【精品课件】山西生物应用职业技术学院

中药化学实用技术学习情景四——中药中香豆素(Coumarin)类化学成分的提取分离技术学习情境四中药中香豆素类化合物的提取分离技术2掌握秦皮中香豆素的提取分离原理及操作技术；熟悉蛇床子中香豆素的提取分离原理及操作技术；了解前胡中香豆素的提取分离原理及操作技术。知识要求3能力要求学习目标1掌握中药中香豆素类化学成分的提取分离原理及操作技术。熟练进行秦皮、蛇床子中香豆素的提取分离操作；能进行前胡中香豆素的提取分离操作。教学内容学习提示香豆素类化学成分的结构、性质及提取分离知识任务一实训秦皮中香豆素类化合物的提取分离技术秦皮中香豆素类成分的的提取分离及鉴定学习提示香豆素的结构与特点一二三香豆素的理化性质及检识香豆素类化学成分的提取分离命名香豆素最早由豆科植物香豆中提取获得，并且具有芳香气味，故而命名为香豆素。定义是具有苯骈α-吡喃酮母核的一类天然化合物的总称，在结构上可以看成是顺邻羟基桂皮酸失水而成的内酯。分布与活性广泛分布于高等植物中，特别在被子植物如伞形科、芸香科、豆科等科中多见。在某些真菌中也发现有香豆素成分的存在。香豆素有多方面的生理活性，祖师麻中分离的瑞香素有抗炎和止痛作用；蛇床子中分离出的蛇床子素能治疗脚癣、湿疹等病。香豆素顺式邻羟基桂皮酸苯骈α-吡喃酮一、香豆素的结构类型简单香豆素类呋喃香豆素类吡喃香豆素类其他香豆素简单香豆素仅在苯核上具有取代基的香豆素。常见取代基为羟基、甲氧基、亚甲氧基和异戊烯氧基等。这一类香豆素多数在C7位上连有含氧基团，7-羟基香豆素（伞形花内酯）可以认为是香豆素类成分的母体，其他如在C5、C6、C8位上也会有含氧基团取代。异戊烯基常连接在C6和C8上。OOHO呋喃香豆素由香豆素核上的异戊烯基与邻位酚羟基环合而成。成环后有时可因降解而失去3个C原子。呋喃香豆素又分为线型和角型两种类型。1.线型分子由C6-异戊烯基与C7-羟基环合而成（即6，7-呋喃香1.豆），3个环是处于一直线上的；补骨脂内酯花椒毒内酯2.角形分子由C8-异戊烯基与C7-羟基成环（即7，8-呋喃香素），三个环处在一折线上。OOOOOOOCH3OOOOCH3CH3OOOO异补骨脂茴芹内酯吡喃香豆素由香豆素苯环上异戊烯基和邻位羟基环合形成2，2-二甲基α-吡喃环结构。同呋喃香豆素类似，也分成线型（6，7-吡喃香豆素）和角型（7，8-吡喃香豆素）两种类型[根据酬和位置分]。OOOOOO花椒内酯邪蒿内酯其他香豆素主要包括指在α-吡喃酮环上有取代的一类香豆素（多在C3或C4上，例如calanolideA）；双香豆素类（双七叶内脂）；异香豆素类（茵陈内脂）。OOOOOHOOHOHOCH2CCH3OOOHOHOOcalanolideA茵陈内酯紫苜蓿酚内酯环的水解二、香豆素的理化性质溶解性性状显色反应游离香豆素多为结晶性物质，有一定熔点，多有芳香气味。分子量小的有挥发性，能随水蒸气蒸出，并能升华。香豆素苷多数无香味和挥发性，也不能升华。α、β-不饱和内酯环在稀碱液的条件下，可被水解开环，生成顺邻羟基桂皮酸盐，该盐经酸化即闭环恢复成原来的内酯结构，该性质可用于提取分离。1.内酯的颜色反应（异羟肟酸铁反应）2.酚羟基的颜色反应3.Gibb’s反应4.Emerson反应游离香豆素能溶于沸水，易溶于甲（乙）醇、氯仿、乙醚等，可溶于石油醚。香豆素苷类能溶于水、甲醇、乙醇，而难溶于乙醚、苯等极性小的有机溶剂。荧光性香豆素母核本身无荧光，但羟基香豆素类化合物在紫外光下大多显蓝色或蓝绿色荧光，在碱液中更加显著。香豆素的荧光性质可用于香豆素成分的检识鉴别。色谱检识1.薄层色谱法2.纸色谱法内酯环的水解【注】如果与碱液长时间加热，水解产物顺邻羟桂皮酸衍生物则转变为反邻羟基桂皮酸的衍生物，再经酸化也不能环合成内酯，故提取时要注意碱的浓度与作用时间。内酯的颜色反应“异羟肟酸铁反应”在碱性条件下，内酯开环，与盐酸羟胺中的羟基缩合生成异羟肟酸，然后在酸性条件下再与三价铁盐络合而显红色。