HPLC-ELSD法测定玉屏风颗粒中甘露醇的含量

HPLC-ELSD法测定玉屏风颗粒中甘露醇的含量摘要：目的：建立用液相色谱法联用蒸发光散射检测器（hplc-elsd）测定玉屏风颗粒中辅料甘露醇的含量。方法：采用prevailcarbohydratees柱（φ4.6mm×250mm，5μm），流动相为乙腈—水（75∶25），流速1.0mlmin-1，蒸发光检测器。结果：线性范围1.50976～11.3232μg，r＝0.9999；平均回收率为99.3％，rsd＝1.44％（n＝6）。结论：该法快速、准确、可靠；可作为玉屏风颗粒辅料甘露醇的检查。关键词：液相色谱法联用蒸发光散射检测器；玉屏风颗粒；辅料；甘露醇；含量中图分类号：r284文献标识码：a文章编号：1007-2349（2011）12-0059-02玉屏风颗粒收载于《中国药典》2010年版一部［1］，由黄芪、防风及炒白术3味药组成，具有益气，固表，止汗之功效。主要用于表虚不固，自汗恶风，面色晄白，或体虚易感风邪者。玉屏风颗粒为国家中药保护品种，全国独家生产，生产厂家为广东环球制药股份有限公司。甘露醇是玉屏风颗粒中的稀释剂，较传统稀释剂有易溶解等优点，但具有对人体肠道的清理和轻微的脱水作用。为考察其辅料的投料情况，此次试验建立了hplc-elsd法测定玉屏风颗粒中辅料甘露醇的含量，为辅料的添加及控制提供了科学依据。1仪器和试药agilent1200高效液相色谱仪，带四元泵；瓦里安300蒸发光散射检测器；自动进样器；在线真空脱气机；智能化柱温箱及hp化学工作站；乙腈为hplc级，水为超纯水。甘露醇对照品（中国药品生物制品检定所，含量测定用，批号：111522-200607）。26批玉屏风颗粒样品均由广东环球制药股份有限公司提供。2色谱条件色谱柱：prevailcarbohydratees柱（φ4.6mm×250mm，5μm）；流动相：乙腈—水（75∶25）；流速：1.0mlmin-1；柱温：30℃；蒸发光检测器，雾化器温度：90℃；漂移管温度：60℃；气体流速：2.0lmin-1。3溶液的配制3.1对照品溶液的配制精密称取甘露醇对照品适量，加甲醇制成每1ml含甘露醇0.75mg的溶液，即得。3.2供试品溶液的配制取本品内容物，研细，取约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入水50ml，称定重量，微热使溶解，放冷，再称定重量，用水补足减失的重量，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液2ml，于10ml量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，滤过，滤液过0.45um微孔滤膜，取续滤液，即得。3.3阴性样品溶液的配制取不含辅料的样品制剂，按上述供试品溶液制备方法制备，即得阴性样品溶液。4方法与结果4.1系统适用性分别精密吸取对照品溶液5、10μl，供试品溶液10μl，阴性样品溶液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图，测定峰面积，以外标两点法对数方程计算，即得。在此色谱条件下，甘露醇色谱峰理论塔板数应不低于10000，且阴性样品溶液无干扰。结果见图1。图1玉屏风颗粒液相色谱图a.对照品;b.样品;c.阴性样品4.2线性关系精密称取甘露醇对照品适量，置量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，摇匀，再以水稀释至一系列浓度的对照品溶液，按上述色谱条件分别进样10μl，记录色谱图，以峰面积的对数（y）对进样浓度的对数（x）作回归统计，得回归方程为y=1.3820x+6.0413，r=0.9999（n=6），线性范围为1.50976μg～11.3232μg。4.3精密度试验取“3.1”项下的对照品溶液，按上述色谱条件，连续进样6次，测得rsd为0.05％。表明仪器精密度良好。4.4稳定性试验取同一供试品溶液，分别于0、4、9、14、19、24h进样测定并计算峰面积的对数值。测得rsd为0.24％。表明供试品溶液在制备后24h内基本稳定。4.5重复性试验取同一样品，平行制备5份供试品溶液，按上述色谱条件测定并计算。测得rsd为0.42％。表明方法的重现性良好。4.6加样回收率试验精密称取已知含量的同一样品0.5g，共6份，加入一定量的甘露醇对照品溶液，挥干溶液，按“2.2”项下供试品溶液制备成加样回收率供试液，并依法测定，结果见表1。1.44137.01158.72293.3398.49137.53158.72293.4698.24138.41158.72295.2398.804.7含量测定取不同批次的玉屏风颗粒样品，按供试品溶液的配制项下制备供试品溶液，每个批次的样品平行制备2份，测定玉屏风颗粒中辅料甘露醇的含量，结果见表2。5讨论5.1色谱柱的选择甘露醇为极性化合物，在常规的c18柱上几乎无保留，无法测定。氨基柱为中等极性柱，其键合相的氨基能与甘露醇选择性作用，达到分离检测的结果。故选择氨基柱为固定相，乙腈—水（75∶25）为流动相时，甘露醇得到较好的分离及较高的理论塔板数。5.2提取方法的选择根据甘露醇极易溶于水，略溶于乙醇，不溶于乙醚等物理特性，采用水提醇沉法去除杂质，通过对乙腈浓度，溶剂用量和时间的考察，最终确定正文所述的最佳提取工艺。5.3检测器的选择甘露醇本身没有紫外吸收，故不能选择紫外检测器，大多数文献采用碘量法、薄层色谱扫描法［2］以及高效液相示差折光检测器［3］，其中碘量法操作复杂，专属性不高，示差折光检测器灵敏度低，且对温度和压力的变化较敏感；而蒸发光散射检测器对无紫外吸收或紫外末端吸收的样品具有较强的优势，专属性好，灵敏度高，故此次试验采用蒸发光散射检测器进行玉屏风颗粒中辅料甘露醇的含量测定。5.4对26批玉屏风颗粒辅料甘露醇的测定结果，含量在26.3%～27.8%之间，可以看出辅料甘露醇的投料较稳定，可靠。参考文献：［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典［m］.一部.北京：化学工业出版社，2010：616.［2］汪宝琪，庞志功.西藏冬虫夏草中d-甘露醇的薄层扫描分析［j］.中草药，1995，26（4）：189~191.