2009高考生物二轮专题复习教案：实验基础知识方法总结

实验基础知识——方法总结（一）制片技术——制片法1.玻片标本类型：（1）临时玻片标本：是实验中观察标本常采用的方法，保存时间不长久是本法的缺点。如草履虫形态及应激性、口腔上皮细胞、植物细胞质壁分离及复原、洋葱根尖有丝分裂、病原体观察等。（2）永久玻片标本：如洋葱根尖固定装片.蛔虫受精卵固定装片等。2.制片法：中学常用的四种制片法是石蜡切片法（如制作植物茎横断面的切片），涂片法（如制作细菌、酵母菌、口腔上皮细胞临时装片），压片法（洋葱根尖有丝分裂、观察早期花蕾花粉母细胞、洋葱鳞片叶表皮等临时装片的制作），徒手切片法（如桂花叶片横切）。（二）染色及染色剂：染色的目的在于使生物组织和细胞受染色剂的作用（化学反应或主动吸收等），其各部分结构能清楚的显示出来，便于显微镜下识别和分析研究。1.染料及染色剂（1）染料：是一类有色的有机物或无机物，它能使被染物呈现颜色。染料的分类有两种，一种是按染料发色机团是阴离子还是阳离子分，是阴离子者为酸性染料，是阳离子者为碱性染料。碱性染料是一种色碱盐，通常为氯化物（如亚甲基蓝）或醋酸盐（醋酸洋红）；酸性染料为色酸盐，通常是钠盐、钾盐、铵盐。另一种是按染色对象分为胞核染料（龙胆紫、醋酸洋红），胞浆染料（红墨水、碘液等），脂肪染料（苏丹Ⅲ、苏丹Ⅳ）等。（2）染色剂：染料溶解在溶剂中而成的溶液。如碘液、醋酸洋红液、龙胆紫溶液、亚甲基蓝溶液、红墨水等。2.染色方法：根据材料是活的还是死的分为活体或半活体染色（如0.01%亚甲基蓝溶液对根染色——根对离子的交换吸附实验、碘液对口腔上皮细胞的染色等）及死体染色（如根尖有丝分裂实验中龙胆紫溶液对已解离的根尖的染色）。3.生物实验中常用的溶液：水、酒精、丙酮、汽油等。4.介绍几种制剂的作用w.w.w.k.s.5.u.c.o.m（1）2，4-D生长素类似物：有双重性，低浓度促进生长；高浓度抑制生长；培育无籽果实。（2）10-4M的秋水仙素：a.诱发基因突变。b.使染色体加倍，培育多倍体。c.单倍体育种，培育纯种。（3）0.9%生理盐水（维持红细胞、口腔上皮细胞形态），10%KNO3溶液（植物细胞质壁分离和自动复原），5%CaCl2溶液和0.01%亚甲基蓝溶液（根对离子的交换吸附），15%盐酸溶液（对根尖解离），丙酮、酒精（溶解色素），层析液（分离色素），龙胆紫溶液、醋酸洋红液（根尖细胞染色体染色），30%蔗糖溶液（植物细胞质壁分离和复原）（4）紫外线：一定剂量作为能量、保温，高剂量导致细胞基因突变。（三）实验方法：是做好实验设计的关键所在，最常见的经典的实验方法汇总如下：（1）化学物质的检测方法1）淀粉——碘液2）还原糖——斐林试剂、班氏试剂3）CO2——Ca(OH)2溶液或酸碱指示剂或溴麝香草酚蓝水溶液（蓝变绿再变黄）4）乳酸——pH试纸5）O2——余烬木条复燃6）无O2——火焰熄灭7）蛋白质——双缩脲试剂8）染色体——龙胆紫、醋酸洋红溶液9）DNA——二苯胺试剂（沸水浴蓝色）或甲基绿10）脂肪——苏丹Ⅲ或苏丹IV染液11）酒精——重铬酸钾（酸性条件）12）RNA——吡罗红13）线粒体——健那绿（2）实验结果的显示方法1）光合速率——O2释放量或CO2吸收量或淀粉