20150438史芳芳三种生长抑制剂对草毒茎尖离体保存的影响_editing

——————————收稿日期：2015-05-05基金项目：作者简介：史芳芳（19-），性别，籍贯，职称，学历，从事研究或工作。E-mail：[e-mail]20150438文献著录格式：史芳芳.生长抑制剂对草莓茎尖离体保存的影响[J]．浙江农业科学，2015，56（）：生长抑制剂对草莓茎尖离体保存的影响史芳芳(新疆兵团第十二师农业科学研究所，新疆乌鲁木齐830088)摘要：通过组培技术研究培养基中添加多效唑、脱落酸、甘露醇3种生长抑制剂对草莓红颜试管苗生长保存的影响。结果表明，培养基中添加浓度为1.0mg·L-1的多效唑可保存草莓试管苗至6个月；6.0mg·L-1脱落酸结合6℃低温处理，可使试管苗保存20个月；2.1%的甘露醇结合6℃低温处理，可使试管苗保存15个月。关键词：草莓茎尖；多效唑；脱落酸；甘露醇；离体保存中图分类号：文献标志码：文章编号：0528-9017（2015）1材料与方法1.1材料试验材料为红颜草莓栽培品种，由兵团十二师农业科学研究所提供。1.2方法1.2.1培养材料的建立取匍匐茎的茎尖在流水下冲洗30min，先用75%医用酒精消毒30s，然后再用0.1%升汞水消毒6min，最后无菌水冲洗3~4次后剥去外层包片，将茎尖接种在MS＋6-BA0.5mg·L-1+NAA0.1mg·L-1(pH值5.8)培养基上进行芽分化培养，产生的丛生芽供试验用。1.2.2多效唑处理采用250mL的组培瓶，每瓶装入附加不同浓度(0，0.1，0.3，0.5，1.0mg·L-1)多效唑的MS+6-BA0.5mg·L-1+NAA0.1mg·L-1培养基20mL，每处理10瓶，每瓶接入5个单芽，在（25±l）℃下每日光照14h，光强1500~2000lx条件下培养保存。1.2.3脱落酸处理用250mL的组培瓶，每瓶装入附加不同浓度(0，0.1，0.3，0.9，2.7，4.5，6.0mg·L-1)的MS+6-BA0.5mg·L-1+NAA0.1mg·L-1培养基20mL，每处理10瓶，每瓶接入5个单芽，在培养室内培养，培养25~30d后，置于低温培养箱内保存。培养室的培养条件：温度为（25士l）℃，每日光照为14h，光强为1500~2000lx。低温培养箱培养条件：温度为（6士2）℃，每日光照为15h、光强为1500~2000lx。保存结束后进行继代培养。1.2.4甘露醇处理用250mL的组培瓶，每瓶装入附加不同浓度(0，0.3%，0.9%，1.8%，2.1%)甘露醇的MS+6-BA0.5mg·L-1+NAA0.1mg·L-1培养基20mL，每处理10瓶，每瓶接入5个单芽，在培养室内培养，培养25~30d后，置于低温培养箱内保存，培养条件同上。保存结束后进行继代培养。2结果与分析2.1多效唑对试管苗生长保存的影响由表1可知，当保存至6个月时，对照与低浓度(0.1，0.3mg·L-1)的试管苗的根发黄，叶色黄绿（绿），而高浓度(0.5，1.0mg·L-1)的还有白色根，叶色深绿，对照的成活率最低，为76%；当保存至7个月时，对照与低浓度(0.10mg·L-1)处理的芽全部死亡，而浓度为0.3，0.5，1.0mg·L-1的成活率分别为20.1%，32.5%和39.6%。表1多效唑对红颜早生草莓试管苗保存的影响多效唑含量/（mg·L-1)保存6个月保存7个月成活率/%根色叶色成活率/%076黄黄绿00.185.1黄黄绿00.3100黄绿20.10.5100白深绿32.51.0100白深绿39.62.2ABA对试管苗生长保存的影响2.2.1常温下ABA对试管苗保存的影响由表2可见，当保存7个月时，不含ABA的试管苗枯叶率为80%，随着培养基中ABA含量的增加，枯叶率也随之降低，说明ABA可延缓草莓试管苗的衰老。当ABA浓度为6.0mg·L-1时，枯叶率又达到70%，此时植株不长，受到伤害。从每个月统计的试管苗的成活率来看，ABA浓度为4.5mg·L-1时，保存效果最好，保存至12个月时，成活率可达88%，比没有ABA处理的试管苗延长5个月以上。表2不同浓度ABA对不同保存月份草莓试管苗成活的影响ABA/(mg·L-1）枯叶率/%成活率/%7891011120802000000.16086724329140.3501001008672420.93510010010089552.73510010010063624.527100100100100886.070100434328272.2.2低温下ABA对试管苗保存的影响由表3可见，保存到15个月，从试管苗的芽成活率及丛芽长势来看，ABA处理有利于草莓试管苗的保存，较高浓度(3.6，6.0mg·L-1)ABA对草莓试管苗保存效果较好。