酚羟基的颜色反应①三氯化铁反应具有酚羟基取代的香豆素类在水溶液中可与Fe3+络合而产生绿色至墨绿色沉淀。②重氮化反应若酚羟基的邻对位无取代时，可与重氮化试剂反应产生红色至紫红色。其他的颜色反应①Gibb’s反应香豆素类成分在碱性条件（pH9~10）下内酯环水解生成酚羟基，如果其对位（6位）无取代，与2，6－二氯苯醌氯亚胺（Gibb’s试剂）反应显蓝色。②Emerson反应与Gibb’s反应类似，香豆素类成分如在6位无取代，内酯环在碱性条件下开环后与4－氨基安替比林和铁氰化钾（Emerson试剂）显红色。三香豆素的提取与分离溶剂提取法香豆素的提取与分离提取分离碱溶酸沉法水蒸气蒸馏法色谱法酸碱分离法超临界流体萃取法分步结晶法真空升华或蒸馏法（一）香豆素的提取溶剂提取法：香豆素类成分的极性不同，各种溶剂都有提出该成分的可能。当利用极性由小到大的溶剂顺次萃取时，各萃取液浓缩后都有可能获得结晶，再结合其他分离方法进行分离。碱溶酸沉法：香豆素类具有内酯结构，能溶于稀碱液与脂溶性杂质分离，再经酸化使内酯环合，香豆素类成分即可析出，也可用乙醚等有机溶剂萃取得到。但在碱水中加热的时间不可过长，以防香豆素开环后发生异构化。水蒸气蒸馏法：小分子的游离香豆素因具有挥发性，可用水蒸气蒸馏法进行提取。超临界流体提取法：超临界流体提取新技术已被广泛应用于香豆素类成分的提取中。极性小的游离香豆素可直接提取，而苷类则可通过加入乙醇等极性溶剂作夹带剂来提取。（二）香豆素的分离酸碱分离法：弱酸性和中性香豆素的混合物，可利用碱水酸沉法分离。色谱法：柱色谱分离中多采用硅胶吸附剂，慎用氧化铝，否则会使香豆素结构发生变化。此外还可用葡聚糖凝胶色谱进行分离。分步结晶法：该方法适用于含量较高的香豆素。可利用含氧香豆素在石油醚中溶解度小的特点，在含香豆素的乙醚提取液中，逐步加人石油醚，使香豆素逐步析出。真空升华或蒸馏法：香豆素类易升华的性质使之与不挥发性成分分开。对于热稳定性好的香豆素，此法是非常方便实用的。但对于热不稳定的香豆素往往会因此引起重排或降解。任务一秦皮中香豆素类化学成分的提取分离技术学习目标一二三秦皮中香豆素类化学成分的提取分离技术必备知识五四六相关知识链接及拓展课堂互动目标测试一学习目标2掌握秦皮中香豆素类化合物的提取、分离及鉴定技术。熟悉秦皮中香豆素类化合物的结构及性质。了解秦皮中香豆素类化合物的存在及生物活性。知识要求3能力要求1掌握秦皮中香豆素类化学成分的提取分离原理及操作技术。熟练进行秦皮中香豆素类化合物的提取、分离及鉴定操作。学会秦皮中香豆素类化合物的色谱鉴定技术。学习目的二秦皮中香豆素类化学成分的提取分离技术秦皮为木犀科植物苦栎白蜡树FraxiuusrhyuchophyllaHance.、白蜡树F.chinensisRoxb.、尖叶白蜡树F.chinensisRoxb.Var.acuminateLingelsh.或宿柱白蜡树F.stylosaLingelsh.的干燥枝皮或干皮。具有清热燥湿、收涩、明目等功效。临床主治慢性菌痢，对慢性支气管炎亦有一定疗效。秦皮含有七叶内酯、七叶苷、秦皮素以及秦皮苷等香豆素类化合物，此外还有鞣质、皂苷、树脂和脂溶性色素等成分。七叶内酯和七叶苷为其主要成分，具有抗炎、镇痛、止咳、祛痰与平喘等功效。秦皮中七叶内酯和七叶苷的提取分离工艺流程秦皮粗粉95％乙醇回流提取药渣提取液减压回收乙醇浓缩液加水温热溶解，用等体积氯仿萃取氯仿层水层（树脂、脂溶性色素）挥去氯仿，用乙酸乙脂萃取水层乙酸乙脂浓缩至小体积静置无水硫酸钠干燥后，减压蒸干残留物微黄色粗品残留物七叶苷黄色粗品甲醇－水重结晶七叶内酯课堂互动用95%乙醇回流提取和减压浓缩是各应注意什么问题?（三）秦皮中香豆素类的提取分离（二）秦皮中主要有效成分的性质（一）秦皮中主要有效成分及结构三必备知识（一）秦皮中主要有效成分及结构秦皮含有七叶内酯、七叶苷、秦皮素以及秦皮苷等香豆素类化合物，此外还有鞣质、皂苷、树脂和脂溶性色素等成分。七叶内酯和七叶苷为其主要成分，具有抗炎、镇痛、止咳、祛痰与平喘等功效。