1液相色谱原理基础知识.

1ShimadzuInternationalTrading(Shanghai)Co.Limited岛津液相色谱操作培训岛津国际贸易（上海）有限公司分析仪器事业部分析中心2ShimadzuInternationalTrading(Shanghai)Co.Limited免费咨询电话800-810-0439400-650-0439分析中心电话北京：010-85252352上海：021-22013645广州：020-87108603沈阳：024-23255577岛津网站地址【岛津技迩（上海）商贸有限公司】有任何问题请联系我们3ShimadzuInternationalTrading(Shanghai)Co.Limited1969GPC系统开发1972LC-1（LC-830）销售＜与DuPont签订许可合同后制造销售＞1978LC-3A系列销售＜CDQR方式的单柱塞型送液单元为特征＞1981LC-4A系列销售＜内置微型计算机的全自动HPLC＞1982LC-5A系列销售＜世界上首创的微量型LC对应HPLC＞1984LC-6A系列销售＜世界上最早的积木型HPLC、现在的HPLC的前身＞1991LC-10A系列销售＜世界上最早采用微冲程送液单元和减低噪音技术的检测器＞1997LC-VP系列销售＜采用有效性支持功能的积木型HPLC＞2000LC-2010销售＜追求性能和操作性更加完善的一体型HPLC＞2004LC-20AProminence销售＜为分析实验室带来革新的HPLC＞2010LC-15C销售＜为了让LC分析更为便捷2010LC-30ANexera销售＜130MPa耐压系统，低系统容量，高温分析和样品自动前处理＞岛津HPLC的历史Startedin1969在售产品4ShimadzuInternationalTrading(Shanghai)Co.Limited岛津HPLC的历史2000THECNLOGYBREAKTHROUGHLC-20101997THECNLOGYBREAKTHROUGHFlexibleHPLCSystemwithMicro-strokeVolumeSolventDeliveryUnitLC-VP2004THECNLOGYBREAKTHROUGHLC-20AProminence2010THECNLOGYBREAKTHROUGHLC-15CEssentia2008THECNLOGYBREAKTHROUGHUFLCProminence2010THECNLOGYBREAKTHROUGHUHPLCLC-30ANexera5ShimadzuInternationalTrading(Shanghai)Co.LimitedLC-20AProminence6ShimadzuInternationalTrading(Shanghai)Co.Limited基础知识讲解内容1、色谱基础知识2、硬件基础知识3、定量基础知识4、维护基础知识7ShimadzuInternationalTrading(Shanghai)Co.Limited第一部分色谱基础知识8ShimadzuInternationalTrading(Shanghai)Co.Limited色谱起源石油醚碳酸钙颗粒色素混合物色谱分离组分9ShimadzuInternationalTrading(Shanghai)Co.Limited色谱发展史20世纪初，俄国植物学家M.S.Tswett提出经典液相色谱法；20-30年代，柱分配色谱和纸色谱；50年代，气相色谱，薄层色谱；60年代，凝胶渗透色谱及高效液相色谱；70年代，高效毛细管气相色谱法；80年代，电色谱；90年代，光色谱。10ShimadzuInternationalTrading(Shanghai)Co.Limited0.00.51.01.52.02.53.0min0100200300400500mVMethylParabenEthylParabenPropylParabenButylParaben色谱法：利用组分在两相间分配系数不同而进行分离的技术流动相：携带样品流过整个系统的流体固定相：静止不动的一相，色谱柱色谱定义色谱是一种分离技术.色谱的主要目的是对混合物中的目标物分离和定量11ShimadzuInternationalTrading(Shanghai)Co.Limited色谱分类高效液相色谱HighPerformanceLiquidChromatography(HPLC)气相色谱GasChromatography(GC)薄层色谱Thin-LayerChromatography(TLC)毛细管电泳CapillaryElectrophoresis(CE)12ShimadzuInternationalTrading(Shanghai)Co.Limited液相色谱：以液体作为流动相的色谱分离方法适用于高沸点、大分子、强极性和热稳定性差的化合物的分析流动相具有运载样品分子和选择性分离的双重作用HPLCvsGC气相色谱：以气体作为流动相的色谱分离方法适用于沸点较低、热稳定性好的中小分子化合物的分析流动相只起运载样品分子的能力13ShimadzuInternationalTrading(Shanghai)Co.LimitedHPLC简易流程图数据处理系统输液泵进样器色谱柱柱温箱检测器储液瓶14ShimadzuInternationalTrading(Shanghai)Co.LimitedHPLC特点分离性能好灵敏度高（10-9～10-12g）选择性高（同分异构，旋光异构）分析速度快进样量小（1-100mL）15ShimadzuInternationalTrading(Shanghai)Co.LimitedHPLC分类反相色谱（reversedphasechromatography