LeicaTCSSP5激光共聚焦显微镜系统软件操作手册

LeicaTCSSP5激光共聚焦显微镜系统软件操作手册打开软件后，默认在Acquire面板的acquisition中，acquisitionmode为xyz，Format扫描像素为512x512，averagelineandframeaverage为1。根据需要选择扫描模式，常用的有以下几种：xyz层面扫描；xyt时间扫描；xyλ光谱扫描。扫描像素一般选1024×1024设置平均一般选择lineaverage2-3次保存图像方法注意：一般在扫描结束后统一保存，为免数据丢失，可以从获取第一张图片后就要开始保存，以后每获取一张图片保存一次。1、保存Leica.lif文件进入Acquire面板的Experiment中，右键点击Experiment，从弹出菜单中选中“SaveExperiment“Experiment”as…”，保存lif文件到自己的文件夹中并取名。2、导出lif文件右键点击Experiment，从弹出菜单中选中“ExportExperimentastiff”，选择目标文件夹，选中rawdata导出单通道图片。如需导出overlay图片，则再次右键点击Experiment，从弹出菜单中选中“ExportExperimentastiff”，选择目标文件夹，选中overlay导出多通道合成图片。一、获取单一荧光图像1、在beampathsetting中的load/savesinglesetting中选择所标记荧光的光路设置方法。2、点击live开始连续扫描，优化图像质量。调节zposition选择需扫描层面，调节gain和offset使图像亮度和背景到达到合适的状态，Zoom调节电子放大倍率。点击stop，停止扫描。3、选择像素1024×10244、点击captureimage获取图像。5、保存图像。二、获取多荧光图像1、点击seq，出现sequentialscan面板。2、在sequentialscan面板中点击scan1，在beampathsetting中选择所标记的一种荧光的光路设置方法。点击live开始连续扫描，优化图像质量。调节zposition选择需扫描层面，调节gain和offset使图像亮度和背景到达到合适的状态，Zoom调节电子放大倍率。点击stop，停止扫描。在sequentialscan面板中点击“+”，点击scan2，在beampathsetting中选择所标记的另一种荧光的光路设置方法，点击live开始连续扫描，优化图像质量。标记了几种荧光就添加几种方法。选择“betweenframes”模式。3、选择像素1024×1024，点击Start获取图像。4、保存图像。三、获取多层荧光图像1、在beampathsetting中选择所标记荧光的光路设置方法。2、打开Z-stack面板。3、点击live开始连续扫描，优化图像质量。调节zposition选择需扫描层面，设置begin和end，调节gain和offset使图像亮度和背景到达到合适的状态，Zoom调节电子放大倍率。点击stop，停止扫描。在Z-stack面板中确定Nr.Ofsteps（在选择层面中确定需扫描张数）4、点击start获取图像。5、如需将扫描图像叠加，选择Process面板，选择visualization3Dprojection，点击apply，即可生成叠加图像。6、保存图像。四、获取时间序列图像1、Acquisitionmode改为xyt。2、根据需要拍摄图像的时间间隔和图像质量调整fomat和lineaverage值。3、在beampathsetting中的load/savesinglesetting中选择所标记荧光的光路设置方法。如是多种荧光则选择点击seq，设置序列扫描。4、点击live开始连续扫描，优化图像质量。调节zposition选择需扫描层面，调节gain和offset使图像亮度和背景到达到合适的状态，Zoom调节电子放大倍率。点击stop，停止扫描。5、点击start获取图像。6、保存图像。