实验三牛肉膏蛋白胨培养基的制备、微生物的分离与纯化

实验五细菌生理生化反应、免疫标本的观察微生物学与细胞生物学教研室实验目的掌握细菌生理生化反应原理与方法熟悉细菌的荚膜、芽孢、鞭毛等特殊结构了解淋巴细胞转化、E-玫瑰花环试验原理实验原理1.糖发酵试验不同微生物发酵单糖的能力各异，产生的分解产物也不同，可以作为细菌分类鉴定的手段。大肠埃希菌/产气肠杆菌葡萄糖CH3COCOOHHCOOH甲酸解氢酶H2+CO2伤寒沙门菌葡萄糖CH3COCOOHHCOOH指示剂：溴麝香草酚蓝pH6.3(黄)；6.3pH7.2(绿)；pH7.2(蓝)pH6.3pH7.2不同微生物所含酶系统不同，某些细菌含有色氨酸酶，能够分解培养基内蛋白胨中的色氨酸。大肠埃希菌色氨酸产气肠杆菌色氨酸酶+H2OCH3COCOOH吲哚+检测：吲哚+对二甲基氨基苯甲醛玫瑰吲哚+H2O玫瑰红色吲哚试验阳性。实验原理2.吲哚试验（I）吲哚阴性。检测不同细菌分解葡萄糖产酸的能力。大肠埃希菌葡萄糖产气肠杆菌指示剂：甲酸乙酸乳酸琥珀酸等分解甲酸、乙醇和乙酰甲基乙醇葡萄糖分解甲基红pH4.5(红)；pH5.4(橘黄色)。实验原理3.甲基红试验（M）pH4.5pH5.4某些细菌在糖代谢过程中，经糖酵解途径产生丙酮酸。因不同细菌所含酶不同，进一步对丙酮酸的代谢也不同。大肠埃希菌产气肠杆菌2CH3COCOOHCH3COCHOHCH3+2CO2O2+KOHCH3COCHOHCH3CH3COCOCH3CH3COCOCH3+胍基红色化合物+H2OVP试验阴性。实验原理4.VP试验（V）肠杆菌科各种细菌利用柠檬酸盐的能力不同，有的菌可利用柠檬酸钠作为碳源，有的则不能。大肠埃希菌产气肠杆菌大肠埃希菌不能利用柠檬酸盐，故不能在以柠檬酸盐为唯一碳源的培养基上生长。柠檬酸盐利用试验阴性。产气肠杆菌能在以柠檬酸盐为唯一碳源的培养基上生长，并分解柠檬酸盐产生CO2，再生成碳酸盐，使培养基由中性变为碱性，培养基中的指示剂BTB由绿色变为蓝色。实验原理5.枸橼酸盐利用试验（C）实验材料培养基：生化培养基菌种：大肠埃细菌、产气肠杆菌试剂：柯氏试剂、甲基红、40%KOH、α-6%萘酚①单糖发酵试验直接观察②吲哚试验加入5滴柯氏试剂，振荡，静置后观察③甲基红试验加入5滴甲基红，振荡，静置后观察④伏普试验加入0.4mL40%KOH,开盖振荡，再加入α-6%萘酚⑤柠檬酸盐利用试验直接观察1.细菌生理生化反应结果观察：实验步骤2.细菌特殊结构观察：实验步骤①芽孢破伤风梭菌2.细菌特殊结构观察：实验步骤②荚膜肺炎链球菌2.细菌特殊结构观察：实验步骤③鞭毛变形杆菌3.免疫标本观察：实验步骤①淋巴细胞转化观察已转化3.免疫标本观察：实验步骤②E-玫瑰花环原始记录列表描述细菌生理生化反应现象实验结果1.细菌生理生化反应结果+IMVC大肠埃希菌产气肠杆菌++++---菌名+-糖发酵实验结果2.细菌特殊结构绘图3.免疫标本绘图注意事项1.VP实验一定要注意开盖振荡！且反应时间较长。