glc-O七叶内酯七叶苷（二）秦皮中主要有效成分的性质七叶内酯(aescule-tin,七叶素）为无色或淡黄色针状结晶，熔点276℃，易溶于甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、稀碱水，略溶于水，难溶于氯仿等亲脂性有机溶剂；七叶苷(aesculin)为无色或浅黄色针状结晶，熔点206℃，溶于甲醇、乙醇、碱水或水，难溶于乙酸乙脂，不溶于氯仿。两者均显明显的蓝色荧光。（二）秦皮中主要有效成分的性质秦皮素(fraxetin)分子式C10H8O5，相对分子质量208.16。片状结晶（乙醇水溶液），熔点227～228℃。溶于乙醇及盐酸水溶液，微溶于乙醚和沸水。秦皮苷(fraxin)分子式C16H18O10，相对分子质量370.30。水合物为黄色针状结晶（水或稀乙醇溶液），无水物熔点205℃。微溶于冷水，易溶于热乙醇及热水。OOORHOH3CO秦皮素R=H秦皮苷R=glu12提取分离依据根据秦皮中七叶苷和七叶内酯均溶于热乙醇的性质，用乙醇为溶剂进行回流提取。利用七叶苷和七叶内酯均不溶于氯仿的性质除去亲脂性杂质。利用在乙酸乙酯中的溶解度差异分离二者。（三）秦皮中香豆素类成分的提取分离苦枥白蜡树中秦皮素、秦皮苷的提取分离苦枥白蜡茎干皮粉乙醇回流提取提取液减压浓缩，回收乙醇浸膏氯仿层水层回收氯仿，用醋酸乙酯提取水液醋酸乙酯液无水硫酸钠干燥，减压回收溶剂残留物浓缩，放置、析晶，过滤结晶甲醇、水重结晶秦皮苷甲醇溶解、浓缩、放置过夜结晶体甲醇、水重结晶秦皮素加水温热溶解，等体积氯仿萃取四知识拓展（一）白蜡树树皮中七叶素的提取分离索氏提取器内，用95%乙醇回流提取，回收溶剂，浓缩物加硫酸水浴加热后冷却过滤，滤液用乙醚萃取，回收乙醚，放置析晶，甲醇重结晶得七叶素。工艺流程如下：白蜡树树皮干燥粗粉乙醇提取液浓缩浓缩物加硫酸水浴加热3小时，冷却，过滤杂质滤液等体积乙醚提取4次乙醚液回收乙醚、放置过夜黄色结晶甲醇重结晶七叶素95%乙醇回流提取四知识拓展（二）苦枥白蜡树中秦皮素、秦皮苷的提取分离工艺流程如下：苦枥白蜡树树皮粗粉95%乙醇回流提取乙醇提取液减压回收乙醇浸膏加水稀释，醋酸乙酯、正丁醇分别萃取水层醋酸乙酯层正丁醇层回收醋酸乙酯浸膏硅胶柱色谱，用氯仿-甲醇-甲酸不同比例洗脱第15、16份第19、20份回收至干，50%乙醇溶解，过滤回收至干，50%乙醇溶解，过滤滤液滤液冰箱中析晶冰箱中析晶秦皮素秦皮乙素四知识拓展（三）白蜡树树皮中七叶素的提取分离工艺流程白蜡树树皮干燥粗粉乙醇提取液浓缩浓缩物加硫酸水浴加热3小时，冷却，过滤杂质滤液等体积乙醚提取4次乙醚液回收乙醚、放置过夜黄色结晶甲醇重结晶七叶素95%乙醇回流提取任务二蛇床子中香豆素类化学成分的提取分离学习目标一二三蛇床子中香豆素类化学成分的提取分离必备知识五四六相关知识链接及拓展课堂互动目标测试一学习目标2掌握蛇床子中香豆素类化合物的提取、分离及鉴定技术。熟悉蛇床子中香豆素类化合物的结构及性质。了解蛇床子中香豆素类化合物的存在及生物活性。知识要求3能力要求1掌握蛇床子中香豆素类化学成分的提取分离原理及操作技术。熟练进行蛇床子中香豆素类化合物的提取、分离及鉴定操作。学会蛇床子中香豆素类化合物的色谱鉴定技术。学习目的二蛇床子中香豆素类化学成分提取分离技术蛇床子为伞形科植物Cnidiummonnieri(L.)Cuss的果实。主产于河北、山东、江苏等地。具有温肾助阳，祛风燥湿，杀虫的功能，用于男子阳痿，阴囊湿痒，女子带下阴痒、宫寒不孕、风湿痹痛、疥癣湿疮等的治疗。蛇床子中蛇床子素和欧前胡素的提取分离工艺流程蛇床子果实粗粉乙醇浸泡2次，合并乙醇液减压浓缩油层水层石油醚萃取，放置析晶放置后凝固，少量乙醇热溶，放置析晶结晶结晶无水乙醇反复重结晶无水乙醇反复重结晶结晶结晶蛇床子素欧前胡素（三）蛇床子中主要有效成分的提取分离（二）蛇床子中主要有效成分的性质（一）蛇床子中主要有效成分及结构三必备知识（一）蛇床子中主要有效成分蛇床子主含挥发油和香