产生量2）呼吸速率——O2吸收量或CO2释放量或淀粉减少量3）原子途径——放射性同位素示踪法4）细胞液浓度大小——质壁分离5）细胞是否死亡——质壁分离、亚甲基蓝溶液染色6）甲状腺激素作用——动物耗氧量，发育速度等7）生长激素作用——生长速度（体重变化，身高变化）8）胰岛素作用——动物活动状态9）菌量——菌落数或亚甲基蓝溶液褪色程度10）大肠杆菌——伊红-美蓝琼脂培养基（3）实验条件的控制方法1）增加水中氧气——泵入空气或吹气或放入绿色植物减少水中氧气——容器密封或油膜覆盖或用凉开水2）提供CO2方法——NaHCO33）除去容器中CO2——NaOH溶液或KOH溶液4）除去叶片中原有淀粉——置于黑暗环境一昼夜5）除去叶片中叶绿素——酒精加热6）除去光合作用对呼吸作用的干扰——给植株遮光7）如何得到单色光——棱镜色散或彩色薄膜滤光8）血液抗凝——加入柠檬酸钠9）线粒体提取——细胞匀浆离心10）骨的脱钙——盐酸溶液11）灭菌方法——微生物培养的关键在于灭菌，对不同材料，灭菌方法不同：培养基用高压蒸汽灭菌；接种环用火焰灼烧灭菌；双手用肥皂洗净，擦干后用75%酒精消毒；整个接种过程都在实验室无菌区进行。（4）实验中控制温度的方法1）还原糖鉴定：水浴煮沸加热2）酶促反应：水浴保温3）用酒精溶解叶中的叶绿素：酒精要隔水加热4）DNA的鉴定：水浴煮沸加热5）细胞和组织培养以及微生物培养：恒温培养六、练习1.生物呼吸作用的底物（有机物）种类及含量的差异，会导致呼吸作用释放的CO2与吸收的O2比发生差异，这可用呼吸商表示：呼吸商（Q）＝22COO呼吸作用释放的呼吸作用吸收，为了测定种子萌发时的呼吸商，现准备了3只玻璃瓶、瓶塞、带刻度的玻璃管、发芽的蚕豆种子、10%的NaOH溶液、NaHCO3、清水等。1号玻璃瓶的实验装置如图所示。（1）由于发芽蚕豆种子（已消毒）的呼吸作用，1号玻璃瓶内的气体发生了变化，使得墨滴向左移动，显然瓶内气体减少了，减少的气体是。（2）1号玻璃瓶内的气体变化还不足以求出发芽蚕豆的呼吸商，由此还要利用2号玻璃瓶来测定发芽蚕豆呼吸作用过程中的某一种气体的变化。请根据1号图及题干中的器材与试剂，说出2号图装置与1号图的不同之处，以此可以测出量。（3）若1号装置测出的实验数据（墨滴移动量）为X，2号装置所测得的实验数据（墨滴移动量）为Y，则呼吸商计算式为：如果呼吸商小于1时，说明。（4）为了纠正环境因素引起的实验测量误差，须设3号装置。应对3号装置作何处理：。如3号装置的墨滴在实验后向右移动量为Z，则氧气实际消耗量应为。（5）如果该发芽的种子已带一定量的小叶，要了解光照强度对植物光合作用的影响，并还利用上述装置1，则需要注意：1）实验的变量因素是；实验试剂选用，理由是。2）在十分合适的某光照强度条件下，实验进行一定时间，测得的实验数据（墨滴移动量）为A，则该墨滴一定向移动。3）如要知道较高光照强度下真正的光合作用气体变化量，还需进一步的实验操作是。真正光合作用的变化量是。答案.（1）氧气（2）试管中的液体应用同体积的清水种子吸收的氧气量与释放的二氧化碳气体量的差值（3）（X-Y）/X呼吸底物中含脂肪（4）用死种子，试管中放等量的清水X+Z（5）1）光照强度Na2CO32）Na2CO3既能为植物光合作用提供二氧化碳气体，又可以保持瓶中二氧化碳气体量不变，便于实验分析指标的单一。