微生物实验课件

中心实验室提供微生物学实验教学课件基础生物学实验教学中心教师：姚璐晔Page2目录实验一培养基的配置、分装和灭菌实验二环境中微生物的检测和菌落识别实验三微生物的纯种分离实验四细菌染色法和光学显微镜的使用实验五微生物的间接计数法——水中细菌总数的测定实验六放线菌和真菌的培养和形态观察实验七微生物显微镜直接计数法实验八细菌芽孢染色法实验九微生物生长量的测定和生长曲线的绘制实验十物理、化学因素对微生物生长的影响实验十一细菌鉴定中的生理生化反应实验十二食用菌菌种的分离和制种技术实验十三环境中细菌分离鉴定综合实验基础生物学实验教学中心教师：姚璐晔Page3实验一培养基的配置、分装与灭菌实验目的实验原理实验器材实验方法注意事项思考题基础生物学实验教学中心教师：姚璐晔Page4实验一培养基的配置、分装与灭菌实验目的明确培养基的配制原则；掌握配制培养基的一般方法和步骤；了解高压蒸汽灭菌的基本原理及应用范围；掌握高压蒸汽灭菌技术，了解几种常用灭菌方法。基础生物学实验教学中心教师：姚璐晔Page5实验一培养基的配置、分装与灭菌实验原理培养基是按照微生物生长繁殖或积累代谢产物所需的各种营养物质，用人工方法配制而成的一种基质。培养基的种类繁多，根据培养基的成分、物理性状不同，可分为天然培养基、合成培养基、半合成培养基、固体培养基、半固体培养基和液体培养基。灭菌是指应用物理或化学的方法，杀灭物体表面和内部一切微生物营养体、芽孢和孢子。有干热灭菌法和湿热灭菌法。基础生物学实验教学中心教师：姚璐晔Page6实验一培养基的配置、分装与灭菌实验器材药品和试剂：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、10％NaOH溶液、10％盐酸溶液。器材：天平、药匙、瓷缸、玻璃棒、电炉、PH试纸、试管、三角瓶、分装漏斗、牛皮纸、棉花、线绳、干燥箱、高压锅。基础生物学实验教学中心教师：姚璐晔Page7实验一培养基的配置、分装与灭菌实验方法培养基的制备过程：称量溶解定容，调pH分装，包扎灭菌若有不溶物则要求过滤基础生物学实验教学中心教师：姚璐晔Page8实验一培养基的配置、分装与灭菌实验方法基础生物学实验教学中心教师：姚璐晔Page9实验一培养基的配置、分装与灭菌实验方法高压蒸汽灭菌，121℃灭菌20分钟基础生物学实验教学中心教师：姚璐晔Page10实验一培养基的配置、分装与灭菌注意事项称取药品时严防药品混杂，一把牛角匙称一种药品；蛋白胨极易吸湿，称取动作要迅速；配制固体培养基时，先将其他药品加热溶解到快沸时，再将称好的琼脂加入，继续加热至琼脂完全熔化，要求不断搅拌，以免糊底，并防止沸腾外溢；分装量根据试管大小和实际需要而定，固体培养基装量约为管高的1/5，液体培养基约为管高的1/4，三角瓶不超过瓶体的1/2；分装时不要将培养基沾在管（瓶）口上，以免引起污染。基础生物学实验教学中心教师：姚璐晔Page11实验一培养基的配置、分装与灭菌思考题1.思考牛肉膏蛋白胨培养基属于何种培养基？2.为什么湿热灭菌比干热灭菌法更有效？基础生物学实验教学中心教师：姚璐晔Page12实验二环境中微生物的监测与菌落识别实验目的实验原理实验器材实验方法实验结果注意事项思考题基础生物学实验教学中心教师：姚璐晔Page13实验二环境中微生物的监测与菌落识别实验目的掌握各种微生物接种的基本操作技术；初步了解周围环境中微生物的分布状况；熟悉四大类微生物菌落的形态特征。基础生物学实验教学中心教师：姚璐晔Page14实验二环境中微生物的监测与菌落识别实验原理在我们周围环境中存在着种类繁多、数量庞大的微生物，他们很小，人们用肉眼看不到，将他们在一定的温度下培养一段时间，可繁殖成一个个肉眼可见的细胞群体，就可以进行鉴别。接种是指在无菌操作条件下，将某种微生物的纯种移接到适合微生物其生长的新鲜培养基中或生物体内的一种操作过程。实验室常用的接种方法有斜面接种、穿刺接种、三点接种和液体接种。