UPLC系统使用与维护-20110518

UltraPerformanceLC®实验技术与仪器维护实验技术与仪器维护实验技术与仪器维护实验技术与仪器维护WatersSolutionCenter©2011WatersCorporation1WatersSolutionCenter黄倩黄倩黄倩黄倩2011.5.18内容提要内容提要内容提要内容提要
对对对对UPLC理念的理解理念的理解理念的理解理念的理解—ACQUITYUPLC7年回顾年回顾年回顾年回顾—要点要点要点要点:如何实现小颗粒填料的益处如何实现小颗粒填料的益处如何实现小颗粒填料的益处如何实现小颗粒填料的益处
ACQUITYUPLC®实验技术要点实验技术要点实验技术要点实验技术要点©2011WatersCorporation2—仪器启动与操作注意事项仪器启动与操作注意事项仪器启动与操作注意事项仪器启动与操作注意事项—采样参数设置采样参数设置采样参数设置采样参数设置—常见问题与故障排除常见问题与故障排除常见问题与故障排除常见问题与故障排除©2011WatersCorporation3©2011WatersCorporation4©2011WatersCorporation57年来不断丰富和完善年来不断丰富和完善年来不断丰富和完善年来不断丰富和完善UPLC―扩展应用领域扩展应用领域扩展应用领域扩展应用领域©2011WatersCorporation62010年推出年推出年推出年推出ACQUITYUPLCH-Class系统系统系统系统
四元溶剂管理器四元溶剂管理器四元溶剂管理器四元溶剂管理器(QSM)
样品管理器样品管理器样品管理器样品管理器–流路通过进样针流路通过进样针流路通过进样针流路通过进样针(SM-FTN)
色谱柱柱温箱色谱柱柱温箱色谱柱柱温箱色谱柱柱温箱(CH-A)
支持所有现有的支持所有现有的支持所有现有的支持所有现有的ACQUITY检测器检测器检测器检测器—PDA和和和和PDAeλ©2011WatersCorporation7—PDA和和和和PDAeλ—TUV—FLR—ELSD—SQD和和和和TQD©2011WatersCorporation8UPLC溶剂管理器对比溶剂管理器对比溶剂管理器对比溶剂管理器对比ACQUITYUPLCACQUITYUPLCH-Class溶剂管理器设计溶剂管理器设计溶剂管理器设计溶剂管理器设计二元二元二元二元—2solvents四元四元四元四元—4solvents溶剂总数溶剂总数溶剂总数溶剂总数SolventsA1或或或或A2和和和和B1或或或或B2SolventsA,B,C,D(SolventsD1-6,使用使用使用使用SSV选件选件选件选件)©2011WatersCorporation9溶剂混合模式溶剂混合模式溶剂混合模式溶剂混合模式高压混合高压混合高压混合高压混合低压混合低压混合低压混合低压混合系统体积系统体积系统体积系统体积120uL标准配置标准配置标准配置标准配置400uL标准配置标准配置标准配置标准配置压力压力压力压力/流速性能流速性能流速性能流速性能15,000psi最高到最高到最高到最高到1mL/min9,000psi最高到最高到最高到最高到2mL/min流速范围流速范围流速范围流速范围0.01-2mL/minUPLC样品管理器对比样品管理器对比样品管理器对比样品管理器对比ACQUITYUPLCACQUITYUPLCH-Class进样模式进样模式进样模式进样模式满环和部分环方式满环和部分环方式满环和部分环方式满环和部分环方式流路通过针方式流路通过针方式流路通过针方式流路通过针方式支持提前载样和定量环离线支持提前载样和定量环离线支持提前载样和定量环离线支持提前载样和定量环离线最大体积最大体积最大体积最大体积0.1-10uL标配标配标配标配,最高可达最高可达最高可达最高可达250µL(选用定量环选用定量环选用定量环选用定量环)0.1-10uL标配标配标配标配,最高可达最高可达最高可