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1普通生物学实验讲义环境科学与工程学院中国海洋大学2普通生物学实验讲义实验一普通光学显微镜的使用与生物绘图......................3实验二生物细胞的显微结构..............................................8实验三植物细胞的质壁分离与质壁分离复原................13实验四原生动物的显微观察............................................15实验五叶绿体色素的提取、分离及含量测定................21实验六洋葱根尖有丝分裂染色体标本制备及观察........25实验七鱼的形态及解剖结构............................................27实验八ABO血型检测......................................................33实验九大型海藻的分类与识别........................................353实验一普通光学显微镜的使用与生物绘图一、实验目的1.了解普通光学显微镜的基本构造,能规范和较熟练地使用;2.学习细胞临时装片的制作方法和生物绘图的方法。二、实验材料微藻细胞培养液三、实验用具显微镜、载玻片、盖玻片、胶头滴管四、实验内容1、普通光学显微镜的基本构造、使用方法及保护显微镜的基本结构显微镜构造很复杂,种类很多,但基本结构是由机械和光学两大部分构成,现分述如下:1.1机械部分它是为光学部分服务的部件,包括以下六部分:(1)镜座:显微镜昀下面呈马蹄形或圆形的部分,起稳定和支持显微镜作用。(2)镜柱:直立于镜座上的短柱,支持显微镜的其它部分。(3)镜臂:弯曲成马蹄形的部分,便于手持,下端与镜柱相连接的地方有一个倾斜关节,可使镜臂倾斜,便于观察。(4)载物台:自镜臂下端向前伸出,放置标本用的平台,其中央有一个园孔,叫通光孔。台上有一移动器(老式的左右各有一个压片夹),用以固定和移动标本。(5)镜筒:和镜臂上方连接的园筒部分。有的显微镜镜筒内有一抽管,可适当抽长,一般长度是160-170mm。镜筒上端装有目镜,下端有一个可转动的园盘,叫物镜转换器(或叫物镜旋转盘),其上装有2-4个物镜。(6)调焦器(调节器或调节螺旋):为镜壁上两种可转动的螺旋,一大一小,能使镜筒上下移动,调节焦距。大的叫粗调焦器,升降镜筒较快,用于低倍镜对焦;小的叫细调焦器,4升降镜筒较慢。1.2光学部分由接目镜、接物镜、反光镜、聚光器等四部件组成。(1)接目镜:装于镜筒上方,由两组透镜构成,接目镜的作用是把接物镜所形成的倒立实像再放大成为一个虚像。接目镜上刻有5×,8×,10×,15×,25×等符号,表示放大倍数。我们所观察到的标本的物像,其放大倍数是接物镜和接目镜放大倍数的乘积。如接物镜是10×,接目镜是8×,其物像的放大倍数是10×8=80倍。可在接目镜内两个透镜间的光栏上可装一根剪短的毛发,做为指针,用以指示要观察的材料。(2)接物镜:装在镜筒下端物镜转换器的孔中,一般的显微镜有2-4个接物镜镜头,每个镜头都是由一系列的复式透镜组成的,其上也有放大倍数记号,有4×,10×,40×及100×。4×及10×接物镜是低倍镜,40×是高倍镜,100×是油镜。低倍镜常用于搜索观察对象及观察标本全貌,高倍镜则用于观察标本某部分或较细微的结构,油镜则常用于观察微生物或动植物更细微的结构。(3)聚光器(集光器):位于载物台(通光孔)下方,由两块或数块镜组成,它能将反光镜反射来的光线集中以射入接物镜和接目镜,有的聚光器可升降,便于调光,集光器下有一可伸缩的园形光圈,叫虹彩光圈,可调集光器口径的大小和照射面,以调节光线强弱(有的显微镜只有遮光极而无集光器)。光线过强时,可缩小虹彩光圈。(4)反光镜:是显微镜观察时获得光源的装置,位于显微镜镜座中央,一面为平面镜,一面为凹面镜。