不同盐浓度胁迫对小麦幼苗生理特性的影响预习报告

预习报告班级：2013级草业科学小组成员：XXX一、实验名称不同盐浓度胁迫对小麦幼苗生理特性的影响二、试验目的逆境处理对植物各项生理指标的影响三、实验材料与方法1实验材料：小麦幼苗2实验设计：播种时进行撒播，同样的土壤环境种三盆并浇适宜水分以利于小麦的发芽，水分不易过多，以防土壤板结。经过十二天后，幼苗达十厘米以上，在实验室其中两盆进行干旱处理，一盆作为对照。四、测定指标细胞汁液浓度的测定，植物组织蒸腾速率的测定，超氧化物歧化酶（SOD）活性的测定，过氧化氢含量测定，过氧化氢物（POD）活性的测定，过氧化氢酶(CAT)活性测定。测定方法：一、叶绿素的提取1、称取剪碎小麦叶片样品0.2g，3次重复，放入研钵中，加少量石英砂和碳酸钙粉末及2－3ml乙醇研成匀浆，再加乙醇10ml，至组织发白，静止3－5min；2、将匀浆连同残渣一起转移入离心管中，在4000r/min离心10min；3、把叶绿素提取液倒入比色皿中，在665、649和470测定消光值；4、Ca=13.95D665-6.88D649Cb=24.96D649-7.32D665Cx.c=(1000D470-2.05Ca-114.8Cb)/245；5、叶绿体色素含量=色素的浓度（C）×提取液体积×稀释倍数/小麦鲜重。二、过氧化氢含量的测定1、称取小麦组织2g左右，加少量石英砂和4℃下预冷的丙酮研磨成匀浆，转入离心管在3000r/min中10min，弃去残渣；2、吸取上清液1ml加入5％硫酸钛0.1ml和浓氨水0.2ml,待沉淀形成后3000r/min离心10min,弃去上清液，沉淀用丙酮洗涤3－5次；3、向沉淀中加入2mol硫酸5ml，待完全溶解后，在415nm波长下比色；4、每克鲜重小麦组织中H2O2含量（μmol/g）=C×Vt/FW×V1。三、CAT活性测定1、称取0.5g左右小麦组织放入预冷研钵中，加入少量石英砂，4℃下预冷Ph=7.0磷酸缓冲液，研磨成匀浆，用磷酸缓冲液冲洗研钵三次，洗涤液合并于25mL容量瓶，在Ph=7.0的磷酸缓冲液定容至25mL，混匀后25℃冰浴，静置10min,取上清液约15克，转速4000r/min离心10min，上清液5℃备用。取试管2支1支为空白，1支为样品管分别加酶液0.2mL，PH=7.8磷酸缓冲液1.5mL，蒸馏水1mL，空白管沸水浴5min）25℃预热3分钟，逐管加入0.3ML0.1molH2O2,每加完一管立刻计时，并迅速倒入石英杯，240nm测定吸光度，每隔1分钟读数，共测2分钟。2.CAT活性（μ/g.min）=A240*vt|0.1*v1*tw四、SOD酶活性测定1、酶液提取取小麦的叶片0.5g于预冷的研钵中，取2ml预冷的提取介质在冰浴下研磨成匀浆，加入提取介质冲洗研钵，并使终体积为10ml,取5ml于4℃下10000r/min离心15min，上清液为SOD粗提取2显色反应取透明度好、质地相同的15mm×150mm试管4支，2支为测定、2支为对照,按表加入试剂混匀后，给1支对照管罩上比试管稍长的双层黑色硬纸套遮光，于其他各管同时置于4000lx日光灯下反应20～30min（要求各管照管情况一致，反应温度控制在25～35℃之间，视酶活性高低适当调整反应时间）试剂名称用量（ml）终浓度（比色时）0.05mol/L磷酸缓冲液1.5130mmol/LMet溶液0.313mmol750μmol/LNBT溶液0.375μmol100μmol/LEDTA-Na2液0.310μmol20μmol/L核黄素0.32.0μmol酶液0.10对照2支管以缓冲液代替蒸馏水0.5总体积3.33、SOD活性测定于计算至反应结束后，用黑布罩盖上试管，终止反应。以遮光的对照管作为空白，分别在560nm波长下测定各管的吸光值SOD活性=（Ao-As）×VT/Ao×0.5×FW×V1SOD比活力=SOD总活性/蛋白质浓度式中SOD总活性以每克鲜重酶单位表示；比活力单位以每毫克蛋白酶单位、酶单位.mg-1表示；Ao——照光对照管的光吸收值As——样品管的光吸收值VT——样液总体积（ml）V1——测定时样品用量（ml）FW——样品鲜重（g）五、植物组织水势的测定1.取干净的试管12支，分成甲、乙两组，编号。甲组试管中分别加质量摩尔浓度为0.1--0.6六种浓度的CaCl2各4ml左右。乙组试管用同样的方式各加2ml。塞上软木塞备用。2、选取均匀一致的植物叶片5片，叠在一起，用打孔器打取叶圆片5片，放入乙组试管，使叶片侵入溶液，塞紧木塞，平衡20分钟。期间多次摇动试管，以加速水分平衡。3、到预定时间后，在乙组每一试管中用蘸取微量甲烯蓝粉末，摇匀，溶液变蓝。4、用毛细管在乙组试管中吸取有色溶液少许，插入装有同样浓度的甲组试管中，毛细管尖端放在溶液中部，轻轻挤出有色溶液1小滴，小心取出毛细管。观察有色小液滴的升降情况。计算溶液渗透势=-iCRT六、植物组织蒸腾速率的测定1、在待测的植株上选一枝条，剪下立即放在天平上称重，记录重量及起始时间，并把枝条放回原来环境。2、过3-5分钟后，对枝条进行第二次称重，并记录蒸腾时间。3、测定枝条的总叶面积4、根据定结果计算蒸腾速率（E）E=W/A*t式中：E-------蒸腾速率W------蒸腾失水量A-----叶面积t---测定时间五、预期结果盐渍化属于逆境，水分在植物的生命活动中占主导地位，大多数植物遭受盐渍化逆境后各个生理指标都会受到不同程度的影响。小麦的生长在不同盐浓度土壤中呈现不同的生理特性。当分别用清水，0.3mol/L盐溶液，0.6mol/L盐浓度处理小麦幼苗后，小麦幼苗的各个生理指标都受到了正面或负面的影响。