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葡萄多糖抑菌特性的研究专业：生物技术姓名：蒋新蕾指导教师：葛淑敏目录第一章绪论第二章葡萄多糖的分离及含量测定第三章葡萄多糖抑菌特性的初步研究第四章结果与分析第一章绪论1.1葡萄多糖的研究概述1.1葡萄多糖的研究概述当前,对多糖的研究方兴未艾,欧美和日本等发达国家对多糖的研究都非常的重视,研究的深度和广度迅速发展,已经成为分子生物学,药物学中不可缺少的一部分。在我国,多糖研究早已成为热点,对于果蔬多糖的研究报道也很多,但大部分还停留在实验室阶段。1.2本论文研究的内容和意义本研究课题利用新疆丰富的葡萄资源，以葡萄作为研究对象，提取葡萄活性多糖，并分离纯化，了解多糖的理化性质，对其抑菌特性进行了研究，为葡萄多糖保健食品的生产做好前期准备工作，开发出具有高附加值的以活性多糖为主要成分的的保健食品，以提高人民身体素质、增进健康、减少疾病。第二章葡萄多糖的分离及含量测定2.1材料、试剂与仪器1）材料：新疆无核白葡萄(成熟，饱满，购于沃尔玛超市)；2）主要试剂：无水乙醇、石油醚、盐酸等，以上均为国产分析纯试剂；3）主要仪器设备：多功能搅拌器，电热恒温水浴锅，冷冻高速离心机等。2.2操作要点原料的选择与破碎热水提取浸提液的离心及浓缩乙醇沉淀脱脂脱蛋白透析浓缩干燥操作要点2.3操作方法1、葡萄多糖供试液的制备2、供试菌种3、培养基4、抑菌实验方法（琼脂扩散滤纸片法）①供试菌种的活化及菌悬液的制备2.3操作方法供试菌种葡萄多糖苯甲酸钠生理盐水枯草芽孢杆菌13.0--大肠杆菌12.0--金黄色葡萄球菌10.5--根霉11.0--曲霉10.5--青霉---酿酒酵母12.0--②抑菌圈直径大小的测定表2-1葡萄多糖抑菌圈直径（mm）③最小抑制浓度的测定供试菌种葡萄多糖浓度(μg/mL)100502512.56.253.1751.563枯草芽孢杆菌----+++++大肠杆菌---+++++++++金黄色葡萄球菌--++++++++++根霉---++++++++曲霉--+++++++++++青霉++++++++++++++++++酿酒酵母---++++++注：“-”表示无菌生长；“+”表示有少量菌落生长；“++”表示超过1/3平皿面积的菌落生长；“+++”表示有不超过1/2平皿面积菌落生长；“++++”表示有超过1/2平皿面积的菌落生长第三章葡萄多糖抑菌特性的初步研究3.1不同温度对葡萄多糖抑菌活性的影响温度/℃255075沸水抑菌圈直径/mm13.013.514.517.03-1不同温度对葡萄多糖抑菌活性的影响3.2不同pH值对葡萄多糖抑菌活性的影响pH抑菌圈直径/mm枯草芽孢杆菌根霉3--4--513116-127--8--9--表3-2不同pH值对葡萄多糖抑菌活性的影响3.3葡萄多糖对致病菌作用时间与抑菌圈的关系表3-3不同浓度的葡萄多糖溶液对枯草芽孢杆菌的抑制率(%)时间/h浓度/μg·mL-113691210081.0085.0089.0090.0091.005079.0080.0083.0084.0085.002575.0078.0080.5081.0084.0012.572.0073.0078.0080.0081.006.2569.0071.0077.0077.0076.003.1268.0070.0074.0076.0075.005060708090100136912时间/h对枯草芽孢杆菌的抑制率/%100ug/ml50ug/ml25ug/ml12.5ug/ml6.25ug/ml3.12ug/ml3.3葡萄多糖对致病菌作用时间与抑菌圈的关系表3-4不同浓度的葡萄多糖溶液对大肠杆菌的抑制率(%)时间/h浓度/μg·mL-113691210090.5094.0098.0099.0099.005089.0091.0092.0093.0097.002585.0089.0090.0091.0095.0012.582.0085.0089.0090.0091.006.2579.0082.0088.0089.0090.003.1277.0081.0083.0088.0089.00020406080100120136912时间/h对大肠杆菌的抑制率/%100ug/ml50ug/ml25ug/ml12.5ug/ml6.25ug/ml3.12ug/ml结果与分析1)应用水提醇沉法，从新疆无核白葡萄中提取葡萄粗多糖。2)对供试菌种进行了扩增培养。3)应用琼脂扩散滤纸片法对葡萄多糖进行抑菌试验，结果显示：葡萄多糖对枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、根霉、酿酒酵母有明显的抑制作用，对金黄色葡萄球菌、曲霉有一定的抑制作用，对青霉无抑制作用；随着葡萄多糖浓度的增加，其抑菌效果也呈上升趋势。4)对葡萄多糖进行抑菌特性试验，结果显示：①由表3-1可知，温度越高，葡萄多糖抑菌效果越明显，因为温度越高，葡萄多糖有浓缩趋势，另外细菌有一定的敏感性。②从表3-2可知，pH值对葡萄多糖抑菌有较明显的影响，偏酸性的pH更有利于抑菌，在pH值5～6范围内，葡萄多糖抑菌效果较好。③在相同时间内，葡萄多糖溶液浓度越高，抑菌率也就越高，同一浓度的溶液作用时间越长，抑菌率也就越高。对革兰氏阳性菌的抑制作用可能要高于革兰氏阴性菌。