AtheNA中文讲座.

Luminex流式免疫荧光技术在自身免疫及优生免疫疾病诊断中的应用上海一滴准生物科技有限公司第一部分介绍与Luminex技术相关的公司1，美国路明克斯公司2，美国宙斯公司3，上海一滴准生物科技有限公司•1995年成立•座落于美国德克萨斯州唯一通过美国FDA认证的高通量诊断技术唯一被纳入美国临床实验室质控网络的高通量诊断技术2000年在美国纳斯达克上市2008-2009年评为美国25家成长最快的高科技公司流式荧光技术发展历程简介2001年7月27日INOVA基于该技术的“QUANTAPLEXENAPROFILE4”通过了美国FDA认证2005年6月9日《Nature》发表基于该技术的有关microRNA和癌症关系的学术论文2005年11月流式荧光技术获得年度国际临床诊断技术革新奖2009年基于Luminex技术平台，有53种产品，约300种指标通过了美国FDA认证目前，全球有包括Abbott、Bayer、ZEUS、Bio-Rad等公司在内的共50多家公司加盟流式荧光技术联盟，合作开发和推广流式荧光产品，已经有50个产品300多个指标通过了美国FDA的严格认证进入临床使用。Zeus公司成立于1976年总部设在美国新泽西州Zeus公司自成立开发序列免疫荧光诊断试剂盒1984年被授予里根总统奖及出口最多国家奖1987年开始开发ELISA诊断试剂盒并相继得到FDA认证2000年和Luminex合作开发系列诊断试剂盒第二部分标记抗体待测标志物交联有抗体的编码微球流式免疫荧光应用于免疫检测原理示意图基因检测过程原理示意图标记荧光素待测PCR扩增片段交联有基因探针的编码微球第三部分Zeus应用Luminex技术介绍Zues流式免疫荧光检测系统介绍全自动流式荧光检测系统特点：全自动，自动识别样品，试剂，自动实验检测，结果对接LIS半自动流式荧光检测系统特点：流式荧光最后结果读数，数据分析结果对接LIS，价格便宜。流式荧光诊断试剂盒特点：利用Luminex技术和孔内定标专利技术，在节省人力，物力，时间同时，大大提高试剂盒线性范围，灵敏度，准确性。Zues流式免疫荧光检测系统技术介绍编码微球（原始编码微球最多100种），链接一个羧基残端，有利于蛋白结合更牢靠。购买自Luminex公司流式免疫荧光检测系统购买自Luminex公司流式荧光诊断试剂盒Zues利用购买自Luminex编码微球，根据临床诊断需要开发不同类型组合诊断试剂盒。Zues购买编码微球Luminex公司编码方法？待编码的微球为直径为5.6um聚苯乙烯材质大小均一微球微球的编码方法：使用两种荧光染料：一红一红外在有机溶剂中，两种荧光染料按精确的比例混合聚苯乙烯微球在有机溶剂里膨胀，混合染料扩散到微球内部。冷却后，微球从内到外染色。什么是微球编码：红色和红外荧光染料的比例就是微球的编码，可达100种。Zues流式免疫荧光检测系统反应原理示意图1反应完成后微珠放大微珠标记Y和藻红蛋白标记Y夹心检测黄色待检物。多个项目在同一个反应杯中反应示意图多个项目在同一个反应杯中反应示意图Zues流式免疫荧光检测系统反应原理示意图2多个项目在同一个反应杯子反应示意图多个项目在同一个反应杯子反应示意图多个项目多个样品反应示意图SSBScl-70ANASMJo-1SSAHistonesCentrolereDsDNASSBScl-70ANASMJo-1SSAHistonesCentrolereDsDNAZues流式免疫荧光检测系统检测时仪器内部图片微珠排成线状通过检测区红激光和绿激光照射检测区的微珠微珠因红激光和绿激光照射而发射三种波长荧光。Zues流式免疫荧光检测系统检测原理示意图微珠排成线状通过检测区，每秒可以检测32000个以上的微珠仪器检测微珠的四个指标：微珠直径，红色荧光，红外荧光，藻红蛋白荧光确定是否为有效微珠和待检测物质含量。