Agilent_1200型高效液相色谱仪标准操作规程

ShandongSimcere-MedgennBio-PharmaceuticalCo.,Ltd.山东先声麦得津生物制药有限公司Applicabledept.:TC分发部门：技术中心Subject:StandardoperationprocedureofAgilent1200HPLC文件名称：Agilent1200型高效液相色谱仪标准操作规程DocumentNo.:TC171-00文件号：TC171-00SupersedesdocumentNo.:替代文件号：无Revision:修订号：00EffectiveDate:生效日期：2009.11.01第1页共7页Approvals批准Dept.部门Occupation职务Signature签名Date日期Draftsman起草人TC技术中心职员Verifier审核人QD质量管理部文件主管Verifier审核人QD质量管理部经理Approvedby批准人GMO技术中心总监ShandongSimcere-MedgennBio-PharmaceuticalCo.,Ltd.山东先声麦得津生物制药有限公司Applicabledept.:TC分发部门：技术中心Subject:StandardoperationprocedureofAgilent1200HPLC文件名称：Agilent1200型高效液相色谱仪标准操作规程DocumentNo.:TC171-00文件号：TC171-00SupersedesdocumentNo.:替代文件号：无Revision:修订号：00EffectiveDate:生效日期：2009.11.01第2页共7页1目的建立Agilent1200高效液相色谱仪的操作规程，保证其正确使用。2范围Agilent1200高效液相色谱仪的操作与维护。3职责操作人员和责任人员对本规程的实施负责。4内容4.1组成G1322A脱气机、G1311A四元泵、G1329A自动进样器、G1330B自动进样器恒温器、G1315B可变波长检测器（DAD）、GB16A柱温箱和一套Agilent1200CHEMSTATIONS软件（软件光盘与说明书原件由工程部保存），打印机。4.2在线清洗若实验的流动相中含有的缓冲盐和离子对等试剂干后会留下固体印迹的物质时，必须要进行在线清洗过程。首先配制好10%异丙醇溶液，经0.45μm有机膜抽滤后，装入已用滤过的10%异丙醇溶液洗过三遍的洁净玻璃瓶内，调整流量为2～3滴/分钟，10%异丙醇溶液必须每周更新。4.3开机接通电源，打开计算机，等计算机启动成功后，含四元泵的Agilent1200高效液相色谱仪系统：从上到下，依次打开脱气机、泵、进样器、进样器恒温器、柱温箱和多波长检测器。约30秒钟后，各部件自检完毕，进入待机状态，指示灯为黄色或无色。ShandongSimcere-MedgennBio-PharmaceuticalCo.,Ltd.山东先声麦得津生物制药有限公司Applicabledept.:TC分发部门：技术中心Subject:StandardoperationprocedureofAgilent1200HPLC文件名称：Agilent1200型高效液相色谱仪标准操作规程DocumentNo.:TC171-00文件号：TC171-00SupersedesdocumentNo.:替代文件号：无Revision:修订号：00EffectiveDate:生效日期：2009.11.01第3页共7页双击桌面上的Instrument1Online，计算机进入工作站的MethodandRunControl操作界面。画面如下所示。4.4色谱条件的设定4.4.1方法的编辑●在methodandruncontrol状态下，单击“method”选择“editentiremethod”，请先在复选框中选择method中需要编辑的项目。●进入methodinformation在methodcomments中输入方法的名称及相关描述，参数设置完毕后单击OK。●进入泵参数设置画面，设置泵流速（ml/min），流动相组成，冲洗梯度，停针时间等，参数设置完毕后单击OK。●进入columnthermostattedmethod编辑状态，选择柱温箱温度，设置完毕单击OK。●进入VWD编辑状态，选择方法中所需波长、峰宽、响应时间等，参数设置好单击OK。●进入signaldetails编辑画面，选择下拉菜单中的VWDIA进行参数设定，点击“DAD”图标，点击“SetupDADSignals”，在“Signals”下方的空白处输入所需的检测波长，并在前面的方框里画“√”设置完毕单击OK。●进入编辑积分表画面，对所需积分的峰斜率、峰宽、峰高、峰面积、肩峰等参数进行设定，设定完毕后单击OK。●进入specifyreport编辑画面，单击screen前的方框，设置报告。使其输出结果到屏幕，在calculate选项中选择percent，在reportstyle选项中选择short，单击singnaloptions设置打印信号范围，单击OK。●进入时间编辑，在dataacquisition和standarddataanalysis的复选框中打×，选择好后单击OK，则方法编辑完毕。●在methodandruncontrol状态下，单击method，选择savemethodas选项，编辑方法名存储。4.4.2进样操作ShandongSimcere-MedgennBio-PharmaceuticalCo.,Ltd.山东先声麦得津生物制药有限公司Applicabledept.:TC分发部门：技术中心Subject:StandardoperationprocedureofAgilent1200HPLC文件名称：Agilent1200型高效液相色谱仪标准操作规程DocumentNo.:TC171-00文件号：TC171-00SupersedesdocumentNo.:替代文件号：无Revision:修订号：00EffectiveDate:生效日期：2009.11.01第4页共7页4.4.2.1调用方法进入methodandruncontrol状态下，单击选择method选项，单击loadmethod选择所要使用的方法。