达最高可达250µL(选用定量环选用定量环选用定量环选用定量环)低于低于低于低于1%RSD©2011WatersCorporation10精度精度精度精度低于低于低于低于1%RSD(10–75%定量环体积定量环体积定量环体积定量环体积,for2-250μL)0.3%RSD,满环方式满环方式满环方式满环方式1%,1-10µL洗针液洗针液洗针液洗针液2种种种种–强洗和弱洗强洗和弱洗强洗和弱洗强洗和弱洗一种一种一种一种交叉污染交叉污染交叉污染交叉污染0.005%0.005%进样循环时间进样循环时间进样循环时间进样循环时间15秒秒秒秒,各次进样之间使用各次进样之间使用各次进样之间使用各次进样之间使用“loadahead”功能功能功能功能30秒秒秒秒,各次进样之间使用各次进样之间使用各次进样之间使用各次进样之间使用““““loadahead”功能功能功能功能进样机制进样机制进样机制进样机制XYZZ’XYZRθACQUITYUPLC和和和和ACQUITYUPLCH-Class结果对比结果对比结果对比结果对比WhichIs©2011WatersCorporation11IsWhich?内容提要内容提要内容提要内容提要
对对对对UPLC理念的理解理念的理解理念的理解理念的理解—ACQUITYUPLC7年回顾年回顾年回顾年回顾—要点要点要点要点:如何实现小颗粒填料的益处如何实现小颗粒填料的益处如何实现小颗粒填料的益处如何实现小颗粒填料的益处
ACQUITYUPLC®实验技术要点实验技术要点实验技术要点实验技术要点©2011WatersCorporation12—仪器启动与操作注意事项仪器启动与操作注意事项仪器启动与操作注意事项仪器启动与操作注意事项—采样参数设置采样参数设置采样参数设置采样参数设置—常见问题与故障排除常见问题与故障排除常见问题与故障排除常见问题与故障排除ACQUITYUPLC®彻底的创新彻底的创新彻底的创新彻底的创新
超高效液相色谱超高效液相色谱超高效液相色谱超高效液相色谱（（（（UltraPerformanceLC™））））是分离是分离是分离是分离科学中的一个全新类别科学中的一个全新类别科学中的一个全新类别科学中的一个全新类别，，，，它给实验室带来了新奇而强大的它给实验室带来了新奇而强大的它给实验室带来了新奇而强大的它给实验室带来了新奇而强大的能力能力能力能力。。。。UPLC™借助于借助于借助于借助于HPLC的理论及原理的理论及原理的理论及原理的理论及原理，，，，涵盖了小颗涵盖了小颗涵盖了小颗涵盖了小颗粒填料粒填料粒填料粒填料、、、、非常低系统体积及快速检测手段等全新技术非常低系统体积及快速检测手段等全新技术非常低系统体积及快速检测手段等全新技术非常低系统体积及快速检测手段等全新技术，，，，增增增增加了分析的通量加了分析的通量加了分析的通量加了分析的通量、、、、灵敏度及色谱峰容量灵敏度及色谱峰容量灵敏度及色谱峰容量灵敏度及色谱峰容量。。。。©2011WatersCorporation13
ACQUITYUltraPerformanceLC™系统的整体设计系统的整体设计系统的整体设计系统的整体设计可以控制并优化所有的参数可以控制并优化所有的参数可以控制并优化所有的参数可以控制并优化所有的参数，，，，以充分实现今天实验室中以充分实现今天实验室中以充分实现今天实验室中以充分实现今天实验室中UPLC技术所能带来的任何利益技术所能带来的任何利益技术所能带来的任何利益技术所能带来的任何利益。。。。