碱性质PI紫外吸收280nm（phe,trp,tyr）260nm含量测定紫外、定N、凝胶过滤、SDS-PAGE紫外、定P、定糖水解酸不引起消旋，trp破坏糖苷键＞磷酸酯键，嘌呤糖苷键＞嘧啶糖苷键碱trp稳定，消旋抗水解酶不消旋，不破环AADNaseRNase分离纯化AA根据AA极性或净电荷一条sDNA和一条sRNA分子量相同，如何区分?Pr根据Pr溶解度、净电荷、大小以及结合特性上的差异，从生物资源中纯化蛋白质序列测定小片段重叠双脱氧链终止法酶的特性共性降低反应活化能特性催化效率高、专一性强、反应条件温和、稳定性差、酶的活性受多种因素调节酶的分类氧、转、水、裂、异、合酶的结构单纯E和全EVS单体酶、寡聚酶和多酶体系酶的活性中心、同工酶酶的活力酶的活力、比活力计算酶的催化机制酶与底物的结合:三个假说影响催化效率的因素:邻近定向、底物形变、酸碱催化、共价催化、微环境的作用酶促反应动力学米氏方程（单底物）v=Vm×[S]/(Km+[S])，Km的意义，双倒数作图影响反应v的因素[S]、抑制剂的作用、温度、pH、激活剂、[E]酶活性的调节别构调节、共价调节、酶原激活抑制剂的作用抑制剂类型速度方程对动力学常数的影响Eg.不可逆抑制非专一性不可逆抑制//有机PVs–oH专一性不可逆抑制//自杀性S可逆抑制竞争性（I只与E结合）Vmax[S]v＝——————Km（1＋[I]/Ki）＋[S]Km增大，Vmax不变丙二酸vs琥珀酸，磺胺类药物Vs对氨基苯磺胺反竞争性（I只与ES结合）Vmax[S]v＝——————Km＋[S]（1＋[I]/Ki）Km和Vmax都减小，Vmax/Km比值不变/非竞争性（I可以E和ES结合）纯的非竞争性（I与E和ES结合相等）Vmax[S]v＝————————Km（1＋[I]/Ki）＋[S]（1＋[I]/Kiˊ）Vmax减小，Km不变/非竞争性（I可以E和ES结合）混合型非竞争性（I与E和ES结合不相等）/Vmax减小，Km增大或减小/竞争性抑制作用（competitiveinhibition）：竞争性抑制作用指某些抑制剂的化学结构与底物相似，和底物竞争酶的结合部位，从而影响了底物与酶的正常结合，其抑制程度取决于底物及抑制剂的相对浓度，这种抑制作用可以通过增加底物浓度而解除。从米氏方程可看出，加入竞争性抑制剂后，Vmax不变，Km变大。KmVm[S]·=(1+[I]Ki）+[S]VmaxKmKm'[S]Vmax/2uncompetitiveinhibition?noncompetitiveinhibition?Vm[S]·=Km1+[I]Ki1+[I]Ki+[S]Vm[S]·=(Km+[S])(1+[I]Ki）蛋白质二级结构（proteinsecondarystructure）:在蛋白质分子中的局部区域内氨基酸残基的有规则的排列，常见的二级结构有α-螺旋和β-折叠。二级结构是通过骨架上的羰基和酰胺基团之间形成的氢键维持的。超二级结构（super-secondarystructure）：在球状蛋白质中，若干相邻的二级结构单元如α-螺旋，β-折叠，β-转角组合在一起，彼此相互作用，形成有规则的在空间上能辨认的二级结构组合体，并充当三级结构的构件，基本组合有：αα，βαβ，βββ。蛋白质三级结构（proteintertiarystructure）:蛋白质的三级结构指蛋白质在各种二级结构单元的基础上，肽链借助次级键进一步折叠、卷曲成复杂的空间结构，它包括肽链中一切原子的空间排列方式，维系蛋白质三级结构的作用力是次级键。α-螺旋(α-helix)：是蛋白质多肽链主链二级结构的主要类型之一。肽链主链骨架在氢键的作用下，围绕中心轴盘绕成螺旋状，称为α-螺旋结构。典型的α-螺旋结构是：每个氨基酸残基上的亚氨基氢与前面第四个氨基酸残基上的羰基氧形成链内氢键；每3.6个氨基酸残基上升一圈，每圈上升0.54nm，每个氨基酸残基绕轴旋转100°，一个封闭的氢键内有13个原子。•DNA双螺旋(DNAdoublehelix)1.为右手、反平行双螺旋；2.主链位于螺旋外侧，碱基位于内侧；3.两条链间存在碱基互补：A与T或G与C配对形成氢键，称为碱基互补原则（A与T为两个氢键，G与C为三个氢键）；两条链配对偏向一侧，形成一个大沟和一个小沟4.螺旋的稳定因素为氢键和碱基堆砌力；5.螺旋的螺距为3.4nm，直径为2nm。