INS操作规程

胰岛素诊断试剂盒时间分辨免疫荧光分析法标准操作规程医院文件编号编写者审核者批准者医院：科：室：胰岛素诊断试剂盒时间分辨免疫荧光分析法标准操作规程版本：执行日期：共3页第1页1.原理本试剂盒采用双抗体夹心一步法。抗人TSH单抗包被于96孔荧免板，校准品或样品中的TSH与包被单抗及铕离子(Eu3+)标记的单抗于微孔内表面发生免疫反应，通过洗涤分离微孔表面的夹心免疫复合物与游离的标记单抗。微孔表面免疫复合物中的Eu3+被荧光增强液解离后形成稳定的荧光配合物，荧光强度与校准品或样品中的TSH浓度呈正比例，通过校准曲线可得出样品中TSH浓度。2.样本处理穿刺取血，离心后允许有凝结，用肝素作抗凝结的血浆也可，不要采用溶血的血清或血浆样本。2～8℃条件下样本可保存5天，–20℃可保存更长时间。样本避免反复冻融。不必要的情况下不要将样本放置在室温。室温放置48小时以上的样本不能给出可靠的结果。3.试剂本科室使用苏州新波生物技术有限公司胰岛素时间分辨荧光免疫法诊断试剂盒，试剂盒主要组分如下：1胰岛素参考标准品1套1.0ml/瓶冻干品（复融后储存于2～80C，一个月内使用）2铕标记物1瓶1.0ml冻干品3实验缓冲液1瓶30ml4浓缩洗液1瓶40ml使用前用去离子水作1：25倍稀释5荧光增强液1瓶30ml6微孔反应板1块12孔×87吸头20支8说明书1份9自封袋1个10干燥剂1包医院：科：室胰岛素诊断试剂盒时间分辨免疫荧光分析法标准操作规程版本：执行日期：共3页第2页4.仪器（用户自备）4.1时间分辨荧光分析仪；4.2微孔洗涤机；4.3微孔振荡器；5.操作步骤5.1.试剂的准备（1）使用前将浓缩洗液用纯化水按1：25（体积比）稀释，混匀备用。（2）参考标准品：在参考标准品中加入1.0ml去离子水，复融至少20分钟，混匀备用。（3）铕标记物：在铕标记物冻干品中加入1.0ml去离子水，复融至少20分钟，混匀备用。使用前一小时内，用实验缓冲液按1：50稀释铕标记物（详见操作流程图）。5.2将实验缓冲液、标准品、待测样品和所需数量的微孔反应条平衡至室温（20～25℃）。5.3吸取50μl标准品和待测样品，按顺序加入微孔。5.4然后在各微孔内加入200μl已稀释的铕标记溶液，在室温下于慢档振摇120分钟。5.5洗板6次，将板条在洁净的吸水纸上拍干。5.6在各微孔内加入200μl的增强液，于慢档振摇5分钟。5.7选择相应程序检测荧光。6.计算结果测定：用新波公司ANYTEST2000时间分辨荧光测定仪或WALLAC公司时间分辨荧光测定仪（1230、1234、1420,等）测量7．临床意义胰岛素是人体内控制糖代谢的主要激素。1.了解残留胰岛β细胞的功能，特别是1型糖尿病的诊断。2.用于区分1型和2型糖尿病。对于2型糖尿病的治疗有指导意义。3.用于胰岛素瘤的诊断。医院：科：室胰岛素诊断试剂盒时间分辨荧光免疫分析法标准操作规程版本：执行日期：共3页第3页8．参考值用本试剂盒对70份正常人血清进行检测，胰岛素正常范围为1.3～17.5μU/ml。建议各实验室建立自己的正常值范围。9．注意事项9.1理解说明书，不要混用不同批号的试剂，不要使用过期的试剂。9.2尽量建立一个干净无尘的实验室环境，对实验的成功起到决定性作用。(因为尘土中含有很多金属离子，会影响实验结果)。9.3试剂盒与被测样本使用前必须达到室温。9.4振荡器按照《2510变频振荡器标准操作规程》设定需要的振荡频率。9.5微孔洗涤机按照《Egate2310全自动微孔洗涤机标准操作规程》在每天使用前应进行校正注液量和残自量，注意管道是否畅通。洗涤时，确认每孔必须是干的，洗涤液都注满微孔。洗涤后，每个孔必须是干的，如果仍有水则需拍干。9.6吸取增强液和铕标记物时，请使用干净的吸头，避免尘土等不必要的污染。加增强液时探头应悬空，避免碰到小孔边缘或其中试剂。9.7使用医用蒸馏水或去离子水配制洗液。9.8宜用干净的一次性容器配制铕标记物，应避免铕标记稀释液进入标记物原液中。9.9封片不能重复使用。9.10如需稀释标本，请用小牛血清稀释。9.11所有的样本和本试剂盒应作为潜在的传染原看待，按传染病实验室检查规程操作。9.12如对实验结果有疑问，应重复试验。9.13为保证实验的准确性，处理后得到的血样应不含纤维蛋白、红细胞、血脂等，并要保证血样吸取的量的准确性，否则容易引起测量值的差异。9.14本试剂盒应置2—8℃保存，有效期参考瓶上所贴标签。