基础生物学实验教学中心教师：姚璐晔Page15实验二环境中微生物的监测与菌落识别实验器材菌种：实验室环境微生物、大肠杆菌、酿酒酵母、放线菌及霉菌。培养基：马铃薯固体培养基、牛肉膏蛋白胨固体培养基、高氏一号固体培养基其他：无菌培养皿、无菌棉签、火柴、超净工作台及恒温培养箱。基础生物学实验教学中心教师：姚璐晔Page16实验二环境中微生物的监测与菌落识别实验方法斜面接种基础生物学实验教学中心教师：姚璐晔Page17实验二环境中微生物的监测与菌落识别实验方法液体接种斜面液体培养基接种环将接种环送入液体培养基中时使环在液体与管壁接触的地方轻轻磨擦，使菌体分散，然后塞上棉塞，再轻轻摇动均匀，即可培养。如果菌种是培养在液体培养基中时，一般用移液管或滴管接种。基础生物学实验教学中心教师：姚璐晔Page18实验二环境中微生物的监测与菌落识别实验方法穿刺接种用接种针挑取菌种后，插入固体培养基内（不要刺到底部），再沿原路拔出。此法用于厌气性细菌接种、检查细菌的运动能力。基础生物学实验教学中心教师：姚璐晔Page19实验二环境中微生物的监测与菌落识别实验方法平板接种（1）斜面接平板a.划线法：见平板划线分离法。b.点种法：常用于观察霉菌和酵母细胞，轻点在平板的表面（根霉点一点，曲霉、酵母可点3-4点）。（2）平板接斜面一般是将经平板分散培养得到的单菌落接种到斜面，以便作鉴定或扩大培养、保存之用。基础生物学实验教学中心教师：姚璐晔Page20实验二环境中微生物的监测与菌落识别实验结果环境中微生物放线菌酵母细菌霉菌基础生物学实验教学中心教师：姚璐晔Page21实验二环境中微生物的监测与菌落识别注意事项用于倒平板的培养基一定要彻底融化，否则会在所倒的平板培养基表面出现为融化的琼脂快。而且，倒平板时的培养基温度不能过高（50~60℃为宜），否则会在皿盖内侧形成较多的冷凝水或在凝固的平板表面形成许多冷凝水微滴，不利于单菌落的形成。在无菌操作到平板的过程中，切忌用手抓、握三角瓶的瓶口处，以防灼热的瓶口端烫伤手指。同时，手指上的微生物也会污染瓶的口端，造成严重的操作污染等。基础生物学实验教学中心教师：姚璐晔Page22实验二环境中微生物的监测与菌落识别思考题1。在高倍镜或油镜下如何区分放线菌的基内菌丝和气生菌丝?2。酵母菌的假菌丝是怎样形成的?与霉菌的真菌丝有何区别?基础生物学实验教学中心教师：姚璐晔Page23实验三微生物的纯种分离法实验目的实验原理实验器材实验方法实验结果注意事项思考题基础生物学实验教学中心教师：姚璐晔Page24了解平板划线法分离菌种的基本原理及操作；了解用浇注平板法和涂布平板法分离微生物纯种的原理及操作。实验三微生物的纯种分离法实验目的基础生物学实验教学中心教师：姚璐晔Page25实验三微生物的纯种分离法实验原理自然界中，绝大多数微生物都是混杂生活在一起的；必须从混杂的微生物类群中分离以得到只含有这一种微生物的纯培养物，这种获得纯培养物的方法称为微生物的分离与纯化。一般根据该微生物营养、培养特点、对某种抑制剂的耐受性不同及对某种环境条件要求不同，制作或设置一些选择性培养基及选择性培养条件，再用稀释涂布平板法或稀释混合平板法或划线法分离，纯化该微生物，直至得到该纯种菌株。基础生物学实验教学中心教师：姚璐晔Page26实验三微生物的纯种分离法实验器材样品：土样培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、马铃薯葡萄糖琼脂培养基、豆芽汁培养基。其它：盛9mL无菌水的试管、盛90mL无菌水并带有玻璃珠的三角瓶、无菌玻璃涂棒、无菌吸管、接种环、无菌培养皿。基础生物学实验教学中心教师：姚璐晔Page27实验三微生物的纯种分离法实验方法稀释平板法图14-1从土壤中分离微生物操作过程基础生物学实验教学中心教师：姚璐晔Page28实验三微生物的纯种分离法实验方法平板划线分离法交叉划线法连续划线法基础生物学实验教学中心教师：姚璐晔Page29实验三微生物的纯种分离法实验结果基础生物学实验教学中心教师：姚璐晔Page30实验三微生物的纯种分离法注意事项用于划线的接种环，环柄宜长些（约10cm），环口应十分圆滑，划线时环口与平板间的夹角应小些，动作要轻巧，以防划破平板。