附表2职业暴露人群血清标本登记表-永州疾病预防控制中心

1永州市2009年职业暴露人群高致病性禽流感监测方案为做好我市人感染高致病性禽流感的防控工作，圆满完成2009年职业暴露人群高致病性禽流感监测工作任务，根据湖南省《关于开展职业暴露人群高致病性禽流感监测工作的通知》（湘疾控2009[31]号）精神和国家《职业暴露人群高致病性禽流感监测方案》要求，结合我市实际，制定本方案。一、监测目的1、了解职业暴露人群高致病性禽流感病毒（H5N1）的感染状况。2、了解高致病性禽流感病毒在环境中的分布情况。二、监测点的设置1、冷水滩区仁湾镇：家禽散养户集中的地区。2、江华县东田镇：野生候鸟栖息地。三、监测内容和方法（一）职业暴露人群血清流行病学监测1、监测对象（1）家禽散养户的家庭成员。（2）野生候鸟栖息地中与候鸟或其排泄物有接触的人员。2、监测时间与数量于每年3月底、12月底各监测一次，每次采样50份血清样品。23、监测方法（1）流行病学调查收集调查对象的基本情况、禽类接触史等内容，填写“职业暴露人群血清流行病学监测调查问卷”（见附表1），与血清标本同时寄送永州市疾病预防控制中心。（2）标本采集、运送采集监测对象的空腹静脉血5ml，填写“职业暴露人群血清标本登记表”（见附表2）。分离血清，无菌条件下分装为3份，1周内将标本及登记表送永州市疾病预防控制中心流感监测实验室。标本应置－20℃或以下冻存，避免反复冻融，运输时遵守国家生物安全的有关规定。（3）实验室检测永州市疾病预防控制中心流感监测实验室应用单放射免疫扩散溶血实验（SRH）和/或马血球血凝抑制实验（HI）进行H5N1抗体检测（见附件2）。标本采集后要求1个月内完成检测工作，填写“职业暴露人群血清流行病学检测结果表”（见附表3），检测结束后1周内将检测结果报湖南省疾病预防控制中心。（二）环境标本高致病性禽流感病原学监测1、监测对象职业暴露人群血清流行病学监测点的水、禽类（含候鸟）粪便及笼具表面等环境标本。32、监测时间每年的1、4、7、10月各采集标本1次。3、监测方法（1）标本采集两个监测点至少每个季度采集标本1次，每次采集各类标本至少10份（应分布在不同场所），同时填写“环境标本采样登记表”（附表4）。标本采集种类及方法（见附件1）。（2）标本运输、处理标本采集后应在4℃条件下48小时内运送至永州市疾病预防控制中心感监测实验室。实验室收到标本后应立即进行标本处理（见附件1），并将标本分为3份，1份用于核酸检测，1份留样保存，1份备送湖南省疾病预防控制中心。留样标本要求在－70℃或以下冻存。标本运输时遵守国家生物安全的有关规定。（3）实验室检测永州市疾病预防控制中心流感监测实验室收到标本后1周内对标本进行流感病毒A和B型核酸检测，A型流感病毒核酸阳性标本进一步进行H5N1亚型检测，填写“环境标本病原学检测结果表”（附表5）。永州市疾病预防控制中心流感监测实验室每季度将“环境标本采样登记表”（附表4）和“环境标本病原学检测结果表”（附表5），报湖南省疾病预防控制中心。对于所有A型流感病毒核酸阳性的标本，永州市疾病预防控制中4心流感监测实验室在完成检测后24小时内将检测结果报告湖南省疾病预防控制中心，并及时将标本送湖南省疾病预防控制中心。四、职责分工及组织实施（一）湖南省疾病预防控制中心1、负责提供血清检测抗原和参考血清，对送检标本开展复核工作，并及时反馈结果。2、定期进行督导、考核及评估。每个监测年度结束后，向中国疾病预防控制中心提交全省的监测工作报告。（二）永州市疾病预防控制中心1、负责指导监测点开展监测工作，包括监测场所的选择、人员的技术培训和指导。2、对采集标本进行实验室检测，并及时提交检测结果。按监测方案的要求及时上送各类标本进行复核。3、及时收集、整理监测资料，汇总数据上报。4、每年向湖南省疾病预防控制中心提交年度监测工作总结。（三）冷水滩区和江华县疾病预防控制中心1、负责监测具体工作的实施，包括标本的采集以及数据收集、整理及上报。