2）右3）遮光一定时间，记录墨滴移动刻度A—遮光情况下测得的数据2.（08山东卷)番茄（2n=24）的正常植株（A）对矮生植株（a）为显性，红果（B）对黄果（b）为显性，两对基因独立遗传。请回答下列问题：（1）现有基因型AaBB与aaBb的番茄杂交，其后代的基因型有种，基因型的植株自交产生的矮生黄果植株比例最高，自交后代的表现型及比例为。（2）在AA×aa杂交中，若A基因所在的同源染色体在减数第一次分裂时不分离，产生的雌配子染色体数目为，这种情况下杂交后代的株高表现型可能是。（3）假设两种纯合突变体X和Y都是由控制株高的A基因突变产生的，检测突变基因转录的mRNA,发现X的第二个密码子中第二碱基由C变为U，Y在第二个密码子的第二个碱基前多了一个U。与正常植株相比，突变体的株高变化可能更大，试从蛋白质水平分析原因：。（4）转基因技术可以使某基因在植物体内过量表达，也可以抑制某基因表达。假设A基因通过控制赤霉素的合成来控制番茄的株高，请完成如下实验设计，以验证假设是否成立。①实验设计：（借助转基因技术，但不要求转基因的具体步骤）a.分别测定正常与矮生植株的赤霉素含量和株高。b.。c.。②支持上述假设的预期结果：。③若假设成立，据此说明基因控制性状的方式：。答案：(1)4aaBb矮生红果:矮生黄果＝3:1(2)13或11正常或矮生(3)YY突变体的蛋白质中氨基酸的改变比X突变体可能更多（或：X突变体的蛋白质可能只有一个氨基酸发生改变，Y突变体的蛋白质氨基酸序列可能从第一个氨基酸后都改变）。(4)①答案一：b.通过转基因技术，一是抑制正常植株A基因的表达，二是使A基因在矮生植株过量表达。c.测定两个实验组植株的赤霉素含量和株高。答案二：b.通过转基因技术，抑制正常植株A基因的表达，测定其赤霉素含量和株高。c.通过转基因技术，使A基因在矮生植株过量表达，测定其赤霉素含量和株高。（答案二中b和c次序不做要求）②与对照比较，正常植株在A基因表达被抑制后，赤霉素含量降低，株高降低；与对照比较，A基因在矮生植株中过量表达后，该植株赤霉素含量增加，株高增加。③基因通过控制酶的合成来控制代谢途径，进而控制生物性状。3．科学家研究发现，癌细胞的无限增殖受某些调控基因的调控，该调控基因能激发所有动物细胞大量增殖。为探究该调控基因是存在于细胞质中还是存在于细胞核中，科研人员做了如下的实验设计，请你继续完成下列实验：实验方案：（注：癌细胞能传代培养，细胞形态发生明显改变。如何观察细胞形态不作实验设计要求）（1）用分别处理癌细胞和小鼠肝脏细胞使之分散成单个细胞。（2）分别使单个癌细胞和单个肝脏细胞。（3）将重组融合得到细胞甲，将重组融合得到细胞乙。（4）取两只培养瓶分别编号A、B，各加入等量的培养液。（5）取等量的重组细胞甲和重组细胞乙，分别放入到A、B两个培养瓶内进行培养。（6）观察并记录A、B两个培养瓶内的细胞形态变化。预期3种可能的实验结果和结论：①若实验结果为，则调控基因存在于细胞核中。②若实验结果为，则调控基因存在于细胞质中。③若实验结果为，则调控基因存在于细胞核和细胞质中。w.w.w.k.s.5.u.c.o.m