核酸的变性•在理化因素作用下，DNA双螺旋的两条互补链松散而分开成为单链，从而导致DNA的理化性质及生物学性质发生改变，这种现象称为DNA的变性(denaturation)•将热变性后的DNA溶液缓慢冷却，在低于变性温度约25～30℃的条件下保温一段时间（退火annealing），则变性的两条单链DNA可以重新互补而形成原来的双螺旋结构并恢复原有的性质。•将变性DNA经退火处理，使其重新形成双螺旋结构的过程，称为DNA的复性退火（annealing）：即DNA由单链复性变成双链结构的过程。来源相同的DNA单链经退火后完全恢复双链结构，同源DNA之间、DNA和RNA之间，退火后形成杂交分子。熔解温度（meltingtemperature,Tm）：指DNA加热变性时，双螺旋结构失去一半时的温度，成为熔解温度，用Tm值表示。PCR技术:为聚合酶链式反应，是以DNA聚合酶在体外扩增DNA片断技术，经历DNA变性、退火、聚合酶催化DNA链的延伸等三个步骤周而复始的过程。•增色效应(hyperchromiceffect)：指DNA变性后双螺旋等高级空间构象被破坏，碱基暴露，其260nm紫外光的光吸收度增加的现象；•AA分子带有相等正、负电荷时，溶液的pH值称为该AA的等电点（isoelectricpoint,pI）。•什么叫蛋白质沉淀，有哪些沉淀蛋白的方法？•要根据分子量分离蛋白可采用哪些方法？•常用方法离子交换层析、凝胶过滤层析、PAGE、SDS-PAGE的分离原理•凝胶层析VSPAGE•PAGEvsSDS-PAGE•利用蛋白酶和化学试剂有选择地水解，结合Edman降解可确定大的蛋白质的序列。N端分析二硝基氟苯法（DNP法、DNFB法或FDNB法）丹磺酰氯法（DNS法）苯异硫氰酸(酯)法（PITC法、PTC法、PTH法、Edman降解法）C端分析肼解法：也称联氨法硼氢化锂还原法肽链的拆开和分离酶解方法溴化氰（CNBr）裂解法胰蛋白酶糜蛋白酶嗜热菌蛋白酶胃蛋白酶反应名称试剂颜色反应有关基团有此反应的蛋白质或氨基酸双缩脲反应NaOH、CuSO2紫色或粉红色二个以上肽键所有蛋白质米伦反应HgNO3、Hg(NO3)2及HNO3混合物红色Tyr黄色反应浓HNO3及NH3黄色、橘色Tyr、Phe乙醛酸反应(Hopking-Cole反应)乙醛酸试剂及浓H2SO4紫色Trp坂口反应(Sakaguchi反应)α-萘酚、NaClO红色胍基Arg酚试剂反应(Folin-Cioculteu反应)碱性CuSO4及磷钨酸-钼酸蓝色酚基、吲哚基Tyr茚三酮反应茚三酮蓝色自由氨基及羧基α-氨基酸•米氏常数（Michaelisconstant,Km）：米氏酶的特征常数之一。在酶促反应中Km=（K2+K3）/K1，其物理意义是当酶促反应速度达到最大反应速度一半时的底物浓度，单位是mol/L。Activecenterofenzyme：酶的活性中心是指酶分子上必需基团比较集中并构成一定空间构象、与酶的催化活性直接相关的结构区域，或是指酶分子中能与底物结合并起催化反应的空间部位。通常包括结合部位和催化部位。结合部位决定酶的专一性，催化部位决定酶促反应的反应性质。•酶活力（Enzymeactivity）：是指在一定条件下，酶所催化的反应初速度。它表示酶催化反应的能力，样品中酶的含量。酶的比活力（Specificactivity）•每毫克酶蛋白所具有的酶活力。•酶比活力=酶活力（单位）/mg（蛋白）•单位：U/mg蛋白质。•酶的比活力是分析酶的含量与纯度的重要指标。酶原激活:有些酶在细胞内合成和初分泌时，并不表现有催化活性，这种无活性状态的酶的前身物称为酶原。酶原在一定条件下，受某种因素的作用，酶原分子的部分肽键被水解，使分子结构发生改变，形成或暴露酶的活性中心，无活性的酶原转化成有活性的酶称酶原的激活。别构调节：别构酶分子的非催化部位与某些效应物可逆地非共价结合后发生构象的改变，进而发生酶活性状态的改变。别构效应，又称为变构效应:当某些寡聚蛋白与别构效应剂（变构效用剂）发生作用时，可以通过蛋白质构象的变化来改变蛋白的活性，这种改变可以是活性的增加或减少。别构效应剂（变构效用剂）可以是蛋白质本身的作用物，也可以是作用物以外的物质（如底物、激活剂、抑制剂等）。酶的异促作用：指调节物与底物分子不同的别构酶发生的别构效应。