TM-040201纯化水检验方法

检验方法TESTMETHODMaterialName物料名称：纯化水MaterialCodeNo.物料代码：PL002Type类别：液体原料Written/Revisedby起草/修订人：Date日期：ApprovedbyQCQC经理审核：Date日期：ApprovedbyQAQA经理批准：Date日期：Test检验TestMethod检验方法1.性状取样品30ml置于50ml比色管中，目视观察，应为无色的澄清液体；无臭，无味。2.酸碱度2.1仪器及试剂试管甲基红指示液溴麝香草酚蓝指示液2.2检验操作取样品10ml置于试管中，加甲基红指示液2滴，目视观察，应不得显红色；另取样品10ml，加溴麝香草酚蓝指示液5滴，目视观察，应不得显蓝色。3.硝酸盐3.1仪器及试剂试管10%氯化钾溶液0.1%二苯胺硫酸溶液硫酸标准硝酸盐溶液3.2测定步骤取样品5ml置于试管中，于冰浴中冷却，加10%氯化钾溶液0.4ml与0.1%二苯胺硫酸溶液0.1ml，摇匀，缓缓滴加硫酸5ml，摇匀，将试管置于50℃水浴中15分钟，溶液产生的蓝色与标准硝酸盐溶液【称取硝酸钾0.163g，加水溶解并稀释至100ml，摇匀，精密量取1ml，加水稀释成100ml，再精密量取10ml，加水稀释成100ml，摇匀，即得（每1ml相当于1μgNO3）】0.3ml，加无硝酸盐的水4.7ml，用同一方法处理后的颜色比较，不得更深（0.000006%）。4.亚硝酸盐4.1仪器及试剂纳氏比色管对氨基苯磺酰胺盐酸萘乙二胺标准亚硝酸盐溶液4.2测定步骤取样品10ml，置于50ml纳氏比色管中，加入对氨基苯磺酰胺的稀盐酸溶液（1→100）1ml，及盐酸萘乙二胺溶液（0.1→100）1ml，摇匀，产生的粉红色，与标准亚硝酸盐溶液【取亚硝酸钠0.750g（按干燥品计算），加水溶解，稀释至100ml，摇匀，精密量取1ml，加水稀释成100ml，摇匀，再精密量取1ml，加水稀释成50ml，摇匀，即得（每1ml相当于1μgNO2）】0.2ml，加无亚硝酸盐的水9.8ml，用同一方法处理后的颜色比较，不得更深（0.000002%）。5.氨5.1仪器及试剂50ml比色管碱性碘化汞钾试液氯化铵溶液碱性碘化汞钾5.2测定步骤取样品50ml，置于50ml比色管中，加碱性碘化汞钾试液2ml，放置15分钟；如显色，与氯化铵溶液（取氯化铵31.5mg，加无氨水适量使溶解并稀释成1000ml）1.5ml，加无氨水48ml与碱性碘化汞钾试液2ml制成的对照液比较，不得更深（0.00003%）。6.易氧化物检验方法TESTMETHODMaterialName物料名称：纯化水MaterialCodeNo.物料代码：PL002Type类别：液体原料Test检验TestMethod检验方法6.1仪器及试剂烧杯稀硫酸高锰酸钾滴定液（0.02mol/L）6.2测定步骤取样品100ml，置于烧杯中，加稀硫酸10ml，煮沸后，加高锰酸钾滴定液（0.02mol/L）0.10ml，再煮沸10分钟，粉红色不得完全消失。7.不挥发物7.1仪器及试剂分析天平（精度0.0001g）蒸发皿鼓风干燥箱量筒7.2测定步骤取样品100ml，置于105℃恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干，并在105℃干燥至恒重，遗留残渣不得超过1mg。8.重金属8.1仪器及试剂量筒醋酸盐缓冲液硫代乙酰胺试液标准铅溶液8.2检验操作取样品100ml，加水19ml，蒸发至20ml，放冷，加醋酸盐缓冲液（pH3.5）2ml与水适量使成25ml，加硫代乙酰胺试液2ml，摇匀，放置2分钟后，与标准铅溶液1.0ml加水19ml用同一方法处理后，同置白色或镜面背景上，自上向下透视，样品管中显现的颜色与对照品管比较，不得更深（0.00001%）。9.电导率检测依照《中国药典》2015版四部通则0681操作。10.