烟草花叶病对烟草光谱特性的影响

河南农业大学硕士学位论文烟草花叶病对烟草光谱特性的影响姓名：刘大双申请学位级别：硕士专业：烟草学指导教师：刘国顺20090501烟草花叶病对烟草光谱特性的影响作者：刘大双学位授予单位：河南农业大学相似文献(7条)1.期刊论文郭成瑾.商文静.商鸿生.GUOCheng-jin.SHANGWen-jing.SHANGHong-sheng壳寡糖诱导对烟草花叶病病情发展的影响-西北农业学报2006,15(4)在温室控制条件下,研究了壳寡糖诱导处理对烟草花叶病病情增长的影响.采用不同浓度的壳寡糖(10、50、100、150和200μg/mL)分别处理烟草后24h,再接种烟草花叶病毒(TMV),结果表明,壳寡糖处理使花叶病显症延迟,系统症状明显减轻.未喷药对照与壳寡糖处理的病情发展曲线都可拟合Logistic模型,但壳寡糖处理的模型参数不同.数据分析表明,达到5级严重度所需天数、病害严重度降低率和病情发展曲线下面积(AUDPC)都大幅度降低.在壳寡糖的各浓度间,以50μg/mL对病情增长的影响最大,其次为10μg/mL,其余浓度都较小.结果证明壳寡糖的作用特点符合系统诱导抗病性的性质.2.期刊论文徐秉良.商鸿生.王旭黄瓜花叶病毒和烟草花叶病毒在双抗转基因线辣椒内的增殖-中国病毒学2002,17(3)本试验以转化CMV-CP和TMV-CP基因的转基因线辣椒纯合系植株作为研究试材,比较了单独或混合接种CMV和TMV后,转化线辣椒的抗病性表达特点,并测定了两种病毒在植株体内的病毒含量.结果表明:转化线辣椒不仅能抵抗CMV和TMV的单独侵染,而且还能抵抗CMV和TMV的复合侵染.转化线辣椒表现为系统症状延迟出现7-15d,显症株率和病害严重度级别大幅度降低,CMV和TMV在接种叶、新生叶中的病毒含量明显减低.转基因线辣椒原生质体作为研究试材接种CMV,测定病毒含量结果表明:CMV病毒的增殖在转基因线辣椒原生质体内受到明显抑制.在CMV接种浓度为40μg/mL,感染原生质体48h后,CP(-)植株原生质体内CMV是CP(+)的4.2倍.这一结果揭示了转基因线辣椒具有抑制病毒增殖的抗病性.3.期刊论文商文静.吴云锋.赵小明.杜昱光.商鸿生.SHANGWen-jing.WUYun-feng.ZHAOXiao-ming.DUYu-guang.SHANGHong-sheng壳寡糖诱导烟草抑制TMV增殖的研究-西北农林科技大学学报（自然科学版）2006,34(5)采用ELISA-DSM法和半叶枯斑法,研究了壳寡糖诱导对普通烟(Nicotianatabacum)体内TMV增殖的影响.结果表明,普通烟经50μg/mL壳寡糖溶液诱导处理后,其对TMV的侵染表达了高水平的系统抗病性,显症推迟4～7d,平均严重度降低了82.9%.ELISA-DSM法检测结果表明,壳寡糖诱导处理的普通烟植株体内病毒浓度明显降低;在接种后10d,接种叶片OD值仅为0.400,相当于同期不诱导对照的23.0%;新生叶片OD值为0.190,相当于同期不诱导对照的38.7%.以发病普通烟叶片为接种体,利用半叶法接种心叶烟(Nicotianaglutinosa),结果表明,壳寡糖诱导处理大大减少了枯斑数目;以接种后10d的壳寡糖处理叶片为接种体,平均半叶枯斑数为9.25,仅为不诱导对照的19.5%;以同期新生叶为接种体,平均半叶枯斑数为0.630,为不诱导对照的25.0%.以上两种方法的检测结果均证明,壳寡糖诱导处理可以有效抑制普通烟体内的TMV增殖.通过对壳寡糖(低分子质量)处理与壳聚糖(高分子质量)处理的比较发现,分子质量的差异不影响其对病毒增殖的抑制效果.4.