在低温下保存15个月后，试管苗转移至常温培养室中进行再培养。观察结果为：培养1个月后，浓度3.6，6.0mg·L-1处理的试管苗生长最好；培养2个月后，不含ABA的试管苗死亡，其他处理的试管苗生长正常；培养3个月后，浓度3.6，6.0mg·L-1处理的试管苗生长较好；培养4个月后，0.1mg·L-1处理的试管苗死亡；培养5个月后，0.3mg·L-1处理的试管苗成活率为30%，其余处理的为100%。表3低温下ABA对试管苗保存的情况ABA/(mg·L-1）成活率/%丛芽长势037纤细、弱0.170纤细0.3100中等0.9100中等3.6100粗壮6.0100粗壮2.3甘露醇对草莓试管苗保存的影响由表4可见，试管苗在低温下保存到15个月时，经甘露醇处理的试管苗成活率为100%，对照为40%，试管苗较壮。表4低温下甘露醇对草莓试管苗保存影响甘露醇浓度/%成活率/%丛芽生长势040纤细、弱0.3100纤细、弱0.9100纤细、弱1.8100纤细、弱2.1100中等3讨论多效唑是一种高效植物生长延缓剂，在植物体内抑制贝壳杉烯酶的活力，从而阻碍赤霉素的生物合成，使植株矮化。许多研究结果表明，多效唑可控制试管苗健壮生长，调节生长速度，延长试管苗的保存时间。在本试验中，多效唑可延长草莓试管苗的保存时间至6个月，这是因为多效唑的抑制效应在一定浓度范围内随浓度的升高而加强，但高浓度的多效唑对试管苗有毒害甚至致死作用。可见，适当浓度的多效唑能达到壮苗的目的，但对于草莓红颜来说，超过6个月，多效唑的加入则抑制生长。因此，多效唑应针对不同物种适量添加。培养基中的生长抑制物质ABA具有调节植物发育、细胞分裂的作用，并使植物对干旱、寒冷等环境胁迫具有响应能力，可延长试管苗保存时间。本试验中，培养基中添加脱落酸后，常温下试管苗的芽增殖及丛芽生长明显缓慢，根的发生也得到抑制，试管苗的保存时间得到延长，浓度为4.5mg·L-1的ABA对草莓试管苗的保存效果最好，比没有ABA处理的试管苗延长5个月以上，浓度为6mg·L-1的ABA对草莓试管苗有点伤害。而在低温下，6mg·L-1的ABA对草莓试管苗的保存效果最好，这是因为ABA对逆境胁迫有防卫作用，对逆境信号的转导。可启动植物体内的应激反应，提高植物防御逆境因子胁迫能力。培养基中添加一些高渗化合物，如甘露醇，是一种常用的缓慢生长保存手段。利用这一原理，甘露醇在多种植物种质资源保存中得到应用。研究表明，添加1％~5％甘露醇的MS培养基对茎尖的生长有抑制作用。本试验中，2.1%的甘露醇结合低温处理可使草莓试管苗种质保存15个月，试管苗丛生芽长势最佳。综上分析认为，在草莓红颜茎尖离体保存中，培养基中添加ABA较多效唑、甘露醇更有利于延长试管苗的保存时间。试管苗在低温条件下保存效果比常温下更好。参考文献：3个以内的作者全部列出，3个以上的列出3个，后面“，等.”[1]陈振光.果树组织培养[M].上海：上海科技出版社，1987.[2]郭延平等.猴桃种质的离体保存研究[J].果树科学，1995，12(2):34-87.[3]郭延平，李嘉瑞，吉爱梅.ABA对猴桃种质离体保存的生理效应[J].西北农业学报，1994，3t4):84-87.[4]林长春，李其文.马铃薯茎尖培养脱毒与种质资源试管苗保存[C].作物种质资源保存研究论文集，学术书刊出版社，1989，48-55.[5]沈德绪.果树种质资源的研究利用进展[J].果树科学，1994，11(4):253-257.[6]王家福等.枇杷种质资源的离体保存研究II生长抑制剂的影响[J].亚热带植物科学，2002，31(4):1-4.[7]王正询等.多效唑对香蕉试管苗生长的影响[J].植物生理学通讯，1994，30(5):346-348.[8]辛淑英.甘薯组织培养和种质资源保存[C].作物种质资源保存研究论文集，北京：北京学术书刊出版社，1989，81-95.[9]张利平等.多效唑在葡萄试管种质常温保存中的应用[J].园艺学报，1994，21(4):389-391（责任编辑：张瑞麟）ThreeGrowthInhibitoronStrawberryStemTipInVitroPreservationEffect.ShiFang-fang