2、按监测方案的要求及时上送各类标本。3、每年向永州市疾病预防控制中心提交年度监测工作总结。五、附表和附件5附表1、职业暴露人群血清流行病学监测调查问卷附表2、职业暴露人群血清标本登记表附表3、职业暴露人群血清学检测结果表附表4、环境标本采样登记表附表5、环境标本病原学检测结果表附件1、标本的采集、处理、保存与运输附件2、实验室操作方法简介附件3、全国流感监测网络实验室名单编号规则6附表1、职业暴露人群血清流行病学监测调查问卷省市县编码□□□□□□血清标本编号一、一般情况1、姓名：（电话：）2、性别：①男性②女性3、年龄：周岁4、现住址：5、职业：①幼托儿童②散居儿童③学生（大中小学）④教师⑤保育员及保姆⑥餐饮食品业⑦商业服务⑧医务人员⑨工人○10民工○11农民○12牧民○13渔（船）民○14干部职员○15离退人员○16家务及待业○17其他○18不详二、暴露情况（可多选）6、职业暴露人群种类：①散养户②规模化养殖场从业人员③活禽批发市场人员④农贸市场或菜市场活禽交易人员⑤家禽屠宰加工厂人员⑥野生候鸟栖息地接触鸟类人员⑦其他7、暴露方式：①喂养②清扫禽舍③加工（宰杀、拔毛、洗切、腌制、烹饪）④食用⑤捕杀⑥运输⑦捕捉⑧销售⑨其他8、如为养殖人员，禽类养殖方式：①鸡羽1）散养2）圈养②鸭羽1）散养2）圈养③鹅羽1）散养2）圈养④鸽子羽1）散养2）圈养⑤其他羽1）散养2）圈养9、近一个月来，接触禽种类：①鸡②鸭③鹅④鸽子⑤野禽⑥其他10、所接触的禽类是否接种过禽流感疫苗？①是②否③不详11、近一个月以来，是否接触过病死禽？①是②否③不详（1）病死禽种类：①鸡羽②鸭羽③鹅羽④鸽子羽⑤其他羽（2）接触方式为：（可多选）①喂养②清扫禽舍③加工（宰杀、拔毛、洗切、腌制、烹饪）④食用⑤捕杀⑥运输⑦捕捉⑧其他7（3）接触病死禽时是否有防护措施？①是②否③不详如果有，采取的措施有：（可多选）①戴口罩（N95口罩、过滤口罩、棉纱口罩、一次性外科口罩）②戴面罩③穿防护服（规范、不规范）④防护眼镜⑤手套⑥帽子⑦白大衣⑧其它（4）接触病死禽的持续时间：天（月日到月日）累计暴露：小时12、近1个月是否出现过发热？①是②否③不详（1）发热起始时间月日，共持续天，最高体温℃（2）发热时是否伴有其它不适症状？①是②否③不详出现症状起始时间月日，共持续天，主要症状有：①头痛②咽痛③鼻塞④肌肉酸痛⑤腹痛⑥腹泻⑦其它13、近1年是否接种过流感疫苗？①是②否③不详调查人员单位：调查人员：调查日期：审核人员：审核日期：8附表2、职业暴露人群血清标本登记表采集地点：县（市、区）乡（镇）标本编号姓名年龄性别现住址采样日期标本量备注注：1.采集地点：填写标本采集地的禽类场所名称2.标本编号原则：（1）血清标本代号：B（2）08年（3）网络实验室流水号(4)实验室标本编号从001开始例如北京市疾病预防控制中心标本B0801001，浦东新区疾病预防控制中心标本B0817001采集人：采集单位：送检日期：9附表3、职业暴露人群血清流行病学检测结果表检测单位：1.检测方法：马血球HI（）、SRH（）2.使用抗原：参考血清名称：3实验结果标本编号检测结果标本状态备注HI滴度SRH直径注：1、标本状态：溶血，乳糜血，黄疸，血清少检测者：检测日期：复核者：10附表4、环境标本采样登记表采集地点：县（市、区）乡（镇）标本编号采集日期采集地点标本种类备注注：1.标本编号原则：（1）环境标本代号：C（2）08年（3）网络实验室流水号(4)实验室标本编号从001开始例如北京市疾病预防控制中心标本C0801001，浦东新区疾病预防控制中心标本C0817001采集人：采样单位：送检日期：11附表5、环境标本病原学检测结果表检测单位：采用的检测方法：One-stepPCR：RealtimePCR：1.One-step试剂盒2.Real-time试剂盒：3.引物来源：4．检测结果标本编号采样日期检测结果备注A型B型H5N1其他阴性操作者：检测日期：复核者：12附件1、标本的采集、处理、保存与运输（一）标本采集与处理1.