此时系统将根据所选择的方法进行相应的设置。开始前请根据方法对相应的参数例如：泵参数、自动进样器参数、自动进样器恒温器参数设定、柱温箱参数设定、检测波长设定等进行验证是否与方法设置中的一致。4.4.2.2自动进样序列的设定a单个样品进行分析在命令栏“Runcontrol”下，选择“SampleInfo……”或单击快捷操作的“一个小瓶”图标，然后单击样品信息栏内的小瓶，选择“SampleInfo……”，即打开了样品信息页面，可输入操作者（OperatorName）、数据存贮通道(Subdirectory)、进样瓶号(Vial)、样品名(SampleName)等信息，单击“OK”，即完成。b多个样品连续进行分析●编辑新序列：在命令栏“Sequence”下，选择“NewSequence”；然后再在命令栏“Sequence”下，选择“SampleParameters”，可输入操作者（OperatorName）、数据存贮通道(Subdirectory)等信息；然后再在命令栏“Sequence”下，选择“SequenceTable”或单击快捷操作的“三个小瓶”图标，单击样品信息栏内的样品盘，选择“SequenceTable”，即进入连续进样序列表的编辑，可输入进样瓶号（Location）、样品名（SampleName）、方法名（MethodName）、进样次数（Inject/Location）、进样体积（InjectVolume）等信息，单击“OK”，即完成。●调用已有序列：在命令栏“Sequence”下，单击“LoadSequence”或直接单击快捷操作的“LoadSequence”图标（左边一文件夹，右边三个小瓶），选定文件名，单击“OK”即可。在对“SequenceTable”改动过后，切记要在“SampleParameters”中改变保存路径，否则可能会覆盖以前的图谱。●指定样品进样：在命令栏“Sequence”下，选择“PartialSequence”，选中要进的样品瓶号，单击“RunSequence”，单击“Yes”即可。4.4.2.3进样序列的保存在命令栏“Sequence”下，单击“SaveSequence”或单击快捷操作的“SaveCurrentSequence”图标（左边一软盘，右边三个小瓶）；在path下选择保存路径，在此路径下选择subdiectory输入新文件名，单击“OK”，即完成。4.4.2.4平衡柱子调用相应方法后，将流速改为0ml/min，待界面变为绿色后，控制面板上显示”ready”，单击控制面板上的on，再将泵流速慢慢上升至所需流速。此时系统开始按照所设定的方法平衡柱子。4.4.2.5HPLC自动进样在色谱图中可选择Change改变所要检测的波长，Balance使基线归零，Adjust使横纵坐标适应图谱，对于自动进样系统将自动平衡。等仪器准备好，基线平稳，直接点击“START”图标。4.5数据分析4.5.1谱图的调用单击桌面上的Instrument1offline打开命令窗口，单击DataAnalysis此时在当前窗口左侧将出现磁盘中所保存的文件，在下拉菜单中找到所需要分析的文件并双击打开。或在Instrument1online窗口中点击DataAnalysis按照上述程序操作画面中即出现所调用的色谱图。ShandongSimcere-MedgennBio-PharmaceuticalCo.,Ltd.山东先声麦得津生物制药有限公司Applicabledept.:TC分发部门：技术中心Subject:StandardoperationprocedureofAgilent1200HPLC文件名称：Agilent1200型高效液相色谱仪标准操作规程DocumentNo.:TC171-00文件号：TC171-00SupersedesdocumentNo.:替代文件号：无Revision:修订号：00EffectiveDate:生效日期：2009.11.01第5页共7页4.5.2积分先调用所要分析的色谱图，调出后系统将根据方法中所设定的积分选项进行积分。如欲对其中某些参数进行修改，可在命令栏“Integration”下，选择“IntegrateEvents”或单击快捷操作的“Edit/SetIntegrationEventsTable”图标，此时，在屏幕下方左侧出现积分参数表，右侧为积分结果，在积分参数表中按实际的要求输入修改的参数，在命令栏“Integration”下，选择“Integrate”或单击快捷操作的“IntegrateCurrentChromatogram”图标（左边有∫，右边两个峰），仪器即按照新设定的积分参数重新积分，完成后，单击积分参数表上方“Exitandsaveeventstomethod”的快捷图标（右下角带勾），保存所作的参数修改并退出。4.5.3谱图优化从“Signals”菜单中选择“SignalsOptions”，如下图所示。从“范围(Ranges)”中选择“满量程(Full)”或“自动量程(AutoScale)”及合适的时间范围(TimeRange)或选择“自定义量程(UseRanges)”调整。反复进行，直到图的比例合适为止。点击“OK”。4.6打印报告在命令栏“Report”下，选择“specifyReport”或单击最右侧快捷操作的“SpecifyReportCalculationandPrintStyle”图标（右下角带叉的报告），根据实际要求选择报告的格式和输出形式等，单击“OK”，即完成。4.7关机关机前，先关灯，用相应的溶剂充分冲洗系统。退出化学工作站，依提示关泵，及其它窗口，关闭计算机。关闭Agilent1200各模块电源