学位论文张会敏辣椒CTOM1基因的克隆与基因沉默表达质粒的构建2004利用5'RACE和3'RACE方法从辣椒中克隆到CTOM1基因,其全长cDNA共1244个碱基对,编码一个由282个氨基酸组成的六次跨膜蛋白.CTOM1与拟南芥TMV寄主因子基因AtTOM1在核苷酸水平有65.2％的同源性,在氨基酸水平上有74.9%的同源性;与番茄CMV寄主因子基因TTOM1在核苷酸水平上有81.7%的同源性,在氨基酸水平上有91.7%的同源性,表明CTOM1很可能也是辣椒RNA病毒的寄主因子基因.构建了研究该基因功能的三种质粒:基于CTOM1基因的近5'端序列的反义RNA植物表达质粒;基于CTOM1全长cDNA的pTV00:CTOM1病毒表达质粒和基于CTOM1cDNA片段的RNAi表达质粒.用三亲结合方法将上述质粒导入农杆菌,并用于转化辣椒天等一号和桂研99外植体,获得转CTOM1RNAi表达质粒阳性天等一号转基因植株22株、转CTOM1反义RNA载体抗卡那霉素小苗12株和转CTOM1反义RNA质粒的桂研99抗卡那霉素小苗19株.用烟草花叶病毒接种转CTOM1RNAi阳性植株,在观察期15天内,未观察到症状表现,而非转基因植株在第9天已显示明显症状,表明CTOM1功能的干扰能导致植株抗病毒能力的提高,暗示CTOM1可能是一个与烟草花叶病毒在辣椒中复制与维持相关的寄主因子基因.5.期刊论文徐秉良.商鸿生.王旭双抗转CP基因线辣椒对非克隆病毒的抗病性-兰州大学学报(自然科学版)2002,38(4)本试验以转化黄瓜花叶病毒外壳蛋白基因(CMV-CP)和烟草花叶病毒外壳蛋白基因(TMV-CP)的线辣椒纯合系作试材,比较了转化植株对接种CMV非克隆株系后抗病性的变化以及转化植株对接种PVX,PVY和TEV等非克隆病毒后的抗病性变化.结果表明:转化线辣椒能抵抗CMV非克隆株系的侵染,抗病表达特点为系统症状延迟出现,显症株率和病害严重度级别大幅度降低,接种叶片与新生叶片中的病毒含量明显减少.对PVX,PVY和TEV等非克隆病毒也表达了相同的抗病特点.6.期刊论文吕典秋.李学湛.何云霞.白艳菊.张儒喜.朱财烟草花叶病毒(TMV)和马铃薯X病毒(PVX)的提纯及抗血清的制备-中国马铃薯2000(4)在温室内将提纯的TMV和PVX病毒,通过摩擦接种在普通烟(NicotianatabacumL.)上做为繁毒植物.通过PEG沉淀和差速离心,获得提纯病毒.病毒含量分别为21.42mg/100g鲜重和24.50mg/100g鲜重.在紫外分光灯下测定OD值,分别在248nm(TMV)和246nm(PVX)为最低,260nm为最高.消光系数OD260/280分别为1.20和1.22.提纯抗原进行回接试验,指示植物产生明显症状,用Freund佐剂分三次肌肉免疫家兔,所得抗血清效价为1∶2048,然后利用(NH4)2SO4提取球蛋白,并利用HRP进行酶标记,制备出的抗血清现已应用于生产.7.学位论文曾蓉黄瓜花叶病毒基因组RNA的定量分析2007黄瓜花叶病毒(Cucumbermosaicvirus,CMV)作为典型的+ssRNA病毒，是寄主最多、分布最广、对农作物危害最为严重的植物病毒之一；该病毒为三分体病毒，基因组分布在3条RNA分子上。因此基因组结构简单，足研究RNA病毒在寄主上致病机制的模式病毒之一。本文就CMV与小西葫芦黄化花叶病毒(Zucchiniyellowmosaicvirus，ZYMV)的协生作用、CMV与番茄花叶病毒(Tomatomosaicvirus.ToMV)在番茄上的互作、以CMV为辅助病毒的一卫星RNA的功能和CMV病毒粒子中各基因组RNA的绝对量进行了研究。1.黄瓜花叶病毒与小西葫芦黄化花叶病毒协生作用的研究病毒复合侵染发生在植物或动物上，被侵染组织通常表现出比单种病毒侵染更严重的症状和一种或两病毒积累量的增加。