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成年小鼠心脏灌流及取脑组织步骤实验步骤:1、小鼠麻醉后立即将其用针头固定在泡沫板上(用针头插住四肢)。用镊子扯起胸部皮肤,另一只手用剪刀剪开胸腔的皮肤和肋骨,暴露出心脏和肝脏。2、将注射针头插入小鼠左心室,同时将小鼠肝脏减掉,以使血液流出。灌注生理盐水,时间维持在1min(10~20ml)灌注液左右,血液排除后四肢、肝脏和舌头会变白。3、待小鼠四肢、肝脏和舌头变白之后,用4%PFA灌流固定,当PFA流至大脑处可能会使小鼠尾巴略有反射现象(有时可能没有),此时可将灌流速度下调,以使固定更加充分。整个PFA灌流时间约为5min。(固定原理:多聚甲醛可以使蛋白质交联)4、将导管始端从PFA中拿出,待管中液体流尽后,将心脏上的针头拔下,如果固定的较好,可发现小鼠眼球呈现白色。将托盘中的血液倒至废液桶内,并准备下一步的取脑操作。取脑及脱水:1、剪开头部皮肤,露出白色头盖骨。将延髓上包被的软骨剪开,除去多余的结缔组织。需要注意的时,眼睛要由剪刀剪下,不能够直接扯下来,因为眼睛后部连着视神经,如果扯的话有可能会损坏视交叉上核等其他脑部组织。2、将头盖骨小心剥开,露出白色的脑部,在剥嗅球部位时要格外小心,必要的话可以先将嗅球前部的碎骨留着待进一步固定之后再去除。3、将头盖骨剥开后,将脑下部连接的神经逐条剪短(可看到视神经交叉),待全部剪断后将脑整个剥离出来。4、将剥离出来的脑浸泡在4%PFA中,过夜固定。5、将PFA液换为30%蔗糖进行脱水(防止冷冻切片时形成冰晶和孔洞),初始脱水时脑会浮在蔗糖上面,待完全脱水后脑会沉底。此时可将脑取出进行冷冻切片。
本文标题:小鼠灌注取脑
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