血清标本取真空负压采血管，做好标记，采集监测对象空腹静脉血5mL。然后置于室温数小时待血完全凝固。1500rpm～2000rpm离心10min，收集血清分装于3支带外螺旋盖的冻存管中，做好标记。2.环境标本环境标本采样液可使用Hank's或Eagle's等培养液加入以下抗菌素和0.5%BSA：氨苄青霉素(2x106IU/L)、链霉素(200mg/L)、多粘菌素B(2x106IU/L)、庆大霉素(250mg/L)、制霉菌素(0.5x106IU/L)、盐酸氧氟沙星(60mg/L)、磺胺甲基异恶唑(0.2g/L)（1）水标本在禽类活动或笼具旁的水沟或水池的不同部位共收集水标本15-20ml置于50ml外螺旋盖的管内。水样标本到实验室后应在采样管中加入上述抗生素和0.5%BSA，再进行分装。呼吸道和环境标本要在无菌条件下反复吹打收集的溶液，以便打碎粘液和固体，置4℃待其自然沉淀5～10min，取上液分装。分装好留1份进行核酸检测。（2）笼具表面标本用沾有采样液的带有聚丙烯纤维头的拭子擦拭笼具表面3-5个不同部位，然后将擦拭过的拭子放入含5ml采样液的采样管中，尾部弃去。（二）标本保存和运输1．血清标本保存可置4℃存放3天，存放超过3天需置-20℃或以下保存。2.标本运输标本放入专用运输箱内（或疫苗冷藏包），放入冰排，然后以柔软物质填充，13内衬具吸水和缓冲能力的材料。同时寄送标本登记表。异地运输可以采用邮寄或快递的方法，运输要求符合国家生物安全有关规定。病原学标本按B类感染性物质进行运输，航空采用UN3373包装。（三）标本接收单位和联系方式国家流感中心联系方式为：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家流感中心地址：北京市宣武区迎新街100号329室联系电话：[phone]传真：[phone]结果提交邮箱：血清学监测结果提交邮箱：[e-mail]，病原学监测结果提交邮箱：[e-mail]。附件2、实验室操作方法简介一、马红细胞血凝抑制试验检测禽流感抗体（一）生物安全要求禽流感H5N1亚型检测抗原的灭活需要在BSL-3级实验室进行。其余操作均在BSL-2级实验室进行。（二）材料1．抗原：灭活的H5N1流感病毒。2．血清：（1）阳性对照血清；阴性对照血清（2）待检血清3．其他主要试剂：（1）马红细胞（1:1的比例保存于阿氏液中，建议采血后72小时内使用）（2）磷酸盐缓冲液（PH7.2PBS）：0.01M；（3）牛血清白蛋白（BSA）；（4）霍乱滤液（RDE）4．其他：14（1）“V”型96孔微量板（2）37℃及56℃水浴锅（3）台式离心机（4）多道可调加样器（5）离心管（三）质量控制1、对照血清每块96孔板上均需要设立阳性对照和阴性对照，同批次的阳性对照结果滴度应保持2倍以内。2、红细胞对照实验可根据红细胞对照来判断反应时间，尽可能在每块96孔板上设计一孔红细胞对照（PBS+1%红细胞悬液）。3、病毒回滴一个红细胞凝集单位指能引起等量标准化的红细胞凝集时病毒的量。进行红细胞凝集抑制试验时一般用4个红细胞凝集单位（指25μL体积中含有4个红细胞凝集单位）的病毒量。（四）实验步骤1．血清处理（1）用单道加样器吸出1体积血清置于无菌Eppendorf管内，换滴头加入4体积RDE，吹打混匀。（2）置37℃水浴16～18h。（3）从37℃水浴取出后置56℃水浴30min灭活。（4）马红细胞吸附：瞬时离心，待冷却后加入清洗后的浓红细胞达20%（每100µLRDE处理过的血清加入20µL清洗后的浓红细胞）。混匀后室温吸附1h。（5）2000rpm离心5min。（6）小心吸取上清液至干净离心管中备用。如不需立即检测可放4℃保存。2．马红细胞的采集及1%马红细胞悬液的配备（1）在注射器里放入一定体积的阿氏液，从颈静脉处采集马血后放入容器15中，轻柔混匀，如阿氏液不足则需补足（阿氏液和红细胞的比例为1:1）。（2）采