CMV和ZYMV复合侵染是植物病毒比较典型的协生作用，该研究从宏观和微观不同角度的研究了两病毒的协生关系。研究发现，两病毒复合侵染寄主后，较单独侵染时明显症状加重、病情指数(diseaseindex，DI)增加。Real-timeRT-PCR结果显示，复合侵染后两寄主的CMV-Fny各基因组都有不同程度的影响，在35dpi，黄瓜上的CMV-Fny各ORF为单独侵染的1.48，2.24，2.51，0.99倍，瓠瓜上CMV-Fny各ORF为单独侵染的15.14，4.90，3.16，2.57倍；黄瓜和瓠瓜ZYMV的基因组RNA为单独侵染的90％和22％。本研究以real-timeRT-PCR为技术平台，首次精确的量化了单独和复合侵染时各病毒RNA基因组在两种葫芦科作物上的基因时序变化，建立了一种以18SrRNA为内参照的RNA相对定量方法。2.黄瓜花叶病毒与番茄花叶病毒在番茄上的互作的研究病毒间的干扰作用也十分常见，通常表现为一病毒影响另一病毒的复制、运输、装配等。该试验有关CMV与ToMV在番茄上的互作的结果显示：在预先接种CMV-Fny的番茄植株一段时间后，植株便获得了抵抗强毒ToMV-N5侵染的能力，不表现强毒在寄主上的症状。本试验对CMV和ToMV两病毒单独、复合侵染后，寄主生物反应、生理量、病毒积累等初步的研究，为探讨CMV和烟草花叶病毒的复合侵染提供研究方法和理论基础。3.黄瓜花叶病毒卫星RNA番茄分离物的功能初步研究从浙江省湖州市番茄样品中，分离到一携带卫星RNA的CMV。本研究克隆了该卫星RNA，并且将其与CMV-Fny假重组于烟草、番茄和西葫芦中，分析该卫星的存在对辅助病毒症状的调控情况，并采用实时荧光定量PCR分析该卫星RNA对CMV-Fny各个基因组积累量的影响。试验结果显示：Tlsat能延缓或减轻CMV-Fny在烟草的症状反应；添加卫星Tlsat后，使得CMV-Fny在番茄上症状加重；CMV-Fny和CMV-Fny+Tlsat在西葫芦上均引起花叶皱缩症状，在西葫芦中Tlsat对CMV-Fny的症状没有影响。对与Tlsat与CMV假重组后对不同寄主体内CMV各基因组RNA的定量结果检测发现：Tlsat均抑制辅助病毒在烟草和番茄基因组的积累量，但在番茄寄主中病毒基因组含量受到抑制效应更明显；而西葫芦中，CMV-Fny基因组积累量不受Tlsat的影响。我们推测CMV-Fny在寄主上的不同症状可能与病毒基因组含量不相关。4.黄瓜花叶病毒病毒粒子中各基因组RNA的绝对量的分析CMV为三分体RNA病毒，各基因组RNA分别包被于3种不同的病毒蛋白外壳内。根据以前的报道，多分体病毒各基因组RNA的量与病毒的致病性相关。本研究首先通过体外转录所得高纯度的RNA梯度稀释，建立了相应的标准曲线方程，得到病毒RNA浓度对数值(copies/μl)与荧光阈值(Ct值)成线性关系的一元回归方程；然后根据CMV-Fny病毒粒子各基因组RNA的Ct值计算得出各基因组RNA在病毒粒子种的确切拷贝数，CMV-Fny病毒粒子中各基因组RNA的量比值为，RNA1:2:3:4=1.00:(1.17±0.11):(3.58±0.20):(5.81±0.31)。本试验还辅以Lab-on-a-Chip和Northernblot杂交两种RNA定量的检测方法，并获得了与real-timeRT-PCR一致的结果。本研究也以real-timeRT-PCR为技术平台，首次精确定量了三分体病毒CMV-Fny各基因组RNA的在其病毒粒子中的比例，建立了一种用标准曲线的绝对定量方法，为多分体病毒的定量方法提供实践参考和理论依据。本文链接：授权使用：苏延科(wfxnny)，授权号：0f0c7954-20e7-4174-bf0d-9e9200aa0e21下载时间：2011年2月22日