转动反光镜,可使外面光线通过集光器照射到标本上。使用时,光线强用平面镜,光线弱用凹面镜。显微镜的使用方法(1)取好光源(调光)用显微镜观察标本前,先要取好光源。首先把显微镜放在自己左肩一侧台前,镜座距桌边约两寸,镜臂朝自己,镜筒朝外。用手转动物镜转换器,使低倍接物镜和镜筒成一直线,正对通光孔。用左眼从接目镜向下注视,同时用手拨动反光镜,让镜面对着光源,当看到圆形镜界(视野)呈现光亮而均刀的时候即调好光了,如视野阴暗不明,则需再调节反光镜和集光器,直到视野明亮均刀为止。若为自带电源,则在使用前打开电源开关,逐步调节光亮度旋钮,直至亮度合适为止。(2)观察5将要观察的玻片标本放在载物台通光孔的中央,玻片标本两端用压片夹夹紧,再用手沿顺时针方向旋转粗调节器,把镜筒徐徐降到物镜头差不多接近玻片标本(约半厘米)为止(从侧面观察下降镜筒)。然后左眼观察,边观察边用调节器将镜筒徐徐上升(逆时针方向旋转粗调节器)直到发现物象,观察清晰为止。如果观察部分不在视野中心,可移动玻片标本到视野中心,再上下转动粗调节器至物象清晰为止。如果要观察视野内某部分更细微的结构,则需要用高倍镜观察,首先要把观察的部分移至视野中心,然后移动物镜转换器换上高倍镜(使正对通光孔)(使用镜头转化器,不要直接扳动镜头),再用粗调节器徐徐将镜筒距离调整,至视野中出现物象,然后用细调节器调节到看清物象止。如光线太弱,可放大虹彩光圈的口径或调节光亮度旋钮。高倍镜下观察的标本,如果放大倍数还不够,可用油镜,换用前,同样要先在高倍镜下观察,把要观察的部分放在视野的正中央。观察到清晰的物象之后,在盖玻片上表面的中央滴一小滴香柏油,再换上油镜头,使油镜头与香柏油接触,然后由目镜观察。一边观察,一边用手稍移动细调节器(切忌用粗调节器)以看清物象。用油镜观察完毕后,转开油镜,必须用擦镜纸点二甲苯擦去镜头上的香柏油。下降镜筒,直立反光镜,使光学部件的光线不再对在一条直线上。应当了解的是,在显微镜中观察到的物象是倒象,因此移动玻片时,应注意移动方向。如果要使物象左移动就要向右移动玻片,同样要使物象向前移动,就要向后移动玻片。观察结束后,降下载物台,取掉载玻片,光源调至昀弱后关闭电源(为防止下次打开电源时因电流过大烧毁照明灯泡,请在关闭电源前一定将光源亮度调至昀暗)。显微镜的保养(1)取送显微镜时,必须右手握住镜臂,左手托住镜座,轻拿轻放。(2)显微镜的使用,一定要按实验指导写的方法和步骤,认真仔细去做,不然,容易损坏标本和镜头,又达不到看清物象的目的。(3)观察标本时,一定要先用低倍镜观察,再用高倍镜,低倍镜能看清,就不必用高倍镜。(4)不能用硬纸擦透镜,必须用干净的擦镜纸或细软纱布,朝一个方向擦试透镜,以免损坏镜头。(5)不要随便转动粗细调节器,以免机器损伤,调节失灵。(6)载物台要保持清洁、干净,不要让水或其他液体(酸、碱或其他化学药品等)流到台上,6以免生锈或腐蚀。(7)避免阳光直接照射,要防潮湿、防灰尘,经常保持镜体和镜体箱的干燥和清洁。显微镜的类型(1)光学显微镜主要有普通光学显微镜、体视显微镜、暗视野显微镜、倒置显微镜、荧光显微镜、相差显微镜等,另外按目镜筒数可分单筒(目)和双筒显微镜,按使用人数可分单人、双人和多人用显微镜等。(2)电子显微镜主要有扫描电子显微镜、透射电子显微镜、扫描隧道电子显微镜等。2.微藻细胞临时装片制作及形态、结构的观察擦净载玻片和盖玻片,即将浸洗过的玻片用纱布擦干,擦盖玻片时,应十分小心。在载玻片中央加一滴藻细胞培养液,将盖玻片压好制成标本片(盖玻片一端要先接触载玻片,然后将另一端轻轻放下,不要产生气泡),将标本片置于镜台上,先练习低倍镜的使用,然后再换高倍镜观察,绘出藻细胞形态图。生物绘图的要求(1)具有高度的科学性,不得有科学性错误。形态结构要准确,比例要正确,要求真实感,立体感,精美而美观。(2)图面要力求整洁,铅笔要保持尖锐,尽量少用橡皮。(3)绘图大小要适宜,位置略偏左,右边留着注图。(4)绘图的线条要光滑、刀称,点点要大小一致。