《药物分析》第12章维生素类药物的分析

第12章维生素类药物的分析维生素：是维持人体正常代谢所必需的一类微量元素分类：脂溶性：维生素A、维生素D2、D3、维生素E、维生素K1；水溶性：B族(维生素B1、B2、B6、B12)、维生素C、叶酸、烟酸和烟酰胺19:46第1节维生素A的分析一、结构与性质CH2OCOCH3CH3CH3CH3CH3H3CC22H32O2328.49维生素A的醋酸酯具有共轭多烯侧链的环己烯19:46二、鉴别试验1.三氯化锑反应：维生素A在饱和无水三氯化锑的无醇三氯甲烷溶液中，显蓝色，渐变成紫红色。溶剂采用饱和无水三氯化锑的无醇氯仿溶液。2.光谱法：维生素A分子中含5个共轭双键，其无水乙醇液在326nm波长处有最大吸收。3.色谱法：英国药典（BP）和美国药典（USP）中维生素A采用薄层色谱法鉴别19:46维生素A的紫外光谱图图12-119:46三、含量测定《中国药典》2005版：采用紫外-可见分光光度法测定维生素A及其制剂的含量，以单位表示。制剂：由于制剂中含有稀释用油和维生素A原料药中混有其他杂质，采用紫外-可见分光光度法测得的吸光度不是维生素A独有的吸收。在规定的条件下，非维生素A物质的无关吸收所引入的误差可以用校正公式校正，以便得到正确结果。19:46测定方法《中国药典》2005版附录对维生素A的测定收载了“第一法”和“第二法”两种方法。合成维生素A和天然鱼肝油中的维生素A均为酯式维生素A。如供试品中干扰的杂质较少，采用第一法（直接测定法，适用于高纯度的维生素A醋酸酯）测定；否则按第二法（皂化法，适用于维生素A醇）测定。19:46第2节维生素B的分析一、结构与性质-+NSH3CNNNH2CH2CH3CH2CH2OHClHCl337.27HCl.C12H17ClN4OS氨基嘧啶环－CH2－噻唑环(季铵碱)维生素B1B族维生素主要有B1（盐酸硫胺）、B2（核黄素）、B6（吡多辛）、B12（氰钴胺）、烟酸及烟酰胺等。本节主要介绍维生素B119:46性质：1.共轭双键：UV（λmax=246nm）2.噻唑环含S原子：硫色素荧光法分解产物与Pb(AC)2反应3.碱性N原子：嘧啶环——伯氨噻唑环——季铵可与酸成盐；可与生物碱沉淀剂反应（鉴别和硅钨酸重量法）19:46二、鉴别试验1.硫色素反应：维生素B1溶于氢氧化钠溶液中，噻唑环被氧化开环，生成硫醇化合物，经铁氰化钾氧化成硫色素，产物溶于正丁醇中，显蓝色荧光，加酸酸化后荧光即消失，再加碱，荧光又复显。2.沉淀反应：可与多种生物碱沉淀试剂反应，生成不同颜色的沉淀3.氯化物反应：水溶液显氯化物的鉴别反应19:46三、杂质检查1.硝酸盐：维生素B1在合成时需要使用硝酸盐，因此可能会引入硝酸盐杂质。采用靛胭脂法检查，限量为0.25%。2.总氯量：本品为盐酸盐，需检查总氯量。药典采用银量法检查，按干燥品计算，含总氯量应为20.6%～21.2%。19:46四、含量测定《中国药典》2005版规定维生素B1原料药：非水滴定法（加入醋酸汞消除盐酸盐的干扰，喹哪啶红－亚甲蓝混合指示液）片剂、注射液：紫外分光光度法（具共轭双键，在紫外区246nm处有最大吸收）19:46维生素B1片的含量测定取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于维生素Ｂ125mg），置100ml量瓶中，加盐酸溶液(9→1000)约70ml，振摇15分钟使维生素Ｂ1溶解，加盐酸溶液(9→1000)稀释至刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过，精密量取续滤液5ml，置另一100ml量瓶中，再加盐酸溶液(9→1000)稀释至刻度，摇匀，照分光光度法在246nm的波长处测定吸收度，按C12H17ClN4OS.HCl的吸收系数为421计算，即得。计算：%100100%%11标示量标示量WEWDVAcm%100100%%11标示量标示量WEWDVAcm19:46第3节维生素C的分析一、结构与性质L-抗坏血酸19:461.多羟基化合物：具糖类似的性质2.具连二烯醇结构：强还原性，贮存过程中易变色——氧化还原滴定法CCOHOH(O)CCOO3.酸性：连二烯醇，可与Na2CO3成盐4.旋光性：具手性C原子（C4、C5），L(+)－抗坏血酸活性最强19:46二、鉴别试验（2005版《中国药典》）1.氧化反应与硝酸银反应：+AgNO3Ag↓（黑色）与2，6-二氯靛酚的反应：+2，6-二氯靛酚钠蓝色消失与碱性酒石酸铜的反应：维生素C钠+碱性酒石酸铜红色沉淀2.