用于平板划线的培养基，琼脂含量宜高些（2%左右），否则会因平板太软而被划破。平板不能倒的太薄，最好在使用前一天倒好。为防平板表面产生冷凝水，倒平板前培养基温度不能太高。基础生物学实验教学中心教师：姚璐晔Page31实验三微生物的纯种分离法思考题1.在你所实验的三种培养基平板上长出的菌落属于哪个类群？简述它们的菌落形态特征。2.稀释分离时，为什么要将融化的琼脂培养基冷却到45～50℃左右才能倾入装有菌液的培养皿内？3.划线分离时，为什么每次都要将接种环上多余的菌体烧掉？划线为何不能重叠？4.培养时为什么要将培养皿倒置培养？基础生物学实验教学中心教师：姚璐晔Page32实验四细菌的染色法和光学显微镜的使用实验目的实验原理实验器材实验方法实验结果注意事项思考题基础生物学实验教学中心教师：姚璐晔Page33实验四细菌的染色法和光学显微镜的使用实验目的学习和掌握显微镜油镜的正确使用；学习细菌制片和单染色技术；观察细菌的三种基本形态；学习细菌的革兰氏染色原理和方法。基础生物学实验教学中心教师：姚璐晔Page34实验四细菌的染色法和光学显微镜的使用实验原理1.油镜物镜的工作原理使用油质作为玻片与接物镜之间的介质——油浸系可以增加显微镜的放大倍数可以增加视野的照明度可以增大显微镜的分辨率基础生物学实验教学中心教师：姚璐晔Page35实验四细菌的染色法和光学显微镜的使用实验原理油镜头的识别和重要参数•放大倍数•数值口径•工作距离基础生物学实验教学中心教师：姚璐晔Page36实验四细菌的染色法和光学显微镜的使用实验原理2.革兰氏染色原理G-菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质，而且肽聚糖层较薄、交联度低，故用乙醇脱色时溶解了类脂质，增加了细胞壁的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色，再经复红复染后就成红色。G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小，通透性降低，因此细菌仍保留初染时的颜色。基础生物学实验教学中心教师：姚璐晔Page37实验四细菌的染色法和光学显微镜的使用实验器材活材料：培养24小时的大肠杆菌金黄色葡萄球菌。染色液和试剂：结晶紫、碘液、95%酒精、石炭酸复红、蒸馏水、香柏油。器材：载玻片、接种杯、酒精灯、擦镜纸、显微镜。基础生物学实验教学中心教师：姚璐晔Page38实验四细菌的染色法和光学显微镜的使用实验方法1.革兰氏染色（1）涂片（2）晾干（3）固定（4）结晶紫染色：加适量（以盖满细菌涂面）的结晶紫染色液染色1min；水洗：倾去染色液，用水小心地冲洗。（5）媒染：碘液，媒染1min；水洗：用水洗去碘液。（6）脱色：将玻片倾斜，连续滴加95%乙醇脱色15~20s至流出液无色，立即水洗。（7）复染：滴加复红复染1min；水洗：用水洗去涂片上的复红染色液。（8）晾干：将染好的涂片用吸水纸吸干。（9）镜检：镜检时先用低倍，再用高倍，最后用油镜观察，并判断菌体的革兰氏染色结果。基础生物学实验教学中心教师：姚璐晔Page39实验四细菌的染色法和光学显微镜的使用实验方法2.油镜的使用方法（1）用低倍镜对光。最大光圈（2）低倍镜观察（寻找观察目标）。适当缩小光圈（3）高倍镜观察（选取理想的观察目标）。（4）油镜观察：高倍镜观察后-上升镜筒-油镜转至正下方，在载玻片上加一小滴油-小心地下降镜筒使镜头浸在油里-用粗螺旋将镜筒慢上升，寻找目标（物象）用细螺旋调节，使物象清晰-观察记录。最大光圈基础生物学实验教学中心教师：姚璐晔Page40实验四细菌的染色法和光学显微镜的使用实验结果革兰氏阳性球菌革兰氏阴性杆菌基础生物学实验教学中心教师：姚璐晔Page41实验四细菌的染色法和光学显微镜的使用注意事项观察完毕，上升镜筒，转动油镜物