Zues流式免疫荧光检测系统检测微珠编码数据及分析Zues流式免疫荧光检测系统检测项目藻红蛋白荧光值Zues流式免疫荧光检测系统检测时仪器的实时图片1Zues流式免疫荧光检测系统检测时仪器的实时图片2ANA10项检测完经AtheNA软件分析定性结果ANA10项检测完经AtheNA软件分析定量结果ANA10项检测完经AtheNA软件分析CVS结果ANA10项检测完经AtheNA软件分析LIS结果第四部分Zeus流式免疫荧光检测方法学归类蛋白检测常用方法优缺点比较蛋白检测常用方法精密度比较数据及示意图•放射免疫精度：10-12mol/L•酶联免疫精度：10-9mol/L•化学发光精度：10-15mol/L•电化学发光精度：10-17mol/L•时间分辨荧光精度：10-18mol/LZues流式免疫荧光检测方法优于电化光蛋白检测方法流式荧光检测系统检测激光激发藻红蛋白荧光量跟待检物成非线性正比关系。类似电化光的分析方法，具有检测线性范围宽，灵敏度高，稳定，重复性好，操作简单等特点之外，还具有高通量，样本用量少，平台开放，可以检测项目多，仪器试剂价格相对低等众多特点。因此流式荧光检测方法是类似但优于电化光的检测方法。第五部分Zeus应用Luminex技术开发AtheNA产品的优点Zeus流式免疫荧光试剂盒AtheNA系列优点1流式荧光检测方法是类似但优于电化光的检测方法。具有检测线性范围宽，灵敏度高，稳定，重复性好，操作简单等电化光优点。还具有高通量，样本用量少，平台开放，可以检测项目多，仪器试剂价格相对低等众多优点。Zeus流式免疫荧光试剂盒AtheNA系列优点2=AtheNA试剂采用XMAP技术（多指标并行检测），左边一盒AtheNA试剂盒相当于右边10盒传统方法检测试剂，有效减少试剂储存所需要的冷藏空间。Zeus流式免疫荧光试剂盒AtheNA系列优点31，AtheNA样品用量10ul即可检测10-100项目，其他方法需要10-100倍它的样品量。2，AtheNA样品用量少减少病人因采样多带来的痛苦，易采集，有利于稀有样品检测，减少样品因分配不同工作站检测污染带来的结果不准。Zeus流式免疫荧光试剂盒AtheNA系列优点42.5T=20T•用AtheNA诊断试剂，一个技术员在2.5小时内可以完成96个样本的检测分析，每个样本分析项目数量可以10项或更多达到100项。•用传统方法，96样本，每个样本分析10个项目，至少需要20小时。•用AtheNA诊断试剂，不仅避免传统方法的操作复杂繁琐，而且由于实验操作简单统一，更易于实现自动化.•用AtheNA诊断试剂，分析数据直接和LIS系统对接，上传医院LIS数据库.Zeus流式免疫荧光试剂盒AtheNA系列优点5ELISA反应模式：反应只局限在孔的底部及四周。模条反应模式：反应只局限在底部。Luminex反应模式：动态液态反应模式，比以上两种更易于达到反应平衡点。Zeus流式免疫荧光试剂盒AtheNA系列优点6（微珠单项）=AtheNA1个孔1项目所测数值相当于ELISA1项重复做50次的数值类均相反应，反应模式保证了重复性每个指标有1000～5000个反应单元分析50个有效微球中位值，检测模式是重复性的第二道保险CV5%Zeus流式免疫荧光试剂盒AtheNA系列优点7（微珠10项）=AtheNA1个孔10项目所测数值相当于ELISA10个单项重复做50次的数值类均相反应，反应模式保证了重复性每个指标有1000～5000个反应单元分析50个有效微球中位值，检测模式是重复性的第二道保险CV5%Zues在Luminex技术基础上进行技术创新Zeus创新全自动流式荧光仪，自动识别样品，试剂，自动实验检测，结果对接LIS系统。Zeus针对Luminex的AtheNA系统进行创新样品稀释液人性化设计采用加样变色技术发明孔内定标技术（专利技术），提高试剂盒准确性。AtheNA试剂盒有良好质量控制系统，配备的操作误差质控品和孔内定标微球，确保检测值的准确。