光谱法:红外光谱法HCI19:46三、杂质检查1.铁盐和铜盐的检查：原子吸收分光光度法2.溶液颜色与澄清度的检查：紫外-可见分光光度法，在420nm的波长处测定吸光度，不得过0.03。3.炽灼残渣：不得过0.1%4.重金属：不得过百万分之十5.细菌内毒素（注射剂）19:46四、含量测定直接碘量法：（原料药及其制剂均采用此法）1.原理维生素C具有较强的还原性，在稀醋酸酸性溶液中，可被碘定量氧化，以淀粉为指示剂，终点显蓝色。2.注意事项：（1）溶剂：加新沸冷H2O，减少水中溶解氧对测定的影响（2）酸性环境：HAC，减慢VitC被O2氧化速度（3）立即滴定：减少O2的干扰（4）附加剂干扰的排除片剂——滑石粉——过滤注射剂——抗氧剂——丙酮19:463.测定方法取本品约0.2g，精密称定，加新沸过的冷水100ml与稀醋酸10ml使溶解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴定液(0.05mol/L)滴定，至溶液显蓝色并在30秒钟内不褪。每1ml碘滴定液(0.05mol/L)相当于8.806mg的C6H8O6。计算：%100C%sMTVF维生素19:46第4节维生素D的分析一、结构与性质CH3C28H14O396.66H2CCH(CH3)2CH3CHCHCHCH3CHHOH维生素D2HCH(CH3)2(CH2)3CHCH3C27H44O384.65HOH2CCH3H维生素D3甾醇的衍生物主是维生素D2和维生素D319:46性质：1.旋光性：具手性碳原子，有旋光性，D2的比旋度为+102.5°～+107.5°；D3比旋度为+105°～+112°。2.稳定性：含有多个双键，极不稳定，在空气、日光下，遇酸或氧化剂，均能发生氧化反应而变质。3.醋酐-浓硫酸显色反应：本品的氯仿溶液，加入醋酐-浓硫酸溶液，摇振后，显色。4.紫外吸收特性：D2和D3均含共轭体系，有紫外吸收，19:46二、鉴别试验（2005版药典）1.醋酐-浓硫酸显色反应：维生素D2或D3+氯仿+醋酐-浓硫酸初显黄色，渐变红色，迅即变为紫色D2最后成绿色2.光谱法：维生素D2和维生素D3的红外光吸收图谱应与对照的图谱一致。D3再变为蓝绿色，最后变为绿色19:46三、杂质检查维生素D2原料药中应检查麦角甾醇。检查方法：取本品10mg，加90％乙醇2ml溶解后，加洋地黄皂苷溶液（取洋地黄皂苷20mg，加90％乙醇2ml，加热溶解制成）2ml，混合，放置18小时，不得发生浑浊或沉淀。19:46四、含量测定《中国药典》2005版附录中收载了维生素D的含量测定方法采用高效液相色谱法分三法第一法：无维生素A醇及其他杂质干扰的供试品第二法：有干扰的第三法：按第二法处理后前维生素D峰仍受杂质干扰，仅维生素D峰可以分离时维生素D对光敏感，测定应在暗室中进行。19:46第5节维生素E的分析一、结构与性质CH3CH3CH3COOCH3CH3OC31H52O3472.75维生素E苯并二氢吡喃类带有脂肪侧链R1、R2和乙酰化酚羟基，又称生育酚醋酸酯。19:46性质：1.水解性：乙酰化的酚羟基（酯键），易水解成游离生育酚2.还原性：游离生育酚易被氧化，遇光易变质3.旋光性：天然—具旋光性合成品—无旋光性4.紫外吸收：具有苯环19:46图12-2维生素E的紫外吸收图谱0.01%无水乙醇中λmax=284nmλmin=254nm19:46二、鉴别试验1.硝酸反应：维生素E在酸性条件下加热，先水解生成游离生育酚，再进一步被硝酸氧化成生育红而显橙红色。方法：取本品约30mg，加无水乙醇10ml溶解后，加硝酸2ml，摇匀，在75℃加热约15分钟，溶液显橙红色。2.光谱法：本品的红外光吸收图谱应与对照图谱一致。19:46三、杂质检查游离生育酚的检查：1.来源：制备中未酯化的或贮存中分解的生育酚2.方法：硫酸铈滴定法（铈量法）3.原理：利用游离生育酚的还原性，将硫酸铈还原成硫酸亚铈。终点时过量硫酸铈与二苯胺（指示剂）反应，显蓝色。取本品0.10g，加无水乙醇5ml溶解后，加二苯胺试液1滴，用硫酸铈滴定液(0.01mol/L)滴定，消耗硫酸铈滴定液(0.01mol/L)不得过1.0ml。19:46四、含量测定《中国药典》2005版：维生素E及其制剂含量：均采用气相色谱法。加校正因子内标法：条件：载气：N2固定相：硅烷化硅藻土上涂布硅酮（OV-17）柱温：265℃检测器：氢火焰离子化检测器(FID)内标：正三十二烷n≥500R≥219:46是样品中不存在的物质与被测组分峰靠近能与各组分完全分离与被测组分的量接近内标物19:46