）离子对色谱（ion-pairchromatography）正相色谱（normalphasechromatography）离子交换色谱（ionexchangechromatography）尺寸排阻色谱（GPC/GFC）16ShimadzuInternationalTrading(Shanghai)Co.Limited反相色谱C18(ODS)C8(octyl)C4(butyl)苯基TMS氰基-O-Si(CH3)2-C18H37SiO2非极性——流动相的极性大于固定相的极性17ShimadzuInternationalTrading(Shanghai)Co.Limited相互作用力是什么?OHOHC18(ODS)强弱疏水性SiO218ShimadzuInternationalTrading(Shanghai)Co.Limited疏水性如果样品有–CH3CH2CH2---:碳链–:芳香基如果样品有–COOH:羧基–NH2:氨基–OH:羟基作用力强作用力弱19ShimadzuInternationalTrading(Shanghai)Co.Limited反相色谱流动相的选择优化水相（缓冲液）和有机相的比例非常重要甲醇，乙腈和THF是常用的有机溶剂。在有缓冲液的情况下，缓冲液的浓度和pH值非常重要。20ShimadzuInternationalTrading(Shanghai)Co.Limited流动相极性变化对分离的影响20%水30%水40%水1:对羟基苯甲酸甲酯2:对羟基苯甲酸乙酯3:对羟基苯甲酸丙酯4:对羟基苯甲酸丁酯有机相:甲醇21ShimadzuInternationalTrading(Shanghai)Co.Limited固定相极性变化对分离的影响C18(ODS)强样品SiO2C8样品一般SiO2样品C4弱SiO222ShimadzuInternationalTrading(Shanghai)Co.Limited分析条件柱:Shim-packCLC-ODS流动相:MeOH:H2O=7:3流速:1.0mL/min温度:40℃进样体积:10mL检测器:UV-254nm峰1.苯甲酸甲酯2.苯甲酸乙酯3.n-苯甲酸丙酯4.n-苯甲酸丁酯ODSC8TMS固定相极性变化对分离的影响23ShimadzuInternationalTrading(Shanghai)Co.Limited反相离子对色谱原理：样品离子与流动相中离子对试剂的反离子生成疏水性离子对，而为反相色谱固定相保留固定相：疏水性的苯乙烯/二乙烯基苯树脂或键合的硅胶流动相：水（缓冲液）+离子对试剂+有机溶剂离子对试剂：所带电荷与待测离子相反24ShimadzuInternationalTrading(Shanghai)Co.Limited阴离子化合物–氢氧化四丁基铵–溴化四丁基铵阳离子化合物–丁烷基磺酸钠（C4）–戊烷基磺酸钠（C5）–己烷基磺酸钠（C6）–庚烷基磺酸钠（C7）–辛烷基磺酸钠（C8）–癸烷基磺酸钠（C10）–十二烷基磺酸钠（SDS）常用离子对试剂25ShimadzuInternationalTrading(Shanghai)Co.Limited反相离子对色谱流动相的选择离子对试剂的类型所带电荷与待测物质相反离子对试剂的浓度10-4~10-2mol/L在一定范围内，浓度越大，被分离物的保留值越大流动相的pH26ShimadzuInternationalTrading(Shanghai)Co.Limited—阴阳离子表面活性剂—大分子脂肪酸—烷基磺酸盐和芳香硫酸盐—含氮化合物—生物碱—水溶性维生素—酚类有机酸、碱、盐的分离包括：反相离子对色谱应用27ShimadzuInternationalTrading(Shanghai)Co.Limited正相色谱硅胶柱:常用氰基柱:常用氨基柱:分析糖二醇基柱:分析蛋白质硅胶SiO2SiO2-Si-CH2CH2CH2CN-Si-CH2CH2CH2NH2-Si-CH2CH2CH2OCH(OH)-CH2(OH)化学键合相——流动相的极性小于固定相的极性28ShimadzuInternationalTrading(Shanghai)Co.Limited相互作用力是什么?OHHOSiOHSiOH强弱非常弱氢键力29ShimadzuInternationalTrading(Shanghai)Co.Limited氢键力如果样品有–COOH:羧基–NH2:氨基–OH:羟基氢键力强如果样品没有任何官能团，如碳水化合物如果样品有大的基团,由于空间位阻氢键力弱30ShimadzuInternationalTrading(Shanghai)Co.Limited正相模式下流动相的选择主要试剂烷烃（戊烷,己烷,庚烷,辛烷）芳香烃（苯,甲苯,二甲苯）二氯甲烷氯仿四氯化碳辅助试剂甲基-t-丁基醚（MTBE），乙醚，四氢呋喃（THF），二氧杂环乙烷，嘧啶，乙酸乙酯，乙腈，丙酮，异丙醇，乙醇，甲醇为了调整保留时间，可以选择主要试剂然后再加入辅助试剂。31ShimadzuInternationalTrading(Shanghai)Co.Limited流动相极性变化对分离的影响0%甲醇2%甲醇5%甲醇1:邻苯二甲酸二辛酯2:邻苯二甲酸二丁酯3:邻苯二甲酸二乙酯4:邻苯二甲酸二甲酯主要试剂:己烷32ShimadzuInternationalTrading(Shanghai)Co.Limited反相色谱流动相极性大于固定相极性适用于能溶于水/有机混合物的中性或非离子化合物分离正相色谱流动相极性小于固定相极性适用于不溶于水/有机混合液的亲脂样品、异构体混合物的分离和制备HPLC反相色谱与正相色谱的对比33ShimadzuInternationalTrading(Shanghai)Co.Limited反相–保留时间重现性好–固定相耐用正相–对立体异