(5)绘图要完善,字体用正楷,大小要均刀,不能潦草。注图线用直尺画出,间隔要均刀,且一般多向右边引出,图注部分接近时可用折线,但注图线之间不能交叉,图注要尽量排列整齐。(6)绘图完成后在绘图纸上方要写明实验名称、班级、姓名、时间,在图的下方注明图名及放大倍数。生物绘图的方法7生物绘图的方法有多种,昀常见的是点点衬阴法和线条衬阴法。点点衬阴法即将图形画出后,用铅笔点出圆点,以表示明暗和深浅,给予立体感。在暗处点要密,明处要疏,但要求点要均刀,点点要从明处点起,一行行交互着点,物体上的斑纹描出再点点衬阴。线条衬阴法又称涂抹阴影法,是依靠线条的疏密来表示阴暗和深浅。点点衬阴法要求不能用涂抹阴影的方法以代替点点。生物绘图的步骤(1)绘图前认真的观察标本,搞清实物标本的结构特点,切忌抄书或平空想象。(2)用HB铅笔轻轻将图轮廓画出,作为草图要掌握好比例和位置。(3)在草图的基础上绘详图,此时要用2H和3H铅笔,线条要流畅,点要刀称,点线不要重复描绘。(4)按注图要求绘图,写上图名及班级、姓名、放大倍数等。五、实验要求按实验目的的要求完成实验内容和实验报告,报告要求:1.写出使用普通光学显微镜的注意事项。2.按生物绘图的要求准确绘出藻细胞形态并标注其基本结构。8实验二生物细胞的显微结构一、实验目的(1)了解植物细胞的基本构造及装片观察的操作方法。(2)了解动物细胞及基本组织的结构和功能。(3)进一步掌握显微镜的使用方法。二、实验材料洋葱鳞叶、白菜叶、马铃薯、胡萝卜三、实验用具显微镜、刀片、摄子、载玻片、盖玻片、培养皿、滴管、碘液。牙签、0.1%的亚甲基蓝、0.7%的NaCl溶液、蒸馏水、吸水纸四、实验内容1、植物细胞的显微结构1.1观察洋葱鳞叶的表皮细胞首先在干净的载玻片中央加一滴蒸馏水,然后取洋葱鳞茎剥去外皮较老的鳞叶片,用摄子撕去内部鳞片叶表皮一小块放在载玻片水滴中,将其展平后,再用摄子夹取一干净的盖玻片,将其一边放于载玻片上,和水面接触,另一边慢慢放下,以免产生气泡防碍观察。如水不足,沿盖玻片边缘滴加,如边缘水分过多,可用纱布拭去,这样做成临时装片后,就可放置显微镜下观察。先用低倍镜观察,再选择一个清晰的细胞用高倍镜仔细观察细胞形状及各部分构造,可见洋葱鳞片叶表皮细胞多数呈长方形,外为细胞壁,内有无色细胞质和细胞核,圆形的细胞核内可见到1-2个更小的折光较强的核仁。由于洋葱表皮细胞较为透明,故必须缩小虹彩光圈,避免过强光线,否则反而看不清。然后,从盖玻片一边加入1-2滴碘液,用吸水纸从盖玻片另一边吸去蒸馏水,使碘液透9入材料中,这时细胞核染成黄褐色,细胞质染成浅黄色,液泡颜色较淡。1.2质体(1)观察白菜叶肉细胞中的叶绿体取载玻片一块,在其中滴入清水,然后用摄子撕取白菜叶带叶肉的下表皮,放在载玻片的水滴中,盖上盖玻片,在显微镜下观察,可看见在叶的细胞中有许多圆形绿色颗粒--叶绿体。在表皮细胞中一般不含叶绿体,但在组成气孔的两个半圆的保卫细胞中可见圆形叶绿体。(2)观察胡萝卜细胞的有色体在培养皿中盛好水,将胡萝卜(储藏根)切成2-3cm长,用左手的食指和大姆指夹持,中指在下顶住,使胡萝卜顶部置于指上4-6mm,右手拿刀片,刀口朝内保持水平方向,自左前方向右后方拉动刀片,胡萝卜片就被切下。为了切得厚薄均刀,刀片与材料断面要平行,左手保持平稳不动,右手拉刀迅速均刀,材料与刀片保持湿润。切好的切片,立即放入培养皿的水中。选择昀薄的切片,做成水装片,在显微镜下观察,有色体为红橙色,不规则的颗粒或棒状。1.3细胞后含物(1)马铃薯的淀粉粒取切开的马铃薯一小块,用镊子镊取少许白色混浊的浆液,置载玻片水滴中,加上盖玻片,用显微镜观察。淀粉粒呈卵圆形、椭圆形颗粒,较小的呈圆形,每一个淀粉粒中心有一特别明亮的脐点,常偏向一侧;脐点外围有明暗交替的“轮纹”围绕。除了这种单粒淀粉外,马铃薯还有少许复粒和半复粒淀粉,水稻米粒多含复粒淀粉。观察后,加一滴碘液于盖玻片边缘,
本文标题:普通生物学实验讲义
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