32、钙镁磷的测定

实验十七偶氮胂Ⅲ法测血钙血浆中约含钙2.1mmol/(8.4～10.2mg/dl)，以三种形式存在：①非扩散钙(non-difusionalcalcium)：是指与血浆蛋白相结合的钙，占血浆总钙的45%；②离子钙(ioncalcium)：是具有生理活性的部分，约占血浆总钙的50%；③络合钙(chelatingcalcium)：主要指与枸橼酸结合的钙，是体内钙的一种运输方式，约占血浆总钙的5%左右。钙离子和络合钙都能透过毛细血管壁，故统称为扩散钙。血钙的测定方法很多，一般可分为总钙测定和离子钙测定法。前者包括同位素稀释质谱法(isotopedilutingmassspectrometry)、原子吸收光谱法(atomicabsorptionspectroscopy，AAS)、分光光度法(spectrophotography)和络合滴定法(chelatingtitration)等。AAS是最常用的准确测定血浆总钙含量的参考方法，但费用昂贵，不适于常规工作；分光光度法中以甲基百里香酚蓝比色法（methylthymolbluecolorimetry）和偶氮胂Ⅲ比色法（ArsenazoⅢcolorimetry）最常用。络合滴定法简便易行，但判断终点受主观因素影响，有被淘汰趋势，但不少基层实验室仍延用。离子选择电极法测定离子钙已在临床广泛应用。分光光度法已被广泛用自动生化分析议分析。【实验原理】在碱性条件下，样品中钙与偶氮胂Ⅲ作用生成蓝色复合物，其颜色深浅与钙浓度成正比，通过在660nm波长处测定吸光度的变化值，与经过同样处理的钙校准液进行比较，即可计算出样品中钙含量。【操作步骤】测定管（U）标准管（S）空白管（B）试剂（ml）2.02.02.037℃恒温5分钟蒸馏水（ml）----0.02标准液（ml）--0.02--血清0.02----混匀，37恒温2分钟，660nm波长，以空白管调零，测定各管吸光度。【计算】样品钙含量（mmol/L）=×2.50【参考范围】血清钙：2.1～2.6mmol/L【临床意义】（1）低钙血症见于①摄入不足和吸收不良：慢性脂肪性腹泻、阻塞性黄疸；②需要增加：妊娠后期及哺乳期妇女；③吸收减少：佝偻病、甲状旁腺功能减退症；④肾脏疾病：急、慢性肾衰竭、肾病综合征、肾小管性酸中毒；⑤坏死性胰腺炎。（2）高钙血症见于①摄入钙过多：静脉用钙过量、大量饮用牛奶等；②原发性甲状旁腺功能亢进症、肾癌等使血钙升高；③服用维生素D过多，钙吸收作用增强；④骨病：变形性骨炎、转移性骨癌、多发性骨髓瘤等，骨溶解增加；⑤具有异位内分泌作用的肿瘤；⑥长期制动引起骨骼脱钙。标准管吸光度测定管吸光度【评价】1.线性范围：0.00～6.00mmol/L，γ≥0.99。2.精密度：批内、批间平均CV分别≤5.0%3.准确度：不准确度≤10%4.试剂空白吸光度值≤0.35。【注意事项】1.样品中钙含量超过5.00mmol/L，则用生理盐水稀释后测定，结果乘以稀释倍数。2.测试温度无严格规定，但色素对温度敏感，应保持反应体系恒温。3.高脂样本会引起测定结果假性升高，可用样本空白管校正。4.反应形成的色素可稳定2小时。5.所用试验器材必须清洁，没有钙污染。6.试剂与样品量可根据需要按比例改变。7.试剂使用后立即关紧瓶盖，避免污染。8.使用肝素作为抗凝剂时浓度不能太高，每毫升血液中肝素浓度应小于50单位。不能使用草酸盐、枸橼酸盐、EDTA等作抗凝剂。实验十七钙镁试剂比色法测血镁【目的要求】1.掌握比色法测血镁2.熟悉血镁测定的其他方法【实验原理】血清中的镁在碱性条件下，与金属色原染料钙镁试剂（calmagite)反应生成紫红色络合物。颜色深浅与美的浓度成正比，与同样处理的标准品比较，可以求得镁的含量。【操作步骤】测定管（U）标准管（S）空白管（B）试剂（ml）2.02.02.037℃恒温5分钟蒸馏水（ml）----0.02标准液（ml）--0.02--血清0.02----混匀，37恒温2分钟，540nm波长，以空白管调零，测定各管吸光度。【计算】样品镁含量（mmol/L）=×1.0【参考范围】血清镁：0.67～1.04mmol/L【评价】1.线性范围：2.0mmol/L±10%。2.精密度：批内、批间平均CV分别≤5.0%3.准确度：不准确度≤10%4.试剂空白吸光度值≤1.10。标准管吸光度测定管吸光度【注意事项】1.试剂与样品量可根据需要按比例改变。2.测试温度无严格规定，但色素对温度敏感，应保持反应体系恒温。3.高脂样本会引起测定结果假性升高，可用样本空白管校正。4.反应形成的色素可稳定1小时。5.所用试验器材必须清洁，没有镁污染。6.所用试剂具有毒性和腐蚀性，请勿用口吸吸管，如有污染，应立刻用大量流水冲洗。实验十八还原钼蓝法测血清磷血液中的磷(phosphorus)主要有两种形式：有机磷和无机磷。血清无机磷含量与血钙有一定关系，两者浓度的乘积为一常数（以mg/dl浓度计算，乘积等于40）。磷参与机体糖、脂类及氨基酸的代谢，是骨盐的主要成分，也是转运能量的物质，磷酸盐是调节酸碱平衡的重要缓冲体系之一。【目的要求】1.掌握此法测血磷的原理。2.熟悉血磷测定的其他方法【实验原理】利用磷在酸性溶液中与钼酸铵反应生成磷钼酸复合物，用对甲氨基酚硫酸盐还原生成钼蓝，与同样处理的标准液进行比色，可求得血磷的含量。试剂中加入聚山梨酯-80以抑制蛋白质干扰。【操作步骤】测定管（U）标准管（S）空白管（B）去离子水（ml）----0.1磷标准液（ml）--0.1--血清0.1----显色液（ml）4.04.04.0混匀，37恒温10分钟，650nm波长，以空白管调零，测定各管吸光度。【计算】样品磷含量（mmol/L）=×1.29【参考值】成人0.97～1.62mmol/L；儿童1.45～2.10mmol/L【临床意义】1.低磷血症见于①摄入不足和吸收减少：饥饿或恶病质、吸收不良综合征、呕吐、腹泻、长期应用含铝的制剂等；②磷转移入细胞内：静脉注射葡萄糖、胰岛素及碱中毒、妊娠等；③丢失过多：血液透析、肾小管酸中毒、急性痛风等；④其他：如酒精中毒、糖尿病酮症酸中毒、维生素D缺乏症等。2.高磷血症见于甲状旁腺功能减退症、维生素D过多症、Addison病、肢端肥大症、多发性骨髓瘤等。标准管吸光度测定管吸光度体重约见5%的无机盐主要有Ca、Mg、K、Na、P和Cl，这六种无机元素约占体内无机盐总量的60%~80%，主要存在于体液。无机离子的测定方法主要有火焰光度法、化学测定法、离子选择电极法、代谢物酶试剂法等。其中离子选择电极法标本用量少（100μl全血）,1min出结果，快而准确，操作简便，是目前广为临床使用的方法。