Luminex检测技术介绍Luminex检测时，把液体吸进仪器微珠成单线排列通过检测区进行检测，虽然检测很快，但由于微珠的无序排列，15种微球一个孔大概需要35秒。Luminex为液相反应模式，在检测时，反应并未终止，还可以与提供液体环境的标记物反应。因此就会如右图，同一样本随检测时间推后，MFI值会增加。Zeus在Luminex技术基础创新1（全自动系统）全自动，自动识别样品，试剂，自动实验检测，结果对接LIS打印检测报告。Zeus在Luminex技术基础创新2（加样变色技术）样本稀释液本为黄色，加样本后变蓝色。可有效防止样本的错加和漏加。ELISA定量检测试剂盒如何定量ELISA定量试剂盒定量方式是在开始选择几个孔来做定量标准曲线。以递增标准浓度作为X轴，OD值作为Y轴绘制标准曲线。所有样本都是在以上的标准曲线上计算得到。ZeusAtheNA诊断系统采用ELISA定标出现问题？因为检测MFI在不同检测时间而发生漂移，同一校准曲线计算的结果也会发生漂移。ZeusAtheNA诊断系统的孔内定标技术（专利技术）在AtheNA多重微珠检测系统中，每个检测孔都绘制独立标准曲线，该曲线符合该检测孔当时反应条件。ZeusAtheNA诊断系统经孔内定标计算结果在AtheNA多重微珠检测系统中，每个检测孔都绘制独立标准曲线，该曲线符合该检测孔的反应条件。因此就有如上图即使反应时间条件不同，也不会产生数据的飘移Zues在Luminex技术基础上创新4（全面质控方式）AtheNA诊断试剂盒提供一套操作过程控制质控品，该质控品为所检测项目定值样本有一定范围，当作样品检测，如不通过仪器有提示更正操作错误得到准确结果。CAL1，CAL2，CAL3微珠包被梯度羊抗IgG与样品中IgG反应单独绘制标准曲线，平衡因个体差异及加样时差带来误差。BSA排除非特异性吸附带来误差。CAL4包被定量IgG平衡因检测先后带来误差。AtheNA体外诊断试剂盒产品目录1AtheNAANAAtheNAANCAAtheNARFAtheNATPO/TG产品编号中文名称方法规格A20001抗核抗体多重微珠免疫法96TSSA抗体96TSSB抗体96TSm抗体96TSm/RNP抗体96TScl-70抗体96TJo-1抗体96T双链DNA抗体96T组蛋白抗体96T着丝粒抗体96TA96001髓过氧化物酶多重微珠免疫法96T蛋白酶396TA96101髓过氧化物酶多重微珠免疫法96T蛋白酶396T抗肾小球基底膜抗体96TA91001M类风湿因子IgM多重微珠免疫法96TA51001抗甲状腺过氧化物酶多重微珠免疫法96T抗甲状腺球蛋白抗体96TAtheNA体外诊断试剂盒产品目录2产品编号中文名称方法英文名称规格A92101GEB病毒衣壳抗原IgG多重微珠流式免疫荧光法EBVCAIgG96TEB病毒核心抗原IgG抗体多重微珠流式免疫荧光法EBNAIgG96TEB病毒早期抗原IgG抗体多重微珠流式免疫荧光法EAIgG96TA92101MEB病毒衣壳抗原IgM多重微珠流式免疫荧光法EBVCAIgM96TA76101G梅毒螺旋体IgG多重微珠流式免疫荧光法TPIgG96TA93101G麻疹IgG多重微珠流式免疫荧光法MeaslesIgG96T腮腺炎IgG多重微珠流式免疫荧光法MumpsIgG96T风疹IgG多重微珠流式免疫荧光法RubellaIgG96T带状疱疹病毒IgG多重微珠流式免疫荧光法VZVIgG96TA93111G麻疹IgG多重微珠流式免疫荧光法MeaslesIgG96T腮腺炎IgG多重微珠流式免疫荧光法MumpsIgG96T带状疱疹病毒IgG多重微珠流式免疫荧光法VZVIgG96TA61101A麸朊抗体IgA多重微珠流式免疫荧光法GliadinIgA96T抗组织转谷氨酰胺酶抗体IgA多重微珠流式免疫荧光法TissueTransglutaminase(tTG)IgA96TA61101G麸朊抗体IgG多重微珠流式免疫荧光法GliadinIgG96T抗组织转谷氨酰胺酶抗体IgG多重微珠流式免疫荧光法Ti