微生物限度10.1仪器及试剂生化培养箱洁净工作台医用冷藏箱电动吸引器无菌三角瓶无菌滤膜无菌滤杯无菌微生物限度过滤支架无菌刻度吸管无菌0.9%氯化钠溶液R2A琼脂培养基培平板10.2检验操作10.2.110.2.210.2.3洁净工作台的使用参照SOP#:QC-2009.00，微生物限度过滤支架的使用参照SOP#:QC-2205.00，电动吸引器的使用参照SOP#:QC-2215.00。若不能立即检测样品，可将样品放置于医用冷藏箱中，保存时间不超过4h。进入洁净的微生物限度室，在洁净工作台上取纯化水10ml于90ml无菌的0.9%氯化钠水溶液（PH7.0）中混匀，作为供试液。将无菌滤杯、完整滤膜安装于无菌的微生物限度支架上，用PH7.0无菌0.9%氯化钠溶液润湿滤膜，取不少于10ml供试液于滤杯中过滤，冲洗PH7.0无菌0.9%氯化钠溶液30ml，冲洗后取出完整滤膜，菌面朝上贴于R2A琼脂培养基上培养，每个样至少制备一张滤膜，滤膜贴于培养皿上时不得有空隙或气泡。用PH7.0无菌0.9%氯化钠溶液代替供试液照上述操作，作为阴性对照。检验方法TESTMETHODMaterialName物料名称：纯化水MaterialCodeNo.物料代码：PL002Type类别：液体原料Test检验TestMethod检验方法10.3培养和计数10.3.110.3.210.3.310.3.4培养皿倒置于30～35℃生化培养箱中培养不少于5天，在培养3天点计培养皿生长的所有菌落数，如菌落极小，不易辨认，菌落计数可以延长至7天，再点计菌落数，必要时用放大镜或低倍显微镜直接观察，或挑取可疑物涂片镜检。菌落蔓延生长成片的培养皿不宜计数，若培养皿上有2个或2个以上菌落重叠，肉眼可辨别时仍以2个或2个以上菌落计数；若培养皿生长有链状或片状、云雾状菌落，菌落间无明显界限时，一条链、片作为一个菌落计，但若链、片上出现性状与链（片）状菌落不同的可辨菌落时，仍应分别计数，若生长蔓延的较大的片状菌落或花斑样菌落，其外缘有若干性状相似的单个菌落，一般不宜作为计数用。菌落生长呈蔓延趋势者，需在24h或48h做初步点计（点计霉菌菌落时轻轻翻转培养皿，勿反复翻转）。每张滤膜上的菌落数不应超过100cfu，若平行的两个培养皿菌落数平均值不小于15，则两个培养皿的菌落数不能相差1倍或以上。10.4菌数报告计算1ml纯化水所含的需氧菌总数，需氧菌总数不得过100cfu，阴性对照应无菌生长；若滤膜上无菌落生长，以＜1cfu/ml报告菌落数。11.控制菌11.1仪器及试剂生化培养箱洁净工作台医用冷藏箱电动吸引器紫外灯无菌微生物限度支架无菌滤膜无菌滤杯无菌刻度吸管无菌培养皿无菌三角瓶无菌胰酪大豆胨液体培养基无菌0.9%氯化钠溶液无菌麦康凯液体培养基无菌麦康凯琼脂培养基无菌MUG培养基无菌蛋白胨水培养基无菌磷酸盐葡萄糖胨水培养基无菌枸橼酸盐培养基靛基质试液甲基红试液α-萘酚试液40%氢氧化钾试液11.2增菌培养取纯化水10ml于90ml无菌的0.9%氯化钠水溶液（PH7.0）中混匀，作为供试液。取胰酪大豆胨液体培养基3份，每份各100ml。第一份加入10ml供试液（相当于样品1ml）混匀，第二份加入与供试液等量的无菌的0.9%氯化钠溶液作为阴性对照，第三份用10ml菌量为10～100cfu大肠埃细菌于100ml胰酪大豆胨液体培养基中作为阳性对照。30～35℃培养18～24小时。阴性对照应无菌生长，阳性对照应有菌生长，培养基混浊，有沉淀。11.3分离培养取上述培养物1ml接种至100ml麦康凯液体培养基中，42～44℃培养24～48小时。同法阴性对照、阳性对照，阴性对照应无菌生长，培养基澄清，呈紫色；阳性对照应有菌生长，培养基混浊，呈黄色，有沉淀。取麦康凯液体培养物划线接种于麦康凯琼脂培养基平板上，30～35℃培养18～72小时。同法阴性对照，阳性对照；阴性对照应无菌生长，阳性对照麦康凯琼脂培养基平板上的大肠埃希菌菌落应呈鲜桃红色或微红色，菌落中心呈深桃红色，圆形、扁平，边缘整齐，表面光滑，湿润。