5第四章食品检验检疫新技术

第四章食品检验检疫新技术2015-9-18提纲概述一免疫学检测技术二核酸提取方法与探针技术三四基因芯片技术五生物传感器六第一节概述一.概述老方法费时费力，精确性不高新方法快速、可靠为什么要发展新方法？现代免疫技术核酸探针技术现代免疫技术生物传感器基因芯片技术PCR技术自动微生物鉴定系统第二节免疫学检测技术一.免疫学检测方法的原理抗原：能刺激机体产生抗体和致敏淋巴细胞，并能与之结合引起特异性免疫反应的物质。抗原性反应原性免疫原性能与相应抗体结合发生反应的特性刺激机体产生抗体和致敏淋巴细胞的特性不完全抗原（半抗原）抗体：在抗原刺激下产生，并能与之特异性结合的免疫球蛋白。血清学试验：因为抗原抗体反应一般都要用血清，所以把抗原抗体在体外发生的特异性结合反应称血清学试验。免疫学检测方法的原理：借助抗原和抗体在体外特异性结合后出现的各种现象，对标本中的抗原或抗体进行定性或定量的检测。定性有免疫复合物形成的现象发生定量反应中加入抗原或抗体的浓度与形成免疫复合物的浓度成函数关系。根据免疫复合物产生的多少来推算样品中抗原或抗体的含量。免疫单向扩散当抗原与抗体在特殊稀释系统中反应而且比例合适(一般规定抗体过量)时，形成的可溶性免疫复合物在稀释系统中的促聚剂（聚乙二醇等）的作用下，自液相析出，形成微粒，使反应液出现浊度。当抗体浓度固定时，形成的免疫复合物的量随着检样中抗原量的增加而增加，反应液的浊度也随之增加。通过测定反应液的浊度与一系列标准品对照，即可计算出检样中抗原的含量。免疫比浊法酶联免疫检测ELISA酶联免疫吸附测定（enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA）ElisaSwanHikariElisa二.ELISA快速检测方法（一）基本原理酶标抗体酶标抗原抗原吸附在固相载体上，加待测抗体，再加相应酶标记抗体，生成抗原一待测抗体一酶标记抗体的复合物，再与该酶的底物反应生成有色产物。借助分光光度计的光吸收计算抗体的量。待测抗体的量与有色产物成正比。同理也可包被抗体，测定抗原含量。酶联免疫吸附试验（二）ELISA的种类直接法、间接法、夹心法、竞争法（三）用于标记的酶常用的有辣根过氧化物酶、碱性磷酸酯酶常用的交联方法有戊二醛法、过碘酸氧化法（四）酶与底物辣根过氧化物酶联苯二胺（OPD）3,3′，5,5′-四甲基联苯胺显色（五）固相载体ELISA小试管聚苯乙烯材料ELISA小珠聚苯乙烯材料ELISA酶标板聚苯乙烯材料硝酸纤维素膜磁性微粒（六）ELISA的测定方法（视频）三.免疫层析条检测方法免疫胶体金层析条脂质体层析条脂质体中含有染料等其他可见的化合物。脂质体结构的外膜表面有抗体附着，若被检食物中存在病原体，后者就结合在抗体上，使脂质体的外膜破裂，从而释放出染料或其他标记物。四.试剂盒快速检测方法试剂盒，装试剂的盒子。将实验所需的众多试剂组合到一起，并对每一步实验操作给予详细的说明，使用者只要按操作步骤添加试剂即可。第三节核酸提取方法与探针技术一.核酸的提取方法课本上有个地方有问题二.探针种类及其制备方法（一）探针的标记物分类（二）探针的标记方法缺口平移法随机引物法PCR标记法三.核酸探针杂交技术（一）异相杂交即固-液相杂交一般利用琼脂糖凝胶电泳分离经限制性内切酶消化的DNA片段，将胶上的DNA变性并在原位将单链DNA片段转移至尼龙膜或其他固相支持物上，经干烤或者紫外线照射固定，再与相对应结构的标记探针进行杂交，用放射自显影或酶反应显色，southern印迹杂交EdwinMellorSouthern三.核酸探针杂交技术（二）同相杂交即液-液相杂交双探针常规技术5'3'供能发光自由状态时，分子信标呈发卡式结构，从而荧光基团和淬灭基团相距较近。此时使荧光基团发出的荧光被淬灭基团吸收并以热的形式散发，荧光几乎完全被淬灭。当分子信标与靶分子结合时，荧光基团和淬灭基团之间的距离加大，从而使分子信标的荧光几乎100%恢复。所检测到的荧光强度与溶液中靶标量成正比。分子信标技术第五节基因芯片技术一.基因芯片概述基因芯片的定义：将多个DNA探针固定在很小面积的固相载体上所组成的微点阵阵列，可与来自样品的互补核酸片段杂交。基因芯片技术实际上是高度集成化的反向斑点技术。二.基因芯片的制作和分析步骤DNA探针设计DNA探针制作玻片活化芯片点样样本DNA制作杂交洗涤玻片扫描数据处理多聚赖氨酸处理的目的—防脱基因芯片系统三.基因芯片在转基因食品检测中的应用选择目的基因片段DNA探针制作芯片点样转基因食品DNA提取DNA扩增和标记杂交和洗涤结果检测第六节生物传感器一.生物传感器概述生物传感器的定义将含有固定化生物活性物质（如酶、抗体、全细胞、细胞器或其联合体）做敏感元件，配上适当的换能器所构成的分析系统，称为生物传感器，它可以将生化信号转为数量化的电信号。二.生物传感器的工作原理（一）将化学变化转变成电信号（二）将热变化转变成电信号（三）将光信号转变为电信号（四）直接产生电信号汗水传感带它通过测量汗水中分泌的代谢物质，让使用者能跟踪自身的电解质平衡、水化程度、肌肉劳累度和身体活动能力等。