TLC分离定性

TLC分离定性一、实验目的•1、了解薄层色谱法分离有机物的方法。•2、掌握薄层色谱法的实验操作技术二、基本原理•薄层色谱法是利用混合物中各组分在某一物质中的吸附或溶解性能的不同，或和其它亲和作用性能的差异，使混合物的溶液流经该种物质，进行反复的吸附或分配等作用，从而将各组份分开。薄层色谱是一种微量、快速和简便的色谱方法。由于各种化合物的极性不同，吸附能力不相同，在展开剂上移动，进行不同程度的解析，根据原点至主斑点中心及展开剂前沿的距离，计算比移值（Rf）：三、操作过程TLC点样显色计算Rf值展开四、实验操作•1、选择吸附剂•（1）硅胶：微酸性极性固定相，适用于酸性、中性物质分离（可制备成酸性不同或碱性硅胶扩大使用范围）。•（2）氧化铝：碱性极性固定相，适用于碱性、中性物质分离（可制备成中性或酸性氧化铝扩大使用范围）。•（3）纤维素：含有羟基的极性固定相，适用于分类亲水性物质。•（4）聚酰胺：含有酰胺基极性固定相，适用于酚类、醇类化合物的分离。•最常用的吸附剂是硅胶G（含有煅石膏作黏合剂）、硅胶H（不黏合剂或其他添加剂）、硅胶HF254（含有荧光剂，可在254nm紫外光下观察）、硅胶GF254（含有煅石膏和荧光剂），其次有硅藻土、硅藻土G、氧化铝、氧化铝G、微晶纤维素、微晶纤维素F254等。•吸附剂颗粒大小,一般要求直径为10～40μm。薄层涂布,一般可分无粘合剂和含粘合剂两种;前者系将固定相直接涂布于玻璃板上,后者系在固定相中加入一定量的粘合剂，一般常用10～15％煅石膏(CaSO4.2H2O在140℃烘4小时)，混匀后加水适量使用，或用羧甲基纤维素钠水溶液(0.5～1.0％)适量调成糊状，均匀涂布于玻璃板上。2、薄板的制备在一平面支持物(通常为玻璃)上，均匀地涂制硅胶、氧化铝或其他吸附剂薄层、样品的分离、检测就在此薄层色谱板上进行。一般选用适当规格的表面光滑平整的玻璃板。常用的薄层板规格有：10cm×20cm、5cm×20cm、20cm×20cm等。称取适量硅胶，加入0.2％～0.5%羧甲基纤维素钠溶液（CMC-Na），充分搅拌均匀，进行制板。一般来说10cm×20cm的玻璃板，3～5g硅胶/块；硅胶与羧甲基纤维素钠的比例一般为1：2～1：4。制好的玻璃板放于水平台上，注意防尘。。1、吸附剂薄层，2、涂布槽，3、玻璃夹板，4、玻璃板，5、玻璃夹板•3、薄层板的活化将涂好的薄层板水平放置于室温下晾干后（应避免阳光直射，以防开裂），放在烘箱内加热活化。硅胶板需在烘箱内慢慢升温至105-110度后保温30分钟；氧化铝板需在200-220度烘4小时，可得到活性I级的薄板，吸附层的活性随含水量的降低而增加。活化好的薄板应保存在干燥器中备用。•4、点样将试样用适当的溶剂溶解制成0.5%~1%的式样点样量要根据薄层厚度、试样和吸附剂性质、和显色剂的灵敏度以及定量测定的方法，来确定。点样的方法与纸层析相似。但点样是切勿戳破薄层，以免影响层析效果。速度快防止薄层吸湿而降低活性。点样后要用冷风或者热风吹去溶剂•注意：•用微量进样器进行点样。点样前，先用铅笔在层析上距末端lcm处轻轻画一横线，然后用毛细管吸取样液在横线上轻轻点样，如果要重新点样，一定要等前一次点样残余的溶剂挥发后再点样，以免点样斑点过大。一般斑点直径大于2mm，不宜超过5mm.底线距基线1～2．5cm，点间距离为lcm左右，样点与玻璃边缘距离至少lcm，为防止边缘效应，可将薄层板两边刮去1～2cm，再进行点样。•5、展开展开剂的选择与柱色谱洗脱剂类似。展开剂的极性增大次序为：石油醚环己烷二硫化碳四氯化碳二氯乙烯苯二氯甲烷氯仿乙醚四氢呋喃乙酸乙酯丙酮丁酮正丁醇乙醇甲醇水冰醋酸吡啶有机酸。要求所选的展开剂对薄层吸附剂有一定亲和力，能把被分离物从吸附剂表面解析下来，但又不能过强，否则被解析下来的物质不易再吸附。当单一溶剂不能满足要求时，可用多元混合溶剂作展开剂。•薄层层析有多中展开方式，可分为上行、下行、双向展开等。展开时均需在密闭的容器（展开缸）中进行，且该容器内应使流动相的蒸气饱和。6、显色展开后的薄板晾干溶剂后可采取若干方法对板上的组分进行定位。（1）光学检测：对于无色样品，可采用带荧光剂的吸附剂做薄板，展开后在紫外光（254nm或365nm）下显暗色斑点。优点是方便、不破坏被检测物质。（2）碘蒸气法：对于在光学条件下不显色的物质，可将薄板置于含有少量碘晶体的密闭容器中。许多物质能与碘可逆地作用呈棕色斑点。•（3）试剂显色：必须根据被分析化合物的性质来选择某一显色剂，以喷雾方式直接喷到薄层板上可显示不同颜色的斑点。某些显色剂喷了以后还要在80-100度加热几分钟才能显色，如茚三酮与氨基酸的显色反应。•（7）计算Rf值Rf值随被分离物质的结构、固定相及流动相的性质、温度和薄板的活化程度等因素不同而变。当实验条件一定时，任何一个特定化合物的Rf值是一个常数。这也是为什么薄层色谱能定性分析的依据。点样原点Rf值的计算很简单，只要用尺测量原点到色斑中心的距离除以原点到溶剂前沿的距离即可。ba溶剂前沿点样原点色斑中心Rf=原点到色斑中心的距离原点到溶剂前沿的距离=ab四、注意事项•1、薄层板的制备是实验的关键点之一。铺板必须厚薄均匀一致，不能开裂。•2、点样的圆点必须小且浓度要高些，但不能太高，以免引起拖尾现象。•3、点样后要等溶剂挥发尽才能将薄板放入展开缸中展开。•4、展开结束后，取出薄板要立刻用铅笔画下溶剂前沿。谢谢观看