检验方法TESTMETHODMaterialName物料名称：纯化水MaterialCodeNo.物料代码：PL002Type类别：液体原料Test检验TestMethod检验方法11.4革兰氏染色以接种环蘸取无菌的0.9%氯化钠溶液于洁净无划痕的载玻片上，取上述疑似菌落的麦康凯琼脂培养基平板新鲜培养物少许，制成均匀涂片，自然或微温干燥，再通过火焰2~3次固定。在载玻片的菌斑上滴加结晶紫染液，染色1min，水洗。滴加碘液，媒染1min，水洗，以滤纸吸干余水。滴加95%乙醇，严格控制时间脱色20~30s，水洗。滴加沙黄染液（复红染液），复染1min，待干后，镜检。镜检结果：革兰氏阳性菌呈蓝紫色，革兰氏阴性菌呈红色；大肠埃希菌形态：大肠埃希菌为革兰氏阴性短杆菌或球杆菌，亦有杆菌状；1.1～1.5×2.0～6.0μm，单独或成对，有鞭毛，能移动。11.5分离纯化若麦康凯琼脂培养基平板上有菌落生长，分别挑取可疑菌落（革兰氏阴性杆菌）3个以上菌落于100ml麦康凯液体培养基中，42～44℃培养24～48小时；如果麦康凯琼脂培养基平板上无单个可疑菌落，但有可疑菌团（革兰氏阴性杆菌），则应蘸取可疑菌团培养物少许，同上述操作。用无菌的0.9%氯化钠溶液作为阴性对照，同法操作，阴性对照应无菌生长;挑取上述阳性菌落于100ml麦康凯液体培养基中作为阳性对照，同法操作，阳性对照应正常生长（同“11.3分离培养”）。取麦康凯液体培养物分别划线接种于麦康凯琼脂培养基平板上，30～35℃培养18～72小时；阴性对照、阳性对照同法操作，阴性对照应无菌生长，阳性对照麦康凯琼脂培养基平板上的大肠埃希菌菌落呈鲜桃红色或微红色，菌落中心呈深桃红色，圆形、扁平，边缘整齐，表面光滑，湿润。11.6MUG与靛基质取上述麦康凯液体培养物0.2ml，接种至一支含5mlMUG培养基的试管内，温度30～35℃培养，于5hr和24hr时在30～356nm紫外灯光下观察，同时用未接种的MUG培养基作为本底对照。在紫外光下若管内培养物呈蓝白色荧光，则为MUG阳性；不呈现荧光，则为MUG阴性。观察后，沿着培养管的管壁加入数滴靛基质试液，若液面呈玫瑰红色，则为靛基质阳性；若呈试剂本色，则为靛基质阴性。本底对照的MUG和靛基质试验应为阴性。样品培养物中，任何一支MUG培养基和靛基质呈阳性，则此样品MUG和靛基质试验为阳性。若MUG阴性靛基质阳性或MUG阳性靛基质阴性、麦康凯琼脂培养基平板上有可疑菌落（革兰氏阴性杆菌）时，进行IMViC试验。11.7IMViC试验11.7.1靛基质试验（I）取上述麦康凯琼脂培养基平板上培养物，接种于蛋白胨水培养基中，温度30～35℃培养24~48hr，沿管壁加入靛基质试液数滴，轻轻摇动试管，液面呈玫瑰红色为阳性，呈试剂本色为阴性。98%的大肠埃希菌靛基质试验为阳性，一般24hr即可出现阳性结果，以无菌操作先从管中取出1ml或2ml培养液进行检查，如靛基质阴性，余下的蛋白胨水培养物再培养24hr，做靛基质试验。其中一份样品检查呈阳性，即样品靛基质试验呈阳性。11.7.2甲基红试验（M）取上述麦康凯琼脂培养基平板培养物，接种于磷酸盐葡萄糖胨水培养基中，温度30～35℃培养48±2hr，于培养液中加入甲基红指示液2~3滴（约每1ml培养液加指示液1滴），轻微摇动，立即观察，呈鲜红色或橘红色为阳性，呈黄色为阴性。其中一份样品检查呈阳性，即样品甲基红试验呈阳性。检验方法TESTMETHODMaterialName物料名称：纯化水MaterialCodeNo.物料代码：PL002Type类别：液体原料Test检验TestMethod检验方法11.7.311.7.4乙酰甲基甲醇生产试验（V-P）取上述麦康凯琼脂培养基平板培养物，接种于磷酸盐葡萄糖胨水培养基中，温度30～35℃培养48±2hr，于2ml培养液中加入α-萘酚乙醇试液1ml，混匀，再加40%氢氧化钾试液0.4ml，充分振摇，在4hr（通常在30min时）内出现红色判为阳性，无红色判为阴性。其中一份样品检查呈阳性，即样品乙酰甲