CIK细胞免疫治疗在恶性肿瘤中的应用-卢学春

CIK细胞免疫治疗在恶性肿瘤中的应用生物治疗病区丰恺超2014-3-10汇报内容：•CIK免疫细胞的概念及抗肿瘤机制•CIK免疫细胞的制备•CIK细胞免疫治疗在各种恶性肿瘤中的应用•生物治疗病区目前的工作及新技术的应用免疫细胞治疗在肿瘤治疗中的概况手术放疗化疗免疫生物治疗长期以来，部分从事肿瘤临床治疗的科学家认为免疫治疗是辅助治疗；但随着肿瘤免疫认识的深入，越来越多的资料提示免疫学因素是肿瘤治疗不可或缺的考虑因素宿主免疫系统对肿瘤进展具有调控作用，肿瘤内有效免疫细胞的存在与预后直接关联，然而，多数化疗药对免疫细胞具有剿灭作用，从而限制了免疫细胞对肿瘤的对抗反应。通过激发机体免疫反应的抗肿瘤途径可能更有效与持久免疫细胞治疗肿瘤的临床评价~30%~550目前临床开展的免疫细胞种类:•树突状细胞：DC细胞•细胞毒性T细胞（CTL）•GDTC细胞（abT）•自然杀伤细胞：NK细胞•细胞因子诱导的杀伤细胞：CIK细胞•自然杀伤样T细胞:NKT细胞•肿瘤浸润淋巴细胞：TIL细胞CIK细胞的概念•细胞因子诱导的杀伤细胞（Cytokineinducedkillercells），是一种新型的免疫活性细胞，是将人外周血中的单个核细胞在体外用多种细胞因子如IFN-γ、IL-1α、IL-2、anti-CD3单抗共同培养一段时间后获得的一群异质细胞，主要由CD3+CD56+细胞和CD3+CD8+细胞两种细胞群构成，其中CD3+CD56+其主要的效应细胞，具有T淋巴细胞的强大抗肿瘤活性和非主要组织相容性复合体（MHC）限制性的特点，增殖速度快，杀瘤谱广，杀瘤活性高。CIK的免疫表性File:03-zhangbin.062SampleID:CTLBPatientID:P541AcquisitionDate:26-Mar-09Quad%GatedUL29.94UR65.35LL2.42LR2.28File:03-zhangbin.062SampleID:CTLBPatientID:P541AcquisitionDate:26-Mar-09Quad%GatedUL0.09UR67.97LL7.09LR24.85File:03-zhangbin.062SampleID:CTLBPatientID:P541AcquisitionDate:26-Mar-09Quad%GatedUL0.11UR12.63LL11.88LR75.38File:03-zhangbin.062SampleID:CTLBPatientID:P541AcquisitionDate:26-Mar-09Quad%GatedUL13.23UR83.10LL1.24LR2.4302004006008001000FSC-Height03-zhangbin.062R1100101102103104CD3PerCP03-zhangbin.062100101102103104CD3PerCP03-zhangbin.062100101102103104CD3PerCP03-zhangbin.062100101102103104CD8PE03-zhangbin.062expressboththeT-cellmarkerCD3andnaturalkillercellmarkerCD56andnon-MHC-restrictedCIKcellshaveintercellularadhesionmolecule-l(ICAM-l).CIKCIKcellspossesscytoplasmicgranules,whichcontaintheproteinperforin(cytolysin).CIKcellsareeffectiveagainstFasL-positivemalignantcellsandcellswithmultidrugresistance(MDR)CIKcellscanthemselvessecretemanycytokines,suchasIL-2,TNF-a,GM-CSFandsoon.CIKcellsmigratedtotumorsitesbythe7thhourafterinjectionandremaineddetectableatthesesitesforanadditional9daysCIK免疫细胞的抗肿瘤机制CIK免疫细胞的制备细胞接种数2×106/ml,IFN-r1000u/mlFicoll分离，回收PBMCIl-2、IL-1a、anti-CD3McAb各1000u/ml抽血：50ml扩增培养，2天换液，IL-2持续培养收集细胞，回输患者体内3d抽血：50ml1d2d14d培养扩增前后淋巴细胞总数及比例变化人体内细胞50ml外周血培养前细胞（均值）50ml外周血培养后（均值）细胞淋巴细胞总数4.5×1095×1075×109百分比数量百分比数量CD31.98×10945.12.2×10781.34.0×109CD3+CD4+1.08×10924.81.2×10715.60.8×109CD3+CD8+0.81×10918.40.9×10765.73.3×109CD4/CD8——1.39——0.24——CD3+CD56+(CIK)0.18×1094.70.2×10712.60.6×109CIK细胞免疫治疗联合化疗的临床路径化疗开始-11234512131415202122（天）化疗前1-3天抽血50ml12-15天内回输CIK细胞化疗结束第二次化疗抽血培养第2疗程CIKIL-2（100-200万U）皮下注射或静滴7-10天备注：1、必须于化疗开始前抽血；2、抽血前1周内忌糖皮质激素治疗；CIK细胞免疫治疗在各种恶性肿瘤中的应用多次输注CIK在老年恶性血液病临床治疗中的实践多次输注CIK在老年恶性大B淋巴瘤临床治疗中的实践DC-CIK/CIK治疗肿瘤的“千人计划”目前，我科共完成近2000余例，近10000人次•白血病微残•非T淋巴瘤，骨髓瘤等•肺癌•卵巢癌等妇科肿瘤•肝癌•胃癌/结直肠癌等消化系统肿瘤•肾癌、黑色素瘤等其他肿瘤•肉瘤（无效）CIK细胞免疫治疗存在的问题1、到达肿瘤位置：发生接触效应，体内难以实现2、通过接触激发免疫细胞内的酶系统实际上，输注的免疫细胞到达肿瘤部位的很少，缺乏靶向性。新技术：嵌合抗原受体T细胞（Chimericantigenreceptor,CART）在恶性肿瘤中的应用嵌合抗原受体（CAR）为免疫细胞靶向性治疗提供可能国外开展的CART细胞的相关临床试验我科目前已开展的CART细胞治疗NNormanno,CBianco,etal.Endocrine-RelatedCancer(2003)10,1-21ExpressionofErbBReceptorinHumanCancersEGFRsignaltransductionintumourcells设计原理：EGFR抗体表位绑定在杀伤力强的CD8/CD56阳性(CIK主要成分)T细胞表面1、靶向性；2、持续的杀伤性；3、酶系统激活复发或难治性实体瘤基线评估实验室复核EGFRECOG≤2血常规、IL-6血生化肿瘤标记物胸腹部CT或PET/CT细胞因子，送免疫室靶病灶≥2cm靶病灶＜2cm-d10-d70d7................................1mon2mon采集单个核细胞化疗不化疗回输期间注意事项：1.持续心电监护2.回输前30min异丙嗪、苯海拉明抗过敏预处理3.回输过程中及回输后监测生命变化并记录，4.详细记录发热、寒战等不良反应开始及持续时间5.给予碱化、补液治疗，对症治疗1.血常规2.血生化3.IL-64.细胞因子5.RT-PCR免疫室每月复查项目：1.血常规2.血生化3.肿瘤标记物4.IL65.细胞因子6.RT-PCR7.CT或PET/CTCART-EGFR检查治疗流程图CT或PET/CT复查CRPR或SDPD每月复查、随访RT-PCR拷贝数每月复查、随访RT-PCR拷贝数CART-EGFRagain新发肿瘤病灶原病灶增大更换方案靶病灶穿刺活检富含免疫细胞无或少量免疫细胞RT-PCR拷贝数RT-PCR拷贝数观察CART-EGFRagain可CART-EGFRagain或更换方案CART-EGFR检查治疗流程图PFSSafety﹠Toxicity典型病例•患者李XX，女，55岁，2012年12月确诊左肺中低分化腺癌Ⅳ期、多发骨转移、肝转移、左侧胸腔积液，确诊后给予过化疗、放疗及吉非替尼等治疗，病情进展后于我科接受CART-EGFR免疫治疗，病情缓解，PFS：5.7个月，进展后复查病理，EGFR表达强度及比例明显降低，病理切片以EGFR阴性癌细胞为主。影像学比较CART前CART后-1monthCART后-3month影像学比较CART前CART后-1monthCART后-3monthCAR-EGFRT细胞治疗前后肿瘤细胞EGFR抗原表达变化治疗前治疗后