4、血液凝固

第三讲血凝及抗凝主讲：程天印一、血液凝固1、定义：血液由溶胶状态变成凝胶状态的过程。2、血液凝固参与的因子繁多、过程复杂。二、凝血因子1．定义：血浆或组织中直接参与凝血的物质。有十二个。2．特点：①除组织凝血因子III外，其它都是血浆中正常成分②大多无活性③因子II、VII、IX、X由肝脏合成，需VitK参与三、凝血过程1．基本步骤1）凝血酶原激活物（Xa—Ca—PF3—V）的生成2）凝血酶原————凝血酶3）纤维蛋白原———纤维蛋白2、凝血酶原激活物形成途径1）内源性凝血：心血管内皮损伤引起，XII启动、参与因子全在血液中。有表面激活、磷脂表面和纤维蛋白形成三阶段。2）外源性凝血：III启动、组织损伤3．特点：VIII和V为辅助因子若缺乏血凝减慢。P10P9四、血液凝固的相关问题1、血液凝固的本质血液凝固的本质就是纤维蛋白原分解出纤维蛋白，许多的纤维蛋白再相互连结成多聚体。2、纤维蛋白原纤维蛋白原是一个糖蛋白，是由两个相同组分组成的二聚体。每个组分都含有αβγ三条链。两个组分借两γ链8、9Cys和两α链28Cys形成三个二硫键连接。在凝血酶的作用下，α、β链分别在16和14处断裂，释放出两个3、丝氨酸蛋白水解酶：凝血酶（IIa)、XIIa、XIa、IXa、Xa、VII都是丝氨酸蛋白水解酶。具有Kunitz结构物质可抑制丝氨酸蛋白水解酶。纤维蛋白原的结构示意图4、血小板在凝血过程中作用重要血液凝固的反应必须在膜上才能进行，没有血小板聚集来提供表面，血凝不可能发生、继续。1）血小板的结构：血小板无核的细胞，有细胞膜、细胞质。①细胞膜表面有多种糖蛋白（GP)，如GPIa、GPIb、GPIIa、GPIIb、GPIIa、GPIV、GPV和GPIX等。有些以复合物形式存在，如，GPIa-IX,GPIIb-IIIa。上述的GPIa-IX是vWF和凝血酶受体；GPIa-IIa是胶原的受体；GPIIb-IIIa是纤维蛋白原、vWF、纤维连接蛋白的受体。②胞质：膜内侧是三层细丝状结构：微管、微丝和膜下细丝。微管是使血小板的骨架，它维持血小板形状；微丝含有肌动蛋白、肌球蛋白，它们和肌肉一样具有收缩能力。血小板中除含有细胞器外，含含有大量的颗粒，其中的α-颗粒中含有V因子、III因子、纤维蛋白原等；δ-颗粒含有ADP、Ca2+等。③血小板还有OCS和DTS系统。OCS相当于肌细胞的横管系统，DTS相当于肌细胞的纵管系统。2）血小板在凝血过程中的作用①粘附：血浆中含有vWF。当血管损伤时，内皮下的胶原暴露，vWF结合上去结合。由于GPIb-IX是vWF的受体，血小板便粘附。粘附引起血小板活化。②聚集:活化后，血小板膜上的GPIIb-IIIa露出受体功能基团，该基团与纤维蛋白的RGD连结，继而发生血小板聚集。纤维蛋白原有αβγ亚基组成，α亚基N、C端各有一个RGD，γ亚基C端有一个十二肽。③释放：活化的血小板内的微丝收缩，导致释放ADP（致聚剂），加剧聚剂反应。3）影响血小板聚集的多肽①植物希腊有一种葱（Alliumporum)。其根茎中有一种多肽（含Phe-Asp-Ser-Thr-Arg-Pro）。②动物（如，蜱）TAI是从毛白钝缘蜱分离出的、分子量为15KDa的蛋白分子，它能与抗Ia-IIa复合物的单克隆抗体竞争的结合(KacrzewskiJ,1993)。Savignyrin（MansBJ,2002）和Variabilin（WangX,1996）是两个特殊的血凝抑制因子，它们氨基酸序列中均含Arg-Gly-Asp（即RGD基元）。Disagregin序列中不含RGD基元，但却同样能与血小板上的GpII/IIIa结合（KacrzewskiJ,1994)。Moubatin得自毛白钝圆蜱唾液腺，分子量17kDa，它通过抑制ADP和THA2活性，而障碍胶原诱导的血小板聚集的第二阶段（Waxman,1993）。Longicronin也有类似的功效,我国学者程远国（1999）从长角血蜱唾液腺纯化的。Longicronin分子20kDa，N端序列为Asp-Asn-Trp-Ser-Thr-Gly-Glu-Glu-Pro-Val-Met-Val-Ser-Phe-Leu。Apyrase，即ATP二磷酸水解酶，广泛存在于吸血节肢动物的唾液腺中。Mans发现在蜱萨氏钝圆蜱唾液中有Apyrase（1998）。程远国（2000）从长角血蜱的唾液腺提纯的Apyrase分子量66kDa。Apyrase具有水解ATP和ADP，进而阻止ADP诱导血小板聚集的作用。5、影响其他凝血因子的多肽①从海绵分离II因子抑制剂Fusetani从海绵分离到3种多肽（Arg-Pro-Ile-氨基丁酸），它抑制凝血酶活性。②从蜱分离的II因子抑制剂有：Americanin、Madanin-1、Madanin-2、NTI-1、NTI-2。③从蜱分离V和VII抑制多肽从萨氏钝圆蜱唾液腺抽提BSAP-1和BSAP-2，BSAP不与VII发生作用，但与膜结合。外源性途径生成的激活物发挥作用需要组织细胞膜。1991年，GordonJR发现安氏革蜱的唾液腺抽提物具有抑制V和VII的活性、影响外源性凝血过程的作用。④从蜱分离X抑制多肽TAP（TickAnticoagulantPeptide，TAP）是人类得到的第一个蜱唾液腺源抗凝血分子，具有通过选择性地与血凝因子Xa结合而抑制血液凝固作用。在肩突硬蜱唾液腺抽提物中有一个X因子抑制家族，目前人们已从中分离除了三个，Salp9.8、Salp14和Salp9Pac,(NarasimhanS,2002)。嗜驼璃眼蜱稚蜱唾液腺提到一个15kDa的多肽，它能与FXa上的两个位点非竞争结合（IbrahimMA,2001）。6、分子生物学技术与抗凝1)目前人们表达了许多抗凝血分子：1990，Waxmam，rTAP1993，Keller，rMoubatin1998，Joubert，rfXaI2002，Francischetti，Ixolaris。2）Aptamer2002，Edwardtuddenham，从RNA文库，发现一个Aptamer，它可以选择性地结合到启动血液凝固的蛋白质上。