PCR仪常见问题

1.反应后反应管壁出现液滴？可能原因：运行程序前没有开启热盖加热功能解决方法：开启热盖加热功能可能原因：反应结束后低温保存时间过久解决方法：运行结束后，热盖将自动关闭，所以冷凝会自然出现，这不会对实验结果产生影响，将反应管置于离心机上瞬时离心使液滴回到管子底部即可。2.使用的微孔板，反应后反应液有明显蒸发？解决方法：确保使用高质量的微孔板，反应前要严格密封解决方法：确保盖紧热盖，适当提高热盖的温度解决方法：增大反应体积3.使用PCR管，反应后部分PCR管内反应液有明显蒸发？解决方法：确保使用高质量的PCR管或使用我们推荐的PCR管解决方法：在样品台的四角放置四个同样的空PCR管，以保证热盖压在各PCR管上的压力均匀4.为什么在不同型号的PCR仪上扩增出的条带亮度有差异？答：不同PCR仪所用的优化的升降温策略不同，所以当将在一类PCR仪上使用的PCR步骤参数转移到另一类PCR仪上时，要进行试验优化。5.在PCR实验结束后我的样品可以一直放在PCR仪中低温保存吗？答：但我们推荐当程序运行结束后，及时取出样品并停止仪器运行，而不要把仪器当“冰箱”使用。低温保存时温度尽量设定的比较高，如8℃，这可以延长仪器的使用寿命。6.模拟管和样品台控温模式有什么差别？答：如果采用样品台控温模式，当样品台升降温到目标温度时，由于传热延迟，样品管内样品仍等待需要较长后的时间才能达到目标温度，所以当步骤时间不超过30s时，最好用模拟管控温模式；如果要用样品台控温模式，请将步骤时间延长一倍。常见故障下面以PE480PCR仪为例，介绍PCR仪器使用过程中遇到的基本故障以及排除方法。1．打开电源但是仪器不响应这种情况很可能是由于电源线脱落或者没有插紧而致，将电源线重新插入插座即可排除故障。2．屏幕无显示且马达与风扇不启动这种情况很可能是总保险丝被熔断而造成的，更换保险丝即可排除故障，更换准确型号保险丝是所有用电仪器常见的故障排除办法，需要注意的是更换时一定要严格按照使用说明书来进行，或者邀请生产厂家维修工程师来完成。3．插上电源但是屏幕空白或当按下某一按键时屏幕不显示相应的画面这种情况可能是逻辑电路或者电源的保险丝被熔断，也有可能是控制器的缘故。更换保险丝后若不能排除故障，请向维修工程师咨询。4．显示的样品池温度不正确一般的PCR仪附件中都含有温度校准设备，用于定时对各样品孔的温度进行校准或者用于定期检查各样品孔温度的均一性，有的设备将其作为标准配置，购买时不需另行定购，但有些品牌的仪器将其作为选购件，购买时就得选配。PE480PCR仪RTD探测器包括两个探头，黑色探头用于检测样品池的温度，而银色探头不用于检测样品池温度。需要注意：探测器在3min之后方能达到一定精确度，而样品池在lmin之内就可以达到设定值。如果PE480PCR仪显示样品池温度不正确这种情况很可能是温度需要重新校正，通过校正仪器可以通过微处理机对控温装置的控制程序进行重新设定，以便准确有效地进行温度控制，其具体操作步骤如下：1)启动仪器，预热15min。2)按照如下参数，建立一个双温循环文件：Segment#1Temperature＝95℃Segment#lTime＝3：30minutesSegment#2Temperature＝40℃Segment#2Time＝3：30minutesSegment#3Temperature＝0℃Segment#3Time＝0：00minutesAutoSegmentExtension：offCycleCount＝99LinktOshut-off(0)3)用棉签蘸取矿物油涂抹两个样品孔C1、C2用于样品孔保温。将探测器黑色探头插入样品孔C1而银色探头插入样品孔C2，确保探头连线与电子温度计相连。4)压紧探头，将热盖关上，将1磅的砝码置于加热盖上，确保探测器准确定位于样品孔中。5)将温度计最高温度调整到200’C，打开开关。6)运行第2)步中建立的双温循环。A．在第三个循环中，当Segment衅l中的时间为30s时记录样品孔C1的温度，记为T(95)。B．仍在第三个循环中，当Segment#2中的时间为30s时记录样品孔C1的温度，记为T(40)。7)利用下列公式，参考给出的高偏移值(HighOffset)计算样品池维持在95‘C时的温度：样品池在95℃时的平均温度＝T(95)一HighOffset如果样品池的温度与设定温度的差值大于1‘C，该PCR仪则需要重新校正。8)利用下列公式，参考给出的低偏移值(LowOffset)计算样品池维持在40~C时的温度：样品池在40℃时的平均温度＝T(40)一LowOffset如果样品池的温度与设定温度的差值大于1‘C，该PCR仪则需要重新校正。9)从样品池中取出探测器并关闭电子温度计。5．加热或冷却速度缓慢这种情况很可能是控制器或机械故障造成的。需要运行诊断测试并记录加热速率。运行一个4~CSoakfile，或观察是否能在15min内上升到所设温度。如果这两个测试都宣告失败，请向维修工程师咨询。6．开机时出现错误信息这种情况有可能是仪器某一系统启动失败或者电压太低造成的。确保同一电路中没有使用其他电器，不要在已有用电器电路上增设线路。若排除电压太低这一原因，请向维修工程师咨询。