血细胞

自动血细胞分析仪参数的临床应用湖南省人民医院欧阳显楚1953年世界上首次由厍尔特利用其于1947年发明的库尔特原理（单位容积内的细胞数量和大小计数）推出了ModeA型半自动血细胞计数仪，这种首创虽只有2个参数，但它的原理却开创了自动血细胞计数历史的新纪元。自那以后，随着科技飞速发展，使得制出来的血细胞计数仪的精密度、功能性以及参数的数量都有空前的扩充与发展。根据其原理结构，大致分为光学型(血细胞固定型西德HamosKope和日本岛津为代表，前者利用散光射计数，后者为利用计数板扫描，仿显微镜计数的原理)以及血细胞移动型(美国EEL：利用流体力学原理计数)、电阻型(美国coultercountter：利用血细胞通过微孔时瞬间的电阻变化，产生脉冲电流而计数)、电容型(ToaMicroCellCounter：利用电极间加高频，血细胞通过时，静电容量发生变化而计数)。术文仅就电阻型常用参数临床应用作介绍。1、应用参数的基本观点对参数的基本要求为准确、可信，只有在这个前提下才可结合临床应用。虽然当前的仪器都具有很高的精密度，但得出的参数则不免受到以下几个方面的因素影响，需加以考虑，这样才可以对分析认识参数有着明确的概念。1．1仪器的类型与参数分析可靠性密切相关半自动血细胞分析议：采用末梢血开放式检测，难以消除采血部位、针刺深度、采血局部的血液循环以及影响周围血循环池与边缘的因素等，再加上被稀释血液的预置浸泡于自身环境(渗透压的变化)难以一致的稀释液。而且此稀释标本上机检测前又要为两大分析系统进行一步稀释，这中间不可避免的数个环节，要保证分析参数的准确，可信度实在不易。全自动血细胞分析仪：标本自静脉采集、条形码全血标本充分合理的自动混匀(也可手动混合)后，会自动的被吸入-稀释-分流-检测-打印。全过程均为机器自动操纵，因而只要标本合格，其参数的结果准确性则不容怀疑。1．2对仪器的性能要做全而鉴定包括精度、互染、可比性、线性、漂移、异常样品的抗干扰影响即抗干扰能力等要按省卫生厅湘卫医发【2005】41号文件规定定期检查，达到规定要求才能使用。同时室内质控措施要坚持并有规范的记录。无室内质控或室内质控不达标绝不可轻易签发检验报告单。1．2对仪器的性能要做全而鉴定包括精度、互染、可比性、线性、漂移、异常样品的抗干扰影响即抗干扰能力等要按省卫生厅湘卫医发【2005】41号文件规定定期检查，达到规定要求才能使用。同时室内质控措施要坚持并有规范的记录。无室内质控或室内质控不达标绝不可轻易签发检验报告单。1．3标水的质量要求及采集方法等与参数的准确性有关特殊血液样品如白细胞过高、黄疸过深、血中冷凝集素过高、高球蛋白血症、有核红细胞增多，血小板增多对仪器分析所得的参数准确性有明显影响。1．4基本参数和衍生参数互相影响仪器检测四项基本参数：血红蛋白(HGB)、红细胞(RBC)、白细胞(WBC)及血小板(PLT)，其它的均为衍生参数。任一种基本参数的失真则由其衍生的参数必错，只有采取综合分析的观点才会得到全面、正确的概念。2、各项参数的代号、参考值及其简要临床意义2.1白细胞(3.2-9.7)×109／L静脉血较毛细血管血细胞数量略低。中档的血细胞分析仪是根据加入溶血剂后，白细胞膜通透性改变而发生的皱缩。不同类型的白细胞皱缩后，体积有明显的差别，每个皱缩白细胞通过血细胞分析仪的微孔时产生的脉冲信号经放大，甄别后，微机处理数据得其体积分布直方图。淋巴细胞群为35—90fl大小中间细胞群为90一160fl大小粒细胞群体160—450fl大小三群细胞的百分比与白细胞数量的乘积为其绝对数2.1.1绝对值LYM(淋巴细胞)(1.0-3.3)×109／LMID(中间细胞)(0.2—0.71×109／LGRAN(粒细胞)(1.8-6.4)×109／L2.1.2百分率LYM(淋巴细胞)18.7％一47％MID(中间细胞)3.5％。