范氏曲线的预言范氏曲线的预言范氏曲线的预言范氏曲线的预言:更小的颗粒度的益处更小的颗粒度的益处更小的颗粒度的益处更小的颗粒度的益处被仪器及色谱柱被仪器及色谱柱被仪器及色谱柱被仪器及色谱柱被仪器及色谱柱被仪器及色谱柱被仪器及色谱柱被仪器及色谱柱的耐压限所限制的耐压限所限制的耐压限所限制的耐压限所限制的耐压限所限制的耐压限所限制的耐压限所限制的耐压限所限制©2011WatersCorporation14用用用用UPLC®技术建造分离度技术建造分离度技术建造分离度技术建造分离度114+−=kkNRsαα©2011WatersCorporation15对分离度的影响对分离度的影响对分离度的影响对分离度的影响%增加的百分数增加的百分数增加的百分数增加的百分数DoubleN20-40%Doublek15-20%Doublea400%在在在在UPLC®分离中最大化分离中最大化分离中最大化分离中最大化:•超低扩散系统超低扩散系统超低扩散系统超低扩散系统•小颗粒小颗粒小颗粒小颗粒(2µm)•更高耐压能力更高耐压能力更高耐压能力更高耐压能力•精心设计的色谱柱精心设计的色谱柱精心设计的色谱柱精心设计的色谱柱在在在在UPLC®分离中最大化分离中最大化分离中最大化分离中最大化:•增加的柱化学增加的柱化学增加的柱化学增加的柱化学•多种填料基质多种填料基质多种填料基质多种填料基质•更宽的可利用的更宽的可利用的更宽的可利用的更宽的可利用的pH范围范围范围范围•更高的保留特性更高的保留特性更高的保留特性更高的保留特性谱带扩展的原因是什么谱带扩展的原因是什么谱带扩展的原因是什么谱带扩展的原因是什么????实际测得的实际测得的实际测得的实际测得的vanDeemter曲线曲线曲线曲线将所有原因的总和将所有原因的总和将所有原因的总和将所有原因的总和(变化总和变化总和变化总和变化总和)定量化定量化定量化定量化极尖锐狭窄的峰极尖锐狭窄的峰极尖锐狭窄的峰极尖锐狭窄的峰(N)只能在尽可能低的下述两者同时实现之时出现只能在尽可能低的下述两者同时实现之时出现只能在尽可能低的下述两者同时实现之时出现只能在尽可能低的下述两者同时实现之时出现谱带扩展的来源谱带扩展的来源谱带扩展的来源谱带扩展的来源©2011WatersCorporation16只能在尽可能低的下述两者同时实现之时出现只能在尽可能低的下述两者同时实现之时出现只能在尽可能低的下述两者同时实现之时出现只能在尽可能低的下述两者同时实现之时出现这就是这就是这就是这就是ACQUITYUPLC®““““柱外效应柱外效应柱外效应柱外效应””””(仪器仪器仪器仪器)整体设计整体设计整体设计整体设计色谱柱色谱柱色谱柱色谱柱柱外效应和色谱柱的贡献柱外效应和色谱柱的贡献柱外效应和色谱柱的贡献柱外效应和色谱柱的贡献????““““柱外效应柱外效应柱外效应柱外效应””””色谱柱色谱柱色谱柱色谱柱(仪器贡献仪器贡献仪器贡献仪器贡献)贡献贡献贡献贡献为了实现为了实现为了实现为了实现UPLC®的性能的性能的性能的性能,你必须你必须你必须你必须使使使使仪器仪器仪器仪器和和和和色谱柱色谱柱色谱柱色谱柱都最优化都最优化都最优化都最优化©2011WatersCorporation17----进样器进样器进样器进样器----颗粒颗粒颗粒颗粒////尺寸尺寸尺寸尺寸////分布分布分布分布----管路管路管路管路((((内径内径内径内径xxxx长度长度长度长度))))----柱床填充的均匀性柱床填充的均匀性柱床填充的均匀性柱床填充的均匀性----联接联接联接联接----线速度线速度线速度线速度----检测池检测池检测池检测池----质量传递质量传递质量传递质量传递----数据采集速率数据采集速率数据采集速率数据采集速率----柱体积柱体积柱体积柱体积0.0120.0140.0160.0180.0200.022UPLC®色谱柱在色谱柱在色谱柱在色谱柱在HPLC系统系统系统系统上上上上:好处何在好处何在好处何在好处何在?0.0120.0140.0160.0180.0200.022ACQUITYUPLC®BEHC182.1x50mm,1.7µmF=0.3mL/minPSIMAX=4,200T(4)=1.63N(4)=5,400Rs(2,3)=0.97XTerra®MSC182.1x50mm,2.5µmF=0.5mL/minPSIMAX=3,950T(4)=1.30N(4)=4,100Rs(2,3)=1.101234234©