7.9％GRAN(粒细胞)46.0％一76.5％中间细胞群包括单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞或幼稚细胞。2.2红细胞男(4.0—5.5)×1012／L女(3.5—5.0)×1012／L2.3血红蛋白男120—160g／L女110—150g／L2.4红细胞比积(Hematocrit．HCT)男0.40—0.50女0.35—0.452.5平均红细胞体积(meanCorpuseularVolume．MCV)82—95fl通常MCV80fl称小RBC，95fl时称大RBC。MCV减少见于小细胞性贫血，如缺铁重症地贫、严重溶血。MCV增高见于大细胞性贫血、如巨幼红细胞贫血、网织红细胞过高、甲状腺功能低下，亦可出现于酒精中毒、重度吸烟者。2.6平均红细胞血红蛋白含量(meanCorpuscularhemoglobinMCH)MCH是由HGB／RBC求出，以Pg为计量单位(Picogram)正常27-31pg大细胞贫血则MCH轻度或明显增高，而小细胞低色索性贫血其值27pg。2.7平均红细胞血红蛋白浓度(meanCorpuscularhemoglobinConcentrationMCHC)。MCHC表示RBC每单位体积中Hb平均浓度，仪测为Hb／Hct计算而来，亦被认为由Hb的重量与RBC体积的比，其准确性取得于Hb、RBC和MCV的正确测量。其单位为g／L，正常320-360g／L。2．8红细胞体积分布宽度(RedCellvolumedistributionwidthRDW)RDW是代表RBC大小不等(异质性)变化的程度，山测定数万个红细胞体积大小的变异系数(CV％)来表示，它比血涂片上红细胞形态大小不均的观察更为客观、准确，RDW正常参数范围11.6-14.8％(15％)，其临床意义如下：2.8.1由于缺铁性贫血(IDA)的诊断与疗效观察，IDA病人RDW升高敏感性达96％，当给予铁剂治疗有效时，RDW将比给药前更大，以后逐渐降至正常水平。2.8.2用于小细胞低色素性贫血的鉴别诊断：IDA和轻型地中海贫血时，MCV均可减小。但IDA时，RDW增大，而轻型池中海贫血时RDW正常。2.8.3用于贫血分类(Bessman分类)类别MCVRDW正常→→缺铁性贫学↓↑巨幼细胞性贫血↑↑溶血性贫血↑↑铁粒幼细胞贫血→→再生障碍性贫血→↑单纯小细胞性贫血↓→注：→无变化，↑增大，↓减少2.9血小板计数(PhteletsPLT)(100-300)109／L2.10平均血小板体积(meanplateletsV01ume.MPV)正常参考值9.4-12.5fl，MPV是血小板体积直方图的平均值，要结合血小扳计数的变化才有价值。主要用于区别血小板减少的原因，当骨髓造血功能损伤致血小板减少时，MPV减少；当血小板在周围血液中破坏增多时，导致血小板减少，MPV增大，血小板分布异常致血小板减少时，MPV正常。MPV增大可作为骨髓造血功能恢复的较早期指征，骨髓造血功能衰竭时，MPV与PLT同时持续下降。造血功能抑制严重，MPV越小。当造血功能恢复时，MPV增大常先于PLT升高。此外，MPV增大也见于骨髓纤维化,原发性血小板减少性紫癜(ITP)、血栓性疾病及血栓前状态，脾切除、慢粒、巨大血小板综合征、镰刀细胞性贫血等。MPV减小见于脾亢、化疗后、再障、巨幼细胞性贫血。2.11血小板比积(Plateletcrit.Pct)男0.108—0.272％女0.144一O.282%PCT与PLT和MPV正相关，所以PLT、MPV的增减均可使PCT发生变化。PCT增高见于骨髓纤维化、脾切除、慢粒等。PCT减低见于再障，化疗后，血小扳减少症等。2.12血小板体积分布宽度(plateletvolunledistributionwidth，PDW)，正常值：0.155—0.181(以血小板体积变异系数cv％表示。PDW是反映血小板体别大小的异质性参数)。增大：急淋化疗后，巨幼细胞性贫血、慢粒、脾切除、巨大血小板综合症，血栓性疾病等2.13.1血细胞体积分布直方图基本概念直方图又称矩形或坐标图，纵坐标Y轴的高度代表相应通道中细胞数量(频率)的多少，x轴自左至右代表由小到大逐个排列的可容纳相应大小细胞的特定体积通道(以fl为单位)如：血小扳2-30fl，红细胞25-250fl，白细胞30-300fl。任何群体的峰值如左移或偏左为小细胞群，如右移或偏右为大细胞群，其方或右偏移的程度越大则其细胞峰大小的群体差异越明显。通常红细胞群体显正态分布。白细胞其亚群显正态多分布，血小板群体呈偏态分布。峰值窄而高则表明细胞分布范围窄亦即近似体积的细胞而集中，峰值宽而低则表面分布范围广，即不同大小体积的细胞多而分散或细胞的异质程度高，金字塔型其低部宽则表明其细胞的平均体积高，左偏态型则表明小细胞多，右偏态型则表明大细胞多。如出现正常峰值位置的改变或出现加峰或双峰则均为异常或有外源性群体的加入。2.13.2红细胞直方图正常人RBC直方图峰值一般在80-98fl范围，呈一正态单峰。当有小细胞性贫血时，RBC直方图峰值左移，且伴有PLT直方图尾部上扬，提示有些小RBC(35fl)落在PLT的20-35f1区域内，巨幼贫、肝病所致贫血的RBC直方图峰值右移，超过98fl提示大细胞性贫血。RBCM型(双峰)直方图，一个峰值在80fl左侧，显示小细胞性贫血特点，另一个峰值在80-98fl之间。像两个RBC群体的直方图叠加在一起，此种直方图见于贫血病人治疗恢复期或者缺铁性贫血伴巨细胞贫血。再生障碍性贫血为正细胞性贫血，RBC直方图异常改变。2.13.3白细胞体积分布直方图正常人细胞体积分布直方图可见两个明显分离的峰，左峰为小细胞胞群(淋巴细胞)右峰为大细胞群(粒细胞)，两峰之间为中间细胞群的分布。当WBC发生异常变化时，如白血病末梢血中出现幼稚细胞，就会看到WBC直方图的变化，WBC直方图出现任何异常时都应抹片染色镜检分类不可疏漏。异常WBC分布直方图有：大WBC增多直方图、小WBC增多直方图，急淋WBC直方图，急粒WBC直方图，慢粒及早幼粒细胞白血病WBC直方图等。2.13.4血小板体积分布直方图正常人血小板体积主要分布在2-20fl之间，21-30fl之间少量大血小板一般仪器以30fl为最大的分析界标。血小板体积增大时，直方图会出现明显的拖尾现象，有小红细胞或红细胞碎片干扰时，直方图尾部会抬高。3、使用血细胞分析仪应注意的几个主要问题：3.1操作人员上岗要仔细阅读仪器说明书了解仪器保养的要求及使用过程中注意事项及小故障排除方法等。要按湘卫医发【2005】4l号文件规定，定期检测仪器的各项性能，严守操作规程。参加室间质评调查，搞好室内质控，确保仪器正常运转，保证检测数据的可信性。3．2关于白细胞分类：首先必须明确，迄今为止世界上无论多先进的血细胞分析仪用于白细胞分类只能当作一种过筛手段，不能完全取代手工显微镜下分类。坚决反对有些单位使用白细胞分析仪后就一律不再作镜下复查和分类的错误倾向。当出现白细胞、红细胞、血红蛋白及血小板任何一项有明显升高或降低：白细胞分类出现异常结果；红细胞、白细胞和血小板的任何一个直方图出现异常图形以及仪器上显示警示信号(如flag等)时，更须用显微镜检查及分类。3．3EDTA·k2抗凝剂根据国际血液学标准化委员会(1CSH)1998年文件建议，血细胞计数应用EDTA·k2抗凝剂，用量为EDTA·K2H2O1.5-2.2mg可抗凝Iml血，不得使用肝素或枸橼酸纳等抗凝剂。推荐